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        肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞(CTC)與D-二聚體、纖維蛋白原及血小板水平的關(guān)系研究

        2019-01-18 05:27:42潘榮濤
        系統(tǒng)醫(yī)學 2018年23期
        關(guān)鍵詞:外周血肺癌腫瘤

        潘榮濤

        山東省泰山醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,山東泰安 271000

        肺癌是全球癌癥死亡的首要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,每年有超過 170萬人因肺癌死亡。在中國,肺癌是發(fā)病率最高的癌癥,2015年新發(fā)病例達73萬例。據(jù)報道,中國68%的肺癌患者在診斷時已屬晚期。病發(fā)后患者如未能得到及時有效治療,便會對其生命安全造成威脅。非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常見的類型,約占所有肺癌患者的 85%,其中25%~30%為鱗狀細胞癌,50%~65%為非鱗非小細胞肺癌。患者的生存率與診斷時的腫瘤分期和類型高度相關(guān)[1]。而凝血系統(tǒng)相關(guān)因子,如D-二聚體(D-D)、纖維蛋白原(FIB)及血小板水平(PLT)則能夠?qū)δ[瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響[2-3]。因此,臨床有必要圍繞肺癌患者外周血中CTC與D-D、FIB及PLT的關(guān)系開展研究,明確其相互之間的聯(lián)系。該院就2013年1月—2018年1月收治的100例肺癌患者病例資料開展研究,均檢測D-D、FIB及PLT等指標,旨在為明確肺癌患者外周血中CTC與D-D、FIB及PLT的關(guān)系,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        隨機抽取該院收治的100例肺癌患者病例資料進行整理分析,納入標準[4]:①患者均經(jīng)過醫(yī)院病理學檢查確診;②研究方案確定并經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準后實施;③患者及其家屬均簽署知情同意書。排除標準:①合并嚴重心腎肺等器官疾病者,如器官衰竭等;②合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病,精神狀態(tài)異常者;③合并血栓性疾病及凝血功能疾病;④研究前使用激素或短期內(nèi)應(yīng)用抗凝、止血藥物者;⑤參與其他研究者。100例患者中,男性58例,女42例,年齡 40~75歲,平均(57.4±1.4)歲;癌癥類型:鱗癌 45 例、腺癌 32 例、小細胞肺癌23例;采用國際肺癌相關(guān)標準進行TNM分期:Ⅰ期14例、Ⅱ期16例、Ⅲ期35例、Ⅳ期35例。

        1.2 方法

        D-D、FIB檢測儀器均為法國STAGO全自動血凝儀急性檢測,試劑則采用配套試劑;PLT水平檢測使用邁瑞B(yǎng)C6008全自動血細胞分析儀及其配套試劑進行檢測;采集患者清晨空腹靜脈血,觀察并檢測外周血中D-D、FIB及PLT水平,并采用免疫磁珠陰性分離及免疫細胞化學染色方法檢測CTC的表達,進一步分析CTC與D-D、FIB及PLT水平與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。具體操作如下:將血液與淋巴細胞分離液體恢復(fù)溫度18℃~25℃,取7.5 mL抗凝血與7.5 mL磷酸鹽緩沖液,在50 mL的離心管中充分混勻后,緩慢貼壁加入另一個裝有15 mL淋巴細胞分離液的分離管中,于正常室溫下400×g離心30 min。吸取環(huán)狀乳白色單個核細胞層,加入5倍體積的PBS混勻,于室溫下300×g離心15 min,抽取上清,沖洗2遍后將細胞沉淀,重懸與80 μL磁珠緩沖液中,加入由德國Miltenyi Biotec公司成長的CD45抗體20 μL,輕輕混勻后置入4℃冰箱中孵育15 min,后加入20倍體積的磁珠緩沖液,室溫下300×g離心15 min,棄上清,加入500 μL緩沖液重懸細胞,重復(fù)2遍,收集從分流柱下流出的液體,后離心10 min,將沉淀部分均勻涂抹于防脫載玻片,室溫下風干;4%多聚甲醛固定10 min,1×PBS液洗滌5 min,加入由美國Cell Signaling公司生產(chǎn)的鼠抗廣譜細胞角蛋白,保存于4℃冰箱中,孵育20 min,PBS浸洗,二氨基聯(lián)苯胺顯色,后進行仔細觀察。

        1.3 結(jié)果判定

        D-D正常范圍為0~0.55 mg/L、FIB正常范圍為1.8~3.5 g/L、PLT 水平正常范圍為 (125~350)×109/L。CTC陽性標準:細胞呈圓形、橢圓或長形,長徑>10 um,光鏡下可見完整細胞心態(tài)及細胞核;有完整的細胞膜,Pan-CK染色陽性,細胞質(zhì)呈黑色或褐色。有1~2名實驗人員在光鏡下仔細觀察細胞顯色情況[5]。

        1.4 統(tǒng)計方法

        該次研究在處理數(shù)據(jù)時采取SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)t標準差(x±s)表示,采取獨立配對t檢驗;計數(shù)數(shù)據(jù)以百分比(%)表示,采取χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 D-D、FIB與PLT水平表達情況

        100例肺癌患者D-D、FIB及PLT水平平均分別為(1.74±2.06)mg/L、(3.53±1.42)g/L、(311.25±135.69)×109/L,D-D、FIB 水平、PLT水平均與肺癌患者遠處轉(zhuǎn)移情況有關(guān)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

        表 1 D-D、FIB 與PLT水平表達情況(x±s)

        2.2 外周血中CTC與D-D、FIB及PLT水平之間的關(guān)系

        100例肺癌患者中,CTC陽性55例、CTC陰性45例,CTC陽性患者 D-D、FIB及 PLT水平分別為(2.32±2.42)mg/L、(3.75±1.45)g/L、(337.69±130.15)×109/L,CTC陰性患者D-D、FIB及PLT水平則分別為(0.94±1.03)mg/L、(3.12±1.24)g/L、(229.35±128.66)×109/L, 差異有統(tǒng)計學意義 (t=3.568、2.305、4.163,P=0.000、0.012、0.000)。

        2.3 肺癌患者的遠處轉(zhuǎn)移情況與CTC表達的關(guān)系

        有遠處轉(zhuǎn)移患者CTC陽性率92.86%(29/35),無遠處轉(zhuǎn)移患者CTC陽性率53.85%(35/65),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.099,P=0.008)。

        3 討論

        肺癌是臨床常見疾病,由吸煙、職業(yè)環(huán)境接觸、電離輻射、肺部慢性感染等內(nèi)外在因素導(dǎo)致,具有發(fā)病率高、死亡率高等特點[6]。病發(fā)后,患者可出現(xiàn)咳嗽、痰中帶血、咯血、胸痛、胸悶、氣急等臨床表現(xiàn),部分患者可伴隨肺炎、肺不張、惡性胸腔積液等疾病,嚴重影響機體生活質(zhì)量及生命健康[7]。據(jù)臨床資料[8-9]記載,肺癌患者中有近90%死亡是由腫瘤轉(zhuǎn)移導(dǎo)致,故而部分學者認為有效控制腫瘤轉(zhuǎn)移可穩(wěn)定患者病情,為后續(xù)治療建立良好基礎(chǔ)。而CTC則是癌癥細胞形成遠處轉(zhuǎn)移病灶的關(guān)鍵,故而有必要對其開展相關(guān)研究,進一步明確CTC與癌癥患者之間的關(guān)系,判斷是否能夠?qū)⑵渥鳛闄z測腫瘤治療方案制定及評估療效的重要指標。

        該研究中,存在遠處轉(zhuǎn)移患者中,CTC陽性率為92.86%,明顯高于無轉(zhuǎn)移患者的53.85%,對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 而患者D-D、FIB及PLT水平等指標在有無遠處轉(zhuǎn)移的條件下均差異明顯,可通過觀察D-D、FIB及PLT水平等指標來對患者病情及轉(zhuǎn)移情況進行評判。在臨床中D-D指標作為交聯(lián)纖維蛋白經(jīng)纖溶酶分解后的最終末產(chǎn)物,是機體內(nèi)部高凝狀態(tài)及纖溶系統(tǒng)亢進的重要分子標志物,一旦出現(xiàn)升高則表明繼發(fā)性纖溶亢進。FIB則為一種在肝內(nèi)合成的急性期反應(yīng)蛋白,是血漿含量最高的凝血因子,也是臨床中各內(nèi)科疾病的重要檢測指標。據(jù)了解[10],腫瘤細胞可分泌PLT凝集活性因子,并促進PLT在腫瘤細胞表面黏附、聚集,同時釋放出PLT源性生長因子,能夠促使腫瘤在轉(zhuǎn)移部位生長。該研究結(jié)果提示,CTC陽性患者D-D、FIB及PLT水平分別為 (2.32±2.42)mg/L、(3.75±1.45)g/L、(337.69±130.15)×109/L,CTC陰性患者D-D、FIB及PLT水平則分別為(0.94±1.03)mg/L、(3.12±1.24)g/L、(229.35±128.66)×109/L,證實D-D、FIB及PLT水平等指標均可參與并促進CTC的轉(zhuǎn)移和生長;且通過觀察臨床其他學者圍繞肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞(CTC)與D-二聚體、纖維蛋白原及血小板水平的關(guān)系開展研究結(jié)果來看,其結(jié)果與該研究結(jié)果相同,均認為D-D、FIB及PLT水平等治療參與并促進CTC的轉(zhuǎn)移和生長。但是由于目前臨床針對上述理論開展研究相對較少,其相互之間的作用及影響仍舊有待進一步研究查證。

        綜上所述,針對肺癌患者實施預(yù)防性抗凝治療能夠提高治療效果,通過改善D-D、FIB及PLT水平等指標,可減少腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,來實現(xiàn)減緩腫瘤進展的目的,使患者生存時間得以延長。

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