郝 哲 張素娜 劉 元 王麗軍

(中國(guó)人民解放軍第153中心醫(yī)院 鄭州 450042)

奧硝唑氯化鈉注射液在臨床上廣泛用于治療敏感厭氧菌所引起的腹部、盆腔、口腔、外科和腦部等部位的多種感染性疾病[1]。它的主要已知雜質(zhì)有2-甲基-5-硝基咪唑及2-甲基-5-硝基-1-(2,3-二羥基丙基)咪唑[2]。有關(guān)物質(zhì)量的多少直接影響到臨床療效及不良反應(yīng)發(fā)生率，因此有必要優(yōu)化生產(chǎn)工藝，制備出優(yōu)質(zhì)高效的制劑。在原標(biāo)準(zhǔn)WS-043(X-039)-2002中規(guī)定pH范圍為3.5～5.5，在標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-035)-2012Z中規(guī)定pH值范圍為3.0～4.0，pH值范圍縮小，表明pH值對(duì)奧硝唑氯化鈉注射液質(zhì)量的影響起著至關(guān)重要的作用。人體可耐受pH范圍為4～9，pH<4時(shí)，易導(dǎo)致刺激疼痛及靜脈炎[3]。本文結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定最佳pH值，優(yōu)化最佳工藝，保證產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床用藥安全可靠。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀，包括SPD-10A型紫外檢測(cè)器、手動(dòng)進(jìn)樣器、LabSoulations型色譜工作站(日本島津公司)；BT 125D型電子天平(賽多利斯公司)。甲醇為色譜純，水為超純水。

奧硝唑氯化鈉注射液，批號(hào)：1504231、1504232、1504233，規(guī)格：100ml ： 奧硝唑0.5g與氯化鈉0.9g，本院自制。

奧硝唑?qū)φ掌罚?hào)：100608-201301，規(guī)格：100mg，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：WondaSil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相，流速為1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為318nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備

取奧硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每1ml中含奧硝唑100μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，圖譜見(jiàn)圖1。

取2-甲基-5-硝基咪唑?qū)φ掌愤m量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含2-甲基-5-硝基咪唑10μg的溶液。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品，加適量0.1mol/L鹽酸，調(diào)節(jié)溶液pH值分別為3.0，3.2，3.4，3.6，3.8，4.0。分別精密量取各供試品溶液適量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含奧硝唑100μg的溶液，圖譜見(jiàn)圖1。

2.2.3有關(guān)物質(zhì)對(duì)照溶液的制備

分別精密量取各供試品溶液1ml，置100ml量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得，圖譜見(jiàn)圖1。

a 奧硝唑?qū)φ掌啡芤?/p>

b 奧硝唑有關(guān)物質(zhì)對(duì)照溶液

c 氯化鈉溶液

d 2-甲基-5-硝基咪唑溶液

e 奧硝唑有關(guān)物質(zhì)溶液

f 奧硝唑含量測(cè)定溶液

注：1-NaCl；2-2-甲基-5-硝基咪唑3；4-有關(guān)物質(zhì)；5-奧硝唑。

2.2.4空白試驗(yàn)

精密量取0.9%氯化鈉溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，圖譜見(jiàn)圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱定奧硝唑?qū)φ掌?0.26mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0分別置10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。5種不同濃度的對(duì)照品溶液各精密量取20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。每個(gè)濃度平行進(jìn)樣3次，取其平均峰面積，以色譜峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=60224X-21385 ，r=0.9999，表明樣品濃度在61.6μg·ml-1～143.6μg·ml-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精取奧硝唑氯化鈉注射液(1504231)適量，按照含量測(cè)定方法配成稀釋溶液，按上述測(cè)定方法測(cè)定，平行操作5份，計(jì)算平均峰面積及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果RSD為0.07%，表明該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取奧硝唑氯化鈉注射液(1504231)適量，按照含量測(cè)定方法配成稀釋溶液分別于0、2、4、6、8h測(cè)定奧硝唑的含量，考察供試品溶液穩(wěn)定性，計(jì)算平均峰面積及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果結(jié)果RSD為0.10%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取奧硝唑適量，加入適量的氯化鈉(氯化鈉按100%投料)，制備含奧硝唑約相當(dāng)于標(biāo)示量的80%、100%、120%的供試品溶液，每一濃度平行制備3份，照含量測(cè)定方法測(cè)定。計(jì)算平均回收率及RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

序號(hào)實(shí)際濃度(μg/ml)測(cè)得濃度(μg/ml)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)180.1579.8799.65280.2380.1299.86379.9879.8199.794100.14100.0199.875100.23100.1299.896101.0899.8998.827120.34120.0599.768120.17120.0699.919120.24120.0799.8699.70.34

2.7 定量限和檢測(cè)限

取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，分別加適量水稀釋后測(cè)定，在信噪比為10∶1和信噪比為3∶1時(shí)計(jì)算定量限和檢測(cè)限分別為1.2ng和0.4ng。

2.8 測(cè)定結(jié)果

取不同pH值的供試品溶液，依法測(cè)定，有關(guān)物質(zhì)以自身對(duì)照法計(jì)算，含量測(cè)定以外標(biāo)法計(jì)算，見(jiàn)表2、圖2。

表2 不同pH值測(cè)定結(jié)果

pH值3.03.23.43.63.84.0有關(guān)物質(zhì)(≤1.0%)0.830.800.770.540.820.86含量(%)98.098.198.298.598.398.4

圖2 不同pH值測(cè)定結(jié)果圖

3 結(jié)論

由結(jié)果可知，奧硝唑的含量與有關(guān)物質(zhì)之間存在一定的相關(guān)性，有關(guān)物質(zhì)量越多，含量相對(duì)略低，但不同pH值下，奧硝唑含量的RSD%為0.19%，奧硝唑有關(guān)物質(zhì)的RSD%為15.1%。表明不同pH值對(duì)含量影響不大，但對(duì)有關(guān)物質(zhì)影響較大，當(dāng)pH值為3.6時(shí)有關(guān)物質(zhì)量最少，故實(shí)際生產(chǎn)中，控制pH值為3.6，確保制劑安全有效。