陳華

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤婦科，青海 西寧 810001)

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，以放射治療為主要治療手段，但不同的患者在接受相同根治量的放療計劃后，療效不盡相同，部分患者出現(xiàn)局部未控或轉(zhuǎn)移〔1,2〕。研究表明，腫瘤中廣泛存在乏氧細胞，可促進缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α表達水平上調(diào)，進而影響最終的放療效果〔2〕。細胞間黏附因子(ICAM)-3在腫瘤的增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色，其表達上調(diào)可顯著抑制放射后細胞凋亡，增加腫瘤的放射抗拒性〔3〕。已有研究證實〔4〕，不同海拔地區(qū)宮頸癌患者HIF-1α水平差異較大，而關(guān)于高原地區(qū)老年宮頸癌組織中HIF-1α、ICAM-3的表達及與放療敏感性關(guān)系的研究較少。本研究旨在探討HIF-1α、ICAM-3表達在高原地區(qū)老年宮頸癌放療敏感性預(yù)測中的價值，為高原地區(qū)老年宮頸癌的個性化治療提供參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年1月青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的高原地區(qū)老年宮頸鱗癌患者90例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實為宮頸鱗癌；(2)均為初診病例，納入研究前無放化療史及手術(shù)治療史；(3)確診后均行根治性放療及同步化療；(4)臨床資料完整；(5)患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他嚴(yán)重婦科疾病者；(2)合并其他系統(tǒng)腫瘤者；(3)非高原地區(qū)者；(4)未完成整個治療計劃者。入選的90例患者年齡60～75歲，平均(66.36±4.28)歲；腫瘤直徑≤4 cm者54例，>4 cm者36例；臨床分期：根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2015版宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，Ⅱa期18例，Ⅲa期30例，Ⅲb期42例；病理證實組織分化程度：高分化24例，中分化39例，低分化27例；影像學(xué)及病理檢查證實，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者69例。所有患者臨床癥狀均表現(xiàn)為不規(guī)則陰道出血或接觸性陰道出血、白帶增多、下腹墜痛、腰痛等。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1治療方法 所有患者均給予根治性放射治療及以鉑類為基礎(chǔ)的同步化療方案治療。放射治療方案：采用直線加速器外照射全盆腔，總劑量DT 50 Gy/25次/5 w(DT 25～30 Gy時中線遮擋4 cm)；3 w時，高劑量率內(nèi)照射(銥-192)，DT 6 Gy/次，1次/w；5～7 w時A點劑量：內(nèi)照射2/3，外照射1/3；B點劑量，內(nèi)照射1/3，外照射2/3)。所有患者放療同時，給予以鉑類為基礎(chǔ)的化療方案同步化療。

1.2.2免疫組化SP法檢測 所有患者均于放射治療前經(jīng)宮頸取腫瘤組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，防脫皮處理后采用免疫組化SP法檢測HIF-1α、ICAM-3的表達，兔抗人ICAM-3單克隆抗體和兔抗人HIF-1α單克隆抗體均購于上海萬疆生物技術(shù)有限公司，SP免疫組化檢測試劑盒購于上?？祈樕锟萍加邢薰?，以試劑盒內(nèi)配置的陽性切片為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗為陰性對照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。結(jié)果判斷：由2名高年資病理科醫(yī)師在光鏡下觀察，每張切片隨機取5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞，計算陽性細胞百分率；HIF-1α表達陽性為細胞質(zhì)著色呈棕黃顆粒，根據(jù)陽性細胞比例及染色強度進行判斷，陽性細胞<1%計0分，1%≤陽性細胞<10%計1分，10%≤陽性細胞<50%計2分，50%≤陽性細胞<80%計3分，陽性細胞≥80%計4分；染色強度：無染色計0分，弱染色計1分，中度染色計2分，強度染色計3分，根據(jù)細胞陽性率評分和染色強度評分判斷結(jié)果：1分為-，2～3分為+，4～5分為，6～7分為，≥4分為陽性表達。ICAM-3定位于細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒，染色細胞比例：<10%計0分，10%≤染色細胞比例<25%計1分，25%≤染色細胞比例<50%計2分，50%≤染色細胞比例<75%計3分，染色細胞比例≥75%計4分；染色強度：無染色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，褐黃色3分，根據(jù)染色細胞評分乘以染色強度評分判斷結(jié)果，0分為-，1～4分為+，5～8分為，9～12分為?！?分為陽性表達。

1.2.3放療敏感性評價 所有患者放療結(jié)束后至少隨訪(電話隨訪、回院復(fù)查)3個月。根據(jù)實體腫瘤客觀療效評價標(biāo)準(zhǔn)〔6〕評價放療效果，放療結(jié)束后3個月復(fù)查顯示原發(fā)病灶完全消退、盆腔內(nèi)未出現(xiàn)新病灶、無復(fù)發(fā)為放療敏感，放療結(jié)束后原發(fā)病灶殘留、無變化或3個月內(nèi)復(fù)發(fā)者為放射抗拒。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman相關(guān)系數(shù)分析HIF-1α、ICAM-3表達與放療敏感性的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1不同臨床分期患者HIF-1α、ICAM-3表達 三種不同臨床分期的宮頸癌組織中HIF-1α、ICAM-3陽性表達率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中Ⅲb期患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達率高于Ⅲa期和Ⅱa期患者，而Ⅲa期患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達率高于Ⅱa期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2不同組織分化程度患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達 三種不同組織分化程度患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中低分化患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達率高于中分化和高分化，且中分化高于高分化，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 HIF-1α、ICAM-3在不同臨床分期的宮頸癌組織中的表達〔n(%)〕

與Ⅱa期組比較：1)P<0.05；與Ⅲa期組比較：2)P<0.05

表2 不同組織分化程度患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達〔n(%)〕

與高分化組比較：1)P<0.05；與中分化組比較：2)P<0.05

2.3HIF-1α、ICAM-3表達與放療敏感性的關(guān)系 90例高原地區(qū)老年宮頸癌患者，放射治療結(jié)束后21例(23.33%)患者放射抗拒(其中14例原發(fā)灶殘留，3例原發(fā)灶無變化，4例放療結(jié)束后3個月內(nèi)復(fù)發(fā))，69例(76.67%)放療敏感。放療抗拒患者HIF-1α、ICAM-3陽性表達率高于放療敏感患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。相關(guān)性分析顯示，高原地區(qū)老年宮頸鱗癌組織HIF-1α、ICAM-3陽性表達率與放療敏感性呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.714、-0.722，均P<0.05)。

表3 HIF-1α、ICAM-3表達與放療敏感性的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

美國國立癌癥研究所(NCI)的調(diào)查資料顯示，每年新增的宮頸癌患者中，約25%的患者年齡>65歲；而因?qū)m頸癌死亡的病例中，約41%的患者年齡>65歲〔7〕。FIGO的調(diào)查表明，年齡>70歲的宮頸癌患者占全部宮頸癌的12%〔8〕。由于老年婦女已絕經(jīng)，多數(shù)宮頸已經(jīng)萎縮，患者宮頸腫瘤較小，陰道狹窄比例較高，臨床上對老年宮頸癌患者的治療多選擇放射治療，且提倡給予個性化放療方案，在放射治療前如能準(zhǔn)確檢測腫瘤的放療敏感性并制定個性化放療方案，則可大幅度提高臨床治療效果〔9〕。既往臨床醫(yī)師通常以腫瘤組織分化程度作為制定宮頸癌放療方案及療效評估的參考，但并沒有科學(xué)的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確判斷放療敏感性〔10〕。HIF-1α對氧具有極強的依賴性，已被公認(rèn)為是組織缺氧的內(nèi)在標(biāo)志物，參與了腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移和能量代謝過程，其異常表達與宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展有密切的關(guān)系〔11〕。ICAM-3作為免疫球蛋白超家族成員，已被證實與血液系統(tǒng)腫瘤、淋巴系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展相關(guān)，且參與了腫瘤免疫逃逸的過程〔12〕。本研究提示HIF-1α、ICAM-3在高原地區(qū)老年宮頸鱗癌的發(fā)展中扮演了重要角色。另外，本研究還表明HIF-1α、ICAM-3的表達情況對高原地區(qū)老年宮頸鱗癌的放療敏感性具有較高的預(yù)測價值。其原因可能是：在有氧條件照射時的放療敏感性是乏氧條件的3倍左右，由于高原地區(qū)海拔較高，空氣相對非高原地區(qū)更為稀薄，空氣處于相對乏氧的狀態(tài)，而乏氧微環(huán)境可促進HIF-1α表達上調(diào)，使氧濃度進一步降低，從而增強了腫瘤的放射抗拒性〔13〕。ICAM-3表達水平上調(diào)可誘導(dǎo)黏著斑激酶(FAK)磷酸化和增加FAK活性，而FAK磷酸化或活性增強對照射后的細胞凋亡具有抑制作用，ICAM-3通過磷酸化FAK和增加FAK活性而抑制照射后的細胞凋亡，ICAM-3在放療抵抗的宮頸癌細胞株中呈高水平表達狀態(tài)〔14〕。

本研究證實，腫瘤臨床分期越靠后(腫瘤發(fā)展階段處于中晚期)，組織分化程度和放療敏感性越低，檢測HIF-1α和ICAM-3的表達情況可以作為預(yù)測高原地區(qū)老年宮頸鱗癌患者腫瘤放療敏感性的可靠指標(biāo)，為宮頸癌的常規(guī)分割或超分割提供客觀的理論依據(jù)。然而，本研究尚處于初步研究階段，未進一步探討應(yīng)如何根據(jù)HIF-1α和ICAM-3表達情況制定個性化放療方案的問題。另外，本研究在放療敏感性評價方面，放療結(jié)束后的觀察時間較短，尚需進一步長期隨訪完善。