黨穎慧,李春艷,鄭蕓蕓,萬(wàn)陜寧,宋婷婷,徐 慧,張建芳

(空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,西安 710032;*通訊作者,E-mail:zhangjf@fmmu.edu.cn)

7q11.23重復(fù)綜合征(OMIM:609757)是一種罕見(jiàn)的染色體微重復(fù)綜合征。該綜合征患病率約為1/12000,常染色體顯性遺傳,是一種多系統(tǒng)發(fā)育障礙,具有多種表現(xiàn)形式,其臨床特征主要表現(xiàn)在語(yǔ)言發(fā)育遲緩,輕度顱面異常,肌張力減退、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩和先天性異常的發(fā)生率增加等,另外很多患兒都有認(rèn)知缺陷,從智力低下到自閉癥、焦慮障礙等。因此,對(duì)7q11.23重復(fù)綜合征的患兒及其家庭面臨巨大挑戰(zhàn),由于難以治愈,只能早發(fā)現(xiàn)早干預(yù)。該綜合征的表現(xiàn)特征是由Williams-Beuren綜合征(OMIM:194050)區(qū)域內(nèi)的關(guān)鍵基因重復(fù)導(dǎo)致的[1]。

Williams-Beuren綜合征也是一種較罕見(jiàn)的染色體疾病,主要與7q11.23區(qū)域內(nèi)大約26-28個(gè)基因的缺失相關(guān),多數(shù)患兒為散發(fā),在新生兒中的發(fā)病率為1/20000-1/7500,患兒具有典型的面部外觀,身體瘦小,有輕、中度的智力發(fā)育遲緩,牙齒發(fā)育很慢且小而稀疏,此癥患兒常合并先天性心臟病,尤其是主動(dòng)脈狹窄、肺動(dòng)脈(瓣)狹窄[2]。

本文對(duì)1例7q11.23重復(fù)綜合征進(jìn)行回顧性分析,探討分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

孕婦,22歲,孕29周因胎兒超聲提示“胎兒左、右側(cè)側(cè)腦室寬均為1.1 cm,羊水過(guò)多”來(lái)我院遺傳門診咨詢,此次為第一胎,孕婦否認(rèn)近親婚配,無(wú)不良接觸史及家族遺傳病史,遂建議行羊水穿刺。

1.2 羊膜腔穿刺

孕婦簽署知情同意書后,在超聲監(jiān)視及引導(dǎo)下經(jīng)腹部行羊膜腔穿刺,抽取30 ml羊水,15 ml用于細(xì)胞培養(yǎng),15 ml用于染色體微陣列分析技術(shù)(CMA)及產(chǎn)前BACs-on-Beads技術(shù)(BoBs)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.1 染色體核型分析 15 ml羊水離心后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、收獲、常規(guī)染色體制片、G顯帶,每例樣本按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體系(ISCN)標(biāo)準(zhǔn)在油鏡下分析30個(gè)分裂相,采集3-5個(gè)核型圖,所分析的細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。如發(fā)現(xiàn)染色體異常或多態(tài)性時(shí),計(jì)數(shù)50個(gè)分裂相并適當(dāng)增加分析的核型數(shù)。

1.2.2 CMA檢測(cè) 取15 ml羊水,利用DNA提取試劑盒(QIAamp?DNA Blood Mini Kit),按照說(shuō)明書方法提取基因組DNA,接著嚴(yán)格按照Affymetrix公司Cyto ScanTM 750k芯片檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作流程對(duì)樣本DNA進(jìn)行酶切、連接、擴(kuò)增、純化、片段化、標(biāo)記、雜交、洗染及掃描,掃描獲得的數(shù)據(jù)應(yīng)用ChAS(Chrosome Analysis Suite)軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

1.2.3 BoBs檢測(cè) 取CMA提取好的樣本DNA,利用Prenatal BACs-on-BeadsTM試劑盒對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),Luminex?200TM讀取信號(hào)強(qiáng)度,BoBsoft?2.0軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

2 結(jié)果

2.1 染色體核型分析

羊水染色體核型分析未見(jiàn)異常,核型結(jié)果為46,XY(見(jiàn)圖1)。

2.2 CMA檢測(cè)

CMA結(jié)果顯示arr[hg19]7q11.23(72 701 098-74 133 586)×3,即胎兒7號(hào)染色體q11.23區(qū)域有約1.43 Mb的重復(fù),如圖中藍(lán)色區(qū)域(見(jiàn)圖2)。

2.3 BoBs檢測(cè)

BoBs檢測(cè)發(fā)現(xiàn)7q11.23五個(gè)探針均右移,超出系統(tǒng)閾值,判定為7q11.23重復(fù)綜合征(見(jiàn)圖3箭頭所指區(qū)域)。

圖1 羊水染色體核型分析結(jié)果

該樣本7號(hào)染色體q11.23區(qū)域發(fā)現(xiàn)明顯重復(fù)(藍(lán)色區(qū)域)

2.4 妊娠結(jié)局

電話隨訪得知,孕婦在CMA和BoBs檢測(cè)均判定為7q11.23重復(fù)綜合征并進(jìn)行遺傳咨詢后,選擇終止妊娠。

3 討論

CMA技術(shù)能對(duì)全基因組范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異(CNVs)進(jìn)行精確定位,具有分辨率高、通量及準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn),并且對(duì)標(biāo)本要求不高,無(wú)需細(xì)胞培養(yǎng),比傳統(tǒng)的染色體核型分析具有明顯的優(yōu)越性,技術(shù)平臺(tái)也相對(duì)成熟,目前已被廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷領(lǐng)域;同時(shí)CMA技術(shù)的應(yīng)用極大地提高了對(duì)已知疾病的檢測(cè)水平,以及對(duì)未知染色體微缺失或微重復(fù)綜合征的發(fā)現(xiàn),促進(jìn)了臨床診斷和遺傳咨詢水平的提高[3]。

BoBs技術(shù)是一種快速檢測(cè)常見(jiàn)染色體非整倍體和微缺失綜合征的新型產(chǎn)前診斷方法,除了能檢測(cè)常見(jiàn)的13,18,21,X和Y染色體數(shù)目異常外,還可檢測(cè)常見(jiàn)的9種微缺失綜合征,其覆蓋的探針是已知疾病的關(guān)鍵區(qū)域。本文發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前BoBs技術(shù)對(duì)微重復(fù)也有一定檢測(cè)能力,這與該技術(shù)設(shè)計(jì)的9個(gè)目標(biāo)區(qū)域的探針有關(guān),通過(guò)CMA和BoBs技術(shù)結(jié)合避免了無(wú)明顯臨床意義的結(jié)果,提高了產(chǎn)前診斷的效率,降低了遺傳咨詢的難度[4,5]。>可檢測(cè)常見(jiàn)的9種微缺失綜合征,其覆蓋的探針是已知疾病的關(guān)鍵區(qū)域。本文發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前BoBs技術(shù)對(duì)微重復(fù)也有一定檢測(cè)能力,這與該技術(shù)設(shè)計(jì)的9個(gè)目標(biāo)區(qū)域的探針有關(guān),通過(guò)CMA和BoBs技術(shù)結(jié)合避免了無(wú)明顯臨床意義的結(jié)果,提高了產(chǎn)前診斷的效率,降低了遺傳咨詢的難度[4,5]。

本例患兒羊水染色體G顯帶未見(jiàn)明顯異常,CMA結(jié)果顯示胎兒7號(hào)染色體7q11.23區(qū)域有約1.4 Mb的重復(fù),包含LIMK1、ELN、GTF2I等23個(gè)OMIM基因,OMIM、CAGdb、Decipher、Clinvar等數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)文獻(xiàn)顯示該區(qū)域重復(fù)的患者有語(yǔ)言表達(dá)能力障礙、輕中度的智力發(fā)育遲緩、先心病、自閉癥、肌張力低等臨床表現(xiàn)[6]。BoBs檢測(cè)當(dāng)熒光強(qiáng)度的比值落在平均比值的閾值之外時(shí),通常在0.6-0.8之間即為缺失,在1.3-1.4之間即為重復(fù),而該患兒BoBs檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)7q11.23區(qū)域內(nèi)五個(gè)探針均右移,超出系統(tǒng)閾值,即為7q11.23重復(fù)。因此通過(guò)CMA和BoBs檢測(cè)均判定為7q11.23重復(fù)綜合征后,該孕婦選擇終止妊娠。但由于該孕婦及丈夫沒(méi)有進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè),無(wú)法判斷其來(lái)源。

綜上所述,CMA、BoBs結(jié)合染色體核型分析大大提高了7q11.23重復(fù)綜合征的檢出率,避免了無(wú)明顯臨床意義的結(jié)果,為孕婦再次妊娠提供了詳實(shí)、準(zhǔn)確的遺傳學(xué)參考信息,有效地降低了出生缺陷,為孕婦及其家庭帶來(lái)福音。