孔 瑕，黃 晴，李 慧，陳章寶

（西南大學(xué)藥學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院，重慶 400715）

黃精，是百合科植物滇黃精Polygonatumkingianum Coll.et Hemsl.、黃精 Polygonatumsibiricum Red.或多花黃精Polygonatumcyrtonema Hua的干燥根莖。依外形上的差別，習(xí)稱“大黃精”、“雞頭黃精”、“姜形黃精”。黃精具有悠久的臨床藥用歷史，現(xiàn)代藥理試驗(yàn)證明其具備提高免疫力、降低血糖、降低血脂、抗腫瘤、抗菌抗病毒等作用。

選用重慶產(chǎn)黃精為原料，以提取液中多糖的含量為指標(biāo)，考查黃精多糖提取方法、提取液澄清劑和口服液處方組成等因素，篩選得到黃精多糖口服液最佳制備工藝，為黃精的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃精藥材，采自重慶酉陽黃精種植基地。

無水葡萄糖對(duì)照品，上海源葉生物科技有限公司提供；無水乙醇、濃硫酸、苯酚、碳酸氫鈉、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP-K30），成都市科龍化工試劑廠提供；Ⅲ型ZTC1+1天然澄清劑，天津振天成科技有限公司提供。

1.2 儀器與設(shè)備

SHZ-D（III） 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌機(jī)、DF-101S型循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；精密天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品；GI系列滅菌鍋，廈門致微儀器有限公司產(chǎn)品；超聲波細(xì)胞儀，寧波新芝生物科技股份有限公司產(chǎn)品；TG16-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品；冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 黃精多糖的含量測(cè)定[1]

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液0.1，0.3，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，加水至2.0 mL，搖勻后精密加入6%苯酚1.0 mL，搖勻后精密加入濃硫酸5.0 mL（總體積8mL），冷卻至室溫后，沸水浴顯色15 min，以2.0 mL水按同樣顯色操作為空白。紫外-可見分光光度法，于波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、多糖質(zhì)量濃度（μg/mL） 為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.045 1X+0.032 6，R2=0.999 9。

苯酚-硫酸法標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 苯酚-硫酸法標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.3 精密度試驗(yàn)

取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液按“1.3.2”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，RSD=0.274%（n=6），表明儀器精密度良好。

1.3.4 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的黃精多糖供試品溶液10 mL，加入100 mL容量瓶中定容，得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的黃精多糖溶液。精密量取上述溶液1 mL，平行5份，分別加入0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，苯酚-硫酸法顯色，測(cè)定回收率。加樣回收率平均值為98.6%，RSD=1.15%（n=5），說明該試驗(yàn)方法可行。

1.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

蟋蟀在堂，歲聿其莫。 今我不樂，日月其除。 無已太康，職思其居。 好樂無荒，良士瞿瞿。 (莫，暮。 職，應(yīng)該。)

精密量取同一黃精多糖供試品溶液2 mL，苯酚-硫酸法顯色后分別在0，10，20，30，40，50，60 min測(cè)定吸光度，結(jié)果測(cè)得RSD=1.36%（n=7），表明供試品溶液顯色后在60 min穩(wěn)定（測(cè)定過程需在60 min內(nèi)完成）。

1.4 黃精多糖提取工藝的研究

1.4.1 黃精多糖回流提取方法

取黃精粉末100 g，加水（料液比1∶10），水浴80℃，回流提取1 h，取出濾液，濾渣加水，繼續(xù)提取1 h。合并濾液，濃縮至一定濃度。

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，水浴80℃，回流提取1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，煮沸1 h，將兩部分濾液合并，濃縮體積至1 000 mL。

1.4.2 黃精多糖超聲提取方法

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，60℃超聲提取1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，繼續(xù)提取1 h。合并濾液，濃縮體積至1 000 mL。

1.4.3 黃精多糖煎煮提取方法

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，煎煮1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，繼續(xù)煎煮1 h。合并濾液，濃縮體積至1 000 mL[2-3]。

1.5 ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑最佳工藝的研究

ZTC1+1天然澄清劑主要去除鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、樹脂等膠體不穩(wěn)定成分，對(duì)中藥有效成分如多糖、黃酮、生物堿、皂苷類礦物質(zhì)等不影響[4]。

1.6 黃精多糖口服液的處方篩選

正交試驗(yàn)在處方預(yù)試驗(yàn)選擇的基礎(chǔ)上，以防腐劑（A）、穩(wěn)定劑（B）、pH值（C） 為因素，以多糖含量和澄明度為指標(biāo)，用正交試驗(yàn)優(yōu)化口服液輔料。每個(gè)因素設(shè)立3個(gè)水平。

正交因素與水平設(shè)計(jì)見表1[5-6]。

表1 正交因素與水平設(shè)計(jì)

1.7 工藝驗(yàn)證

按照以上篩選得到的口服液制備工藝制備多糖口服液，檢測(cè)口服液多糖含量、澄明度等指標(biāo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃精多糖提取工藝的研究

黃精多糖分別用回流提取、超聲提取和煎煮法提取的黃精多糖含量分別為58.4%，57.9%，59.6%，3種提取方法提取的糖含量相差不大，黃精用直接煎煮法提取的黃精多糖含量最高，且操作最簡(jiǎn)便，因此選擇煎煮法提取黃精多糖。

2.2 ZTC 1+1和殼聚糖2種澄清劑的比較試驗(yàn)結(jié)果

2種澄清劑對(duì)黃精提取液進(jìn)行澄清的試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 2種澄清劑對(duì)黃精提取液進(jìn)行澄清的試驗(yàn)結(jié)果

相比殼聚糖澄清劑，使用Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清劑后黃精多糖保留率更高，而且能夠更好地除去黃精水提物中的雜質(zhì)。故以Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清劑作為澄清劑澄清黃精多糖水提取液。

2.3 黃精多糖口服液的輔料篩選

以澄明度、總多糖含量為指標(biāo)，根據(jù)上表進(jìn)行試驗(yàn)。

試驗(yàn)結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表3 試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析

比較3個(gè)因素的極差可得，各因素口服液澄明度影響程度依次為穩(wěn)定劑＞防腐劑＞pH值，穩(wěn)定劑對(duì)口服液澄明度及多糖含量的影響較大，為了提高口服液澄明度，由表3得最佳工藝為A2B3C1，綜合單因素考查結(jié)果確定最佳輔料組合為防腐劑羥苯乙酯0.04%，穩(wěn)定劑PVP-K30 0.2%，pH值5.0。

2.4 工藝驗(yàn)證

按照以上篩選得到的黃精多糖口服液制備工藝重復(fù)制備3批產(chǎn)品，直觀觀察產(chǎn)品為棕紅色液體且無沉淀生成，按黃精多糖含量測(cè)定方法測(cè)定功效成分多糖質(zhì)量濃度為1.28±0.05 g/10 mL，均符合產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，且重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)論

黃精主要成分是多糖，多糖耐熱且水溶性好，因此用直接煎煮法可以將黃精中多糖提取出來,能滿足口服液制備要求，同時(shí)用水提取黃精中多糖，黃精中的其他水溶性成分（如生物堿、甙、鞣質(zhì)、水溶性有機(jī)酸）也會(huì)被提取出來，這些成分容易形成沉淀，影響口服液的穩(wěn)定性，因此黃精多糖提取液采用ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑進(jìn)行絮凝沉淀，提高口服液的穩(wěn)定性，ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑的最佳工藝為B/A組分濃度1%/1%，藥液濃度1∶5，溫度70℃，B/A組分用量體積比5。為提高口服液的穩(wěn)定性，對(duì)口服液的處方進(jìn)行篩選，得到黃精多糖口服液的最佳處方為黃精多糖提取濃縮液約350 mL，穩(wěn)定劑0.2%，pH值5.0，羥苯乙酯0.04%，純化水定容至400 mL，制備的多糖口服液澄清、多糖含量符合口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。