李立功

(大石橋市高坎鎮(zhèn)林業(yè)站，遼寧大石橋115100)

荷葉離褶傘(Lyophyllumdecastes)又名“路基蘑”、“鐵道蘑”、荷葉蘑等，屬擔子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌綱(Hymenomycetes)，傘菌目(Agaricales)，白蘑科(Tricholomataceae)，離褶傘屬(Lyophyllum)，在歐洲被稱為“Fried chicken mushroom”。在我國主要分布在遼寧、吉林、黑龍江、江蘇、青海、四川、貴州、云南、新疆、內蒙古大興安嶺中南部等地，其肉肥厚細膩、清香撲鼻，味道鮮美，富含蛋白質、氨基酸、β-1,3-D 葡聚糖與β-1,6-D 葡聚糖[1]，對先天性糖尿病[2]、特異性皮膚炎[3]等具有很好的抑制效果，同時還具有降血脂[4]、防輻射[5]、防治癌細胞[1]等功效，是一種營養(yǎng)豐富，兼具食藥用功效的珍稀食用菌，市場應用前景十分廣闊。

本文圍繞荷葉離褶傘分離和鑒定、生物學特性、子實體和菌絲營養(yǎng)成分、人工馴化、生物活性物質及開發(fā)利用方面的研究進展進行了綜述，并對下一步研究方向進行展望。

1 荷葉離褶傘分離、鑒定

魏生龍等[6]于2000年從海拔2800～3200m的祁連山金露梅灌木叢中采集到荷葉離褶傘野生子實體，并進行了菌種分離，菌株號為ZY48-1，菌種保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，菌種保藏號CGMCC No.1518。PDA培養(yǎng)基和金露梅葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基適宜對荷葉離褶傘進行組織分離和孢子分離，孢子分離法較組織分離法菌絲生長速度更快[7]。欒慶書等[8]2003年對沈陽輝山針闊混交林下大型野生菌類進行調查，分離獲得荷葉離褶傘菌絲，其中燕麥、玉米和西瓜培養(yǎng)基為最佳分離培養(yǎng)基。

荷葉離褶傘的鑒定目前主要依靠傳統(tǒng)形態(tài)學與分子生物學相結合的方法進行。在宏觀形態(tài)上，荷葉離褶傘與煙色離褶傘等十分相近，難以區(qū)分。中國工程院李玉院士將荷葉離褶傘、煙色離褶傘和玉蕈離褶傘商品化名稱統(tǒng)一命名為“來福蘑”[9]。隨著分子生物學技術的發(fā)展，利用核糖體rDNA內部轉錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer，ITS)序列分析技術對真菌進行鑒定，被越來越廣泛應用。ITS序列屬于中度保守序列，表現為種內相對一致，種間差異明顯，多用于真菌屬內種間的分析研究。鄭宏亮[10]利用核糖體rDNA ITS序列分析技術對荷葉離褶傘(L.decastes24402)進行分子鑒定，與基因庫中下載的L.decastes序列聚為一支，支持率99%，但獨立成支，表明測試荷葉離褶傘與國外相比的存在一定差異。王守現[11]利用ITS序列分析技術，用ITS1和ITS4通用引物對野生荷葉離褶傘進行擴增、測序并對測序結果進行BLAST比對，與登錄號為HM 119485的荷葉離褶傘同源性達到98.91%。

2 荷葉離褶傘生物學特性

對荷葉離褶傘生物學特性的研究多數以菌絲生長速度、生長勢及菌絲干重等作為衡量指標進行篩選[11]。魏生龍等[6]對荷葉離褶傘生物性特研究結果表明：荷葉離褶傘屬低溫型變溫結實型菌類，菌絲生長的溫度范圍是5～35℃，最適溫度25℃，致死溫度是45℃ 30min；擔孢子萌發(fā)溫度范圍是10～25℃，最適溫度是20℃，致死溫度是50℃ 15min。菌絲生長最適pH 4～5，擔孢子萌發(fā)最適pH 4～6。光照有利于子實體形成，黑暗條件下不能形成子實體。菌絲生長最適C/N為15/1～50/1，最適氮源是麥麩，最適碳源是蔗糖和葡萄糖。王守現[11]對來自西藏市場上的荷葉離褶傘生物學特性進行研究，篩選出最佳生長條件：最適碳源為麥芽糖，最適氮源為大豆蛋白胨，最適碳氮比為30∶1，菌絲最適生長溫度為20℃，最適pH為6.0。Kimuta 等[12]研究結果表明荷葉離褶傘最是生長溫度25℃，最佳碳源是果糖，適量的AlCl3能促進菌絲生長。

無機鹽是影響食用菌生長發(fā)育重要因素之一，其中以Mg2+、K+、Zn2+、Na+和Fe3+尤為重要，適當濃度的ZnSO4、MgSO4、KH2PO4和FeSO4有利于荷葉離褶傘菌絲萌發(fā)，促進營養(yǎng)菌絲的生長。超過臨界濃度菌絲生長逐漸緩慢且受到抑制，臨界濃度分別為4.0g/L、6.0g/L、10.0g/L和2.5g/L[13]。1mg/mL KCl對荷葉離褶傘的生長具有促進作用，5mg/mL或10mg/mL的NaCl對菌絲生長具有抑制作用。微量元素中，較高濃度的錳、銅、鈷、鋅可以促進荷葉離褶傘菌絲生長[14]。

維生素類VB6、VC、VB1對荷葉離褶傘菌絲生長起促進作用。吲哚丁酸、吲哚乙酸和萘乙酸等生長素對菌絲生長均具有促進作用，其中吲哚丁酸促進作用明顯[14]。在荷葉離褶傘母種培養(yǎng)基中加入生長地土壤浸出液、腐殖質浸出液和松針浸出液對菌絲的生長具有促進作用[15]。

3 荷葉離褶傘子實體和菌絲營養(yǎng)成分

荷葉離褶傘子實體蛋白質含量高(21.4%)，脂肪含量低(1.44%)，碳水化合物(53.03%)，氨基酸種類齊全(17種)，同時還含有對人體有益的微量元素鋅、銅和硒以及大量的維生素B1、B2、B3、B6，具有很高的營養(yǎng)價值[16]。席亞麗等[17]以氨基酸評分、化學評分、必需氨基酸指數、生物價、營養(yǎng)指數和氨基酸比值系數分，評價了子實體、菌絲體和菌絲體發(fā)酵液的營養(yǎng)價值。用不同的營養(yǎng)價值評價指標，子實體和菌絲體營養(yǎng)價值的高低略有不同，綜合評價認為荷葉離褶傘菌絲體和子實體均具有較高的營養(yǎng)價值，而菌絲體發(fā)酵液中蛋白質含量和氨基酸種類遠低于子實體和菌絲體，菌絲發(fā)酵液含有VB2、VB3、VB6和VC，含有谷氨酸、甘氨酸等6種氨基酸，不含鎘、汞、鉛、砷等重金屬離子[18]。

4 荷葉離褶傘人工馴化研究

荷葉離褶傘被視為味鮮宜人的野生食用菌，日本早就將它列入馴化的對象。對荷葉離褶傘人工馴化研究分為野外林下或灌木叢、室內或菇棚4種方式，可以利用瓶栽、袋栽獲得子實體。Kang等[19]對荷葉離褶傘進行了栽培研究，發(fā)現荷葉離褶傘菌絲在赤楊木屑和添加啤酒渣的培養(yǎng)料上生長較好，子實體形成的適宜溫19～23℃。Yoshihama等[20]1994年申請美國專利，報道了荷葉離褶傘在人工培養(yǎng)基上能形成子實體。國內學者也相繼開展了荷葉離褶傘的人工馴化研究。我國最早關于成功栽培荷葉離褶傘的的記錄是1973年，李植森利用蕨苔根和茅草制作腐殖土作為培養(yǎng)料，在室內和山林就地栽培獲得成功[21]。

無論何種馴化方式，培養(yǎng)料起到至關重要的作用。培養(yǎng)料是大型真菌生長發(fā)育的基礎，木屑、玉米芯、棉籽殼等農作物下腳料已經成為各種食用菌栽培培養(yǎng)料不可缺少的配方成分。周會明研究發(fā)現，以玉米芯為主料的培養(yǎng)料荷葉離褶傘菌絲體生長優(yōu)于以棉籽殼、木屑，但未形成子實體。以棉籽殼為主，添加部分木屑、闊葉及腐殖土或者添加部分發(fā)酵料和小麥有利于子實體形成[22]。魏生龍[7]篩選出荷葉離褶傘適宜原種與栽培種生長的配方為小麥89%+麥麩10%+葡萄糖0.5%+過磷酸鈣0.5%。棉籽殼75%+高粱12%+麥麩12%+白糖0.5%+過磷酸鈣0.5%瓶栽生物學效率47.5%，顯著高于其他配方。程繼紅[23]對荷葉離褶傘工廠化栽培基本工藝進行了研究，生產工藝流程包括原材料制備、攪拌、填料、滅菌、冷卻、接種、搔菌、栽培、采收包裝等步驟，使用PP塑料瓶栽培污染率低，發(fā)菌時間52d，采收期2～3d，單瓶產量為104g。

5 荷葉離褶傘生物活性物質研究

荷葉離褶傘生物活性物質的研究主要集中在胞外多糖的提取、富硒發(fā)酵、胞外酶活性等方面，對荷葉離褶傘中活性物質的提取制備和活性機理的深入研究將為荷葉離褶傘保健產品或功能食品的開發(fā)提供參考。閆培生[24]首次利用10L發(fā)酵罐對荷葉離褶傘胞內和胞外多糖產量以及6種酶對發(fā)酵菌絲體多糖提取效果。篩選出在25℃、120r/min、空氣流量為200L/h條件下，8d時胞內多糖含量和胞外多糖產量達最高，分別為63.1mg/g干菌絲體和3.54g/L。同年張芬琴[25]報道了荷葉離褶傘多糖提取工藝，提取溫度為85℃，pH9.0，料液比1∶15，提取時間1.5h，獲得固形物中多糖含量為62.52%。王曉琴[26]研究表明荷葉離褶傘菌絲體生長及胞內外多糖及胞外還原糖含量隨發(fā)酵時間變化，適宜時間為11d。

多糖和硒結合成為硒多糖，是一種多糖有機硒化合物，其生物藥理活性普遍高于多糖和硒，更容易被機體吸收和利用[27]。高慧娟[28]以菌絲體干重和富硒率為評價指標，確定荷葉離褶傘菌絲體最優(yōu)富硒發(fā)酵條件。對富硒荷葉離褶傘菌絲體胞內粗多糖發(fā)酵條件進行優(yōu)化，得出的最佳發(fā)酵條件為：121℃，20min 條件滅菌，在發(fā)酵至第129h，發(fā)酵液中添加4μg/mL Na2SeO3，待發(fā)酵244h，測得的實際胞內粗多糖含量為349.8mg/100mL。

李霞[29]研究了玉米穎殼、發(fā)酵棉籽殼、木屑、麥草、未發(fā)酵棉籽殼、棉籽殼與木屑的混合物6種培養(yǎng)基中荷葉離褶傘胞外淀粉酶濾紙纖維素酶、羧甲基纖維素酶、半纖維素酶、濾紙纖維素酶等胞外酶的活性變化，酶活性變化總體趨勢相似，在接種后第8周達到酶活性的最大值。梁倩倩等[30]對該菌的漆酶進行了研究，其漆酶最適作用溫度為35℃，在30～35℃較為穩(wěn)定；最適反應pH 為3.0，pH 在2.2～3.8 較為穩(wěn)定，保持了80%以上的酶活，ABTS 的漆酶動力學常數為72.622μmol/L。2016年又對產酶條件進行了優(yōu)化，得出荷葉離褶傘發(fā)酵產漆酶最優(yōu)發(fā)酵條件，獲得最大漆酶酶活為829.83U/mL[31]。

6 開發(fā)利用

張琰珍[32]等進行了荷葉離褶傘保健飲料的研制，以豆?jié){、玉米汁為天然培養(yǎng)基，經過深層發(fā)酵后，以發(fā)酵液40%、檸檬酸0.12%、羧甲基纖維素鈉0.02%、白砂糖4%為配方的產品為最佳。楊秋慧子[33]從荷葉離褶傘菌絲體中利用DEAE-SepharoseF.F.色譜和SephadexG-100色譜技術，分離得到凝集素，相對分離質量為48.2ku，為單亞基糖蛋白，對兔血紅細胞具有較強的凝集作用。

荷葉離褶傘作為一種亟需開發(fā)的食用菌菌種，國內外學者已經掌握了其基本生物學特性，實現了其工廠化栽培，摸索其適宜培養(yǎng)條件、縮短栽培周期、提高栽培產量將會是下一步的研究重點。荷葉離褶傘品種選育應在菌種篩選的基礎上進行，也可利用菌種的多樣性采用細胞融合、單孢雜交等技術達到育種的最終目的，最后實現菌種推廣以及生產化。另外荷葉離褶傘生活史、交配系統(tǒng)、有性生殖中基因重組的遺傳分析、分子生物學等在遺傳學中的應用幾乎是空白，有待于進一步研究。同時應加強生物活性物質成分和主要功能的研究，探明其作用途徑及機理，為進一步開發(fā)新藥的第三代功能食品奠定良好的基礎。