回瑞華,侯冬巖,李鐵純,刁全平

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

槲寄生屬(Viscum)植物系桑寄生科(Lorantheceae)半寄生常綠灌木，常寄生于梨、榆、楊、山楂、桑、茶、山毛茛、蕓香、薔薇科等植物上，我國大部分地區(qū)均有分布[1-3].由于特殊的寄生特性，可吸收寄主的內(nèi)涵物，其化學成分與寄主密切相關，同時也有其本身的獨特活性成分.槲寄生富含三萜類、甾醇類、黃酮類等化合物，其所含豐富的化學成分具有廣泛的藥理活性，具有祛風濕、補肝腎、強筋骨、養(yǎng)血、安胎、降血壓等作用，近年來，在傳統(tǒng)藥用基礎上不斷發(fā)現(xiàn)其新療效和新應用，如抗腫瘤、抗癌等作用[4,5].茶寄生是一種寄生在樹齡較高的古喬木茶樹上的寄生物，形狀像小珊瑚，因寄生枝桿節(jié)狀帶毫，故此被稱為“螃蟹腳”.梨寄生是寄生在梨樹上的寄生物.國內(nèi)外對槲寄生的研究發(fā)展較快，報道較多，而關于茶寄生和梨寄生的研究少見報道.本文對茶寄生和梨寄生中黃酮化合物進行分析，為茶寄生和梨寄生的開發(fā)利用提供科學依據(jù).

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

實驗所用儀器與試劑見表1.

表1 實驗所用儀器與試劑

1.2 樣品及樣品處理

茶寄生樣品：取自福建.

梨寄生樣品：取自遼寧鞍山.

分別將兩種樣品清洗潔凈后放入烘箱中，于60 ℃干燥4 h，粉碎后過0.425 mm篩，裝入干凈的密封袋中備用.

1.3 標準溶液及實驗溶液的配制

標準溶液配制：以槲皮素作測定樣品中黃酮化合物含量的標準物質(zhì)，精確稱取0.020 g.

槲皮素標準品，加乙醇使其溶解稀釋，置于50 mL的容量瓶中定容至刻度，得到濃度為400 μg/mL標準品儲備液，搖勻，備用.

1%三氯化鋁溶液配制：準確稱取1.756 7 g的AlCl3·6H2O,加水溶解并稀釋，置于100 mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，備用.

1.4 黃酮化合物吸收曲線的繪制及測定波長的確定

準確吸取1.3標準儲備液0.5 mL，置于10 mL容量瓶中，加1%的三氯化鋁溶液，充分混合并定容至刻度，室溫下靜置10 min，在波長200～800 nm范圍內(nèi)掃描，繪制出其吸收曲線，如圖1.

圖1 標準溶液的吸收光譜圖

分別稱取經(jīng)1.2處理的樣品10.00 g置于250 mL錐形瓶中，用95%的乙醇在20 ℃下，超聲波提取25 min，料液比1∶15.抽濾，濾渣重復提取1次，合并濾液，除去溶劑，得浸膏在60 ℃烘箱中干燥至恒重得樣品浸膏[6,7].將浸膏用95%乙醇定容至50 mL容量瓶中，搖勻.取其1 mL溶液置10 mL容量瓶中，用1%的三氯化鋁溶液定容，搖勻，室溫放置10 min，以相應試劑為空白，在200～800 nm范圍內(nèi)掃描，繪制出其吸收曲線，如圖2和圖3.

圖2 茶寄生樣品的吸收光譜

由圖1～3可知，標準溶液的吸收光譜圖和樣品的吸收光譜圖圖形相同，均在270 nm和420 nm有較強吸收.但峰形不對稱，這樣會給含量測定帶來影響.采用三波長光譜法可有效地消除吸收峰不對稱給定量分析造成的影響并校正基線傾斜，用作圖法確定出3個測定波長分別為λ1=250 nm、λ2=270 nm、λ3=295 nm[8-14].

圖3 梨寄生樣品的吸收光譜

2 結(jié)果與結(jié)論

2.1 標準曲線的繪制

分別取0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 mL的1.3槲皮素標準儲備液，置于10 mL容量瓶中，用1%的三氯化鋁溶液定容，室溫放置10 min，以相應試劑為空白，用三波長光譜法測得相應的ΔA值，繪制成標準曲線，得回歸方程：ΔA=17.118C+0.020，相關系數(shù)r=0.999 8，說明標準溶液在0.008～0.048 mg/mL范圍內(nèi)，ΔA與濃度C呈良好線性關系，可按標準曲線法進行定量分析.標準溶液濃度與吸光度的關系如表2所示.

表2 標準溶液濃度與吸光度的關系

2.2 樣品穩(wěn)定性實驗

用1.4的方法配制樣品溶液進行穩(wěn)定性實驗，結(jié)果表明：樣品放置120 min，測得其吸光度值基本不變，說明樣品穩(wěn)定性較好.

2.3 方法精密度實驗

按1.4的方法配制樣品溶液，在測定波長下測定ΔA，得到標準偏差和變異系數(shù)，結(jié)果列于表3.

表3 方法精密度 (μg/mL)

2.4 方法回收率實驗

按1.4的方法配制3 個不同濃度樣品溶液，按標準加入法加入等量的1.4標準儲備液，在測定波長下測定ΔA，得到回收率，結(jié)果見表4.

表4 方法回收率 (μg/mL)

由表4可知，實驗方法回收率為97.5%～101.9%.

按照1.4的方法處理茶寄生和梨寄生樣品，在三波長下分別測定其ΔA值3次，黃酮化合物的含量結(jié)果為：茶寄生黃酮化合物含量13.7 mg/g，梨寄生黃酮化合物含量8.05 mg/g.

2.5 結(jié)論

本實驗采用超聲提取茶寄生和梨寄生黃酮化合物，用三波長光譜法測定黃酮化合物的含量.方法的回收率為97.5%～101.9%，變異系數(shù)小于0.054%，方法的準確度與精密度均較高.由于ΔA值與黃酮的濃度成正比，在所選擇的3個波長處，其相應的吸收光譜曲線上3點在一條直線上，有效地消除吸收峰不對稱和基線漂移給定量分析造成的影響，因此三波長光譜法為測定茶寄生和梨寄生的黃酮化合物含量提供了更準確的方法.