俞章平，余晗俏，李俊，李超

冠心病是血管病變，其形成機制中，內(nèi)皮損傷與功能障礙是主要的環(huán)節(jié)之一。內(nèi)皮祖細胞主要是一種骨髓衍生或來源于其他組織，在循環(huán)中逐漸遷移和增殖及分化，并最終形成成熟的內(nèi)皮細胞類型[1]。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮祖細胞不但參與人類胚胎血管的形成，同時還參與人類出生后成長過程中血管新生與內(nèi)皮受損后的修復(fù)過程[2]。血管內(nèi)皮細胞生長因子是促進人類血管生成的重要因素，其不但可促進內(nèi)皮祖細胞增殖，同時還具有趨化作用，對人體血管內(nèi)膜修復(fù)等具有一定作用。本研究探討循環(huán)內(nèi)皮祖細胞與血管內(nèi)皮生長因子在冠心病中的作用，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省金華市人民醫(yī)院2016年1月至2018年1月收治的冠心病患者70例作為觀察組，均符合《缺血性心臟病病名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3]，且自愿參與研究且簽署知情同意書；排除感染、惡性腫瘤、高血壓控制不理想、肺心病、急性心肌炎、風(fēng)濕性心臟病等其他心臟疾病，急性肺感染，中度以上貧血或白血病，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重肝腎功能障礙，糖尿病，自身免疫性疾病及心肌病等。其中男40例，女30例；年齡45～72歲，平均（62.3±3.5）歲；急性心肌梗死20例，不穩(wěn)定型心絞痛24例，穩(wěn)定型心絞痛26例。另選21例正常健康人群作為對照組，其中男12例，女9例；年齡44～70歲，平均（61.9±3.4）歲。兩組性別和年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 于清晨空腹下采集肘靜脈血液4 ml，然后貯存于4℃冰箱中待測，于4 h內(nèi)完成檢測。內(nèi)皮祖細胞：分別在試驗管和對照管中加入全血100l，并加入抗體和同型對照，然后輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min。溶血素LysingSolution采用去離子水以1∶10進行稀釋，分別在試驗管和對照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。將溶血后的試管1 500 r/min離心5 min，去除上清液，并加入2 ml PBS緩沖液，然后再離心處理，去除上清液，洗滌后加入500lPBS，輕輕震蕩，等待流式檢測。循環(huán)內(nèi)皮細胞檢測：分別在試驗管和對照管中加入100ml全血，然后加入抗體和同型對照，輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min，溶血素Lysing Solution采用去離子水以1∶10稀釋，分別在試驗管和對照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。溶血后離心處理，棄除上清液，加入2 ml PBS，離心，洗滌，棄除上清液，洗滌后加入500l PBS，輕輕震蕩以使細胞重懸，等待流式檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血管內(nèi)皮生長因子水平。

1.3 觀察指標(biāo) 鑒定血管內(nèi)皮祖細胞，并觀察不同患者外周血血管內(nèi)皮祖細胞數(shù)量變化和黏附能力、遷移能力、生長因子水平變化。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料以均數(shù)標(biāo)±準(zhǔn)差表示，多組比較采用方差檢驗；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血管內(nèi)皮祖細胞鑒定情況 血管內(nèi)皮祖細胞存在內(nèi)皮祖細胞特性，培養(yǎng)7d后形成梭形內(nèi)皮細胞。

2.2 各組血管內(nèi)皮祖細胞情況 各組血管內(nèi)皮祖細胞克隆形成數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內(nèi)皮祖細胞克隆形成數(shù)高于不穩(wěn)定型心絞痛患者、穩(wěn)定型心絞痛、對照組，且不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對照組，穩(wěn)定型心絞痛患者低于對照組。見表1。

2.3 各組內(nèi)皮祖細胞黏附能力比較 冠心病各組間貼壁細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者貼壁細胞數(shù)量與不穩(wěn)定型心絞痛患者相近，穩(wěn)定型心絞痛患者低于不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者。見表2。

2.4 各組血管內(nèi)皮祖細胞遷移情況比較 各組血管內(nèi)皮祖細胞遷移數(shù)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內(nèi)皮祖細胞遷移數(shù)量高于不穩(wěn)定型心絞痛、穩(wěn)定型心絞痛、對照組，不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對照組，而穩(wěn)定型心絞痛患者低于對照組。見表3。

2.5 各組血管內(nèi)皮生長因子水平比較 各組血管內(nèi)皮生長因子水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。穩(wěn)定型心絞痛患者血管內(nèi)皮生長因子水平與對照組相近；而急性心肌梗死患者、不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對照組，且急性心肌梗死患者高于不穩(wěn)定型心絞痛。見表4。血管內(nèi)皮生長因子水平與循環(huán)血管內(nèi)皮祖細胞黏附能力無相關(guān)性（=0.28，＞ 0.05），而與循環(huán)血管內(nèi)皮祖細胞數(shù)量、遷移能力呈正相關(guān)性（=0.84、0.72，均＜ 0.05）。

表1 4組血管內(nèi)皮祖細胞情況 CFU/106

表2 3組內(nèi)皮祖細胞黏附能力比較 個/視野

表3 4組血管內(nèi)皮祖細胞遷移情況比較 個/視野

3 討論

早期內(nèi)皮細胞增殖和分化能力較差，其通過旁分泌方式來促進血管與微血管形成；而晚期內(nèi)皮祖細胞具有較強的增殖和遷移及分化能力，可直接進入受損組織以修復(fù)小管內(nèi)皮，并形成新的毛細血管[4]。正常健康人群外周血液中內(nèi)皮祖細胞成為穩(wěn)定狀態(tài)，當(dāng)出現(xiàn)急性心力衰竭等事件時，內(nèi)皮祖細胞會出現(xiàn)短暫升高。有文獻報道，內(nèi)皮功能不良是成人發(fā)生心血管疾病的基礎(chǔ)[5]。單層內(nèi)皮細胞可分泌重要調(diào)節(jié)因子，為血小板與粒細胞提供光滑管壁結(jié)構(gòu)，當(dāng)患者發(fā)生高血壓等疾病時，其可削弱患者血管內(nèi)皮功能，增加縮血管誤診等產(chǎn)生，從而增加患者細胞黏附力，促進中層平滑肌細胞增殖而形成血栓[6]。部分生理變化也會致人體內(nèi)皮祖細胞數(shù)量發(fā)生變化，如雌激素等可增加人體內(nèi)內(nèi)皮祖細胞數(shù)量，而慢性心力衰竭患者，其內(nèi)皮祖細胞數(shù)量在心功能I～II級時增加，在心功能III～IV時下降[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者內(nèi)皮祖細胞數(shù)高于對照組，且遷移能力明顯高于其他患者，但黏附能力與不穩(wěn)定型心絞痛患者無明顯差異；不穩(wěn)定型心絞痛患者內(nèi)皮祖細胞和遷移能力明顯高于穩(wěn)定型心絞痛與對照組；穩(wěn)定型心絞痛患者內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和遷移能力明顯低于對照組，與文獻[8]報道結(jié)果相似。

表4 4組血管內(nèi)皮生長因子水平比較 ng/L

目前尚不完全清楚內(nèi)皮細胞生長因子的來源，但缺血心肌組織可分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子，這主要是因缺氧狀態(tài)是內(nèi)皮細胞生長因子基因的始動因子。正常人群血清中存在極低的內(nèi)皮細胞生長因子，當(dāng)心肌細胞處于缺氧、缺血狀態(tài)下，其內(nèi)皮細胞生長因子將會明顯增加。內(nèi)皮細胞生長因子可促進人體內(nèi)皮祖細胞動員和增殖，促進人體血管內(nèi)膜修復(fù)與新生。

綜上所述，臨床可通過檢測患者血管內(nèi)皮細胞生長因子和循環(huán)內(nèi)皮祖細胞數(shù)量來判斷冠心病患者的預(yù)后，為臨床治療提供依據(jù)。