劉冰 楊帥 費錫斌 宋健

摘要：目的? 研究磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC-3）聯(lián)合細胞角蛋白-19（CK-19）免疫組化檢測在肝細胞癌診斷及鑒別診斷中的應用價值。方法? 選擇2017年1月～2019年1月我院通過肝穿刺或外科手術獲取的肝癌標本91例。所有標本按照GPC-3及CK-19檢測流程處理，比較肝細胞癌（HCC）、肝內膽管細胞癌（ICC）及肝細胞癌合并肝內膽管細胞癌（CHC）標本中GPC-3及CK-19檢測陽性率，及不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽性率。結果? HCC與CHC中GPC-3陽性率高于ICC，ICC與CHC中CK-19陽性率高于HCC，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;中、低分化的HCC標本中GPC-3、CK-19陽性率高于高分化HCC，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論? 在肝細胞癌診斷及鑒別診斷中采取GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測，可有效檢出HCC，并可與CHC及ICC進行區(qū)分，在早期診斷中也具有一定應用價值。

關鍵詞：肝細胞癌;磷脂酰肌醇蛋白多糖-3;細胞角蛋白-19

中圖分類號：R735.7? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.23.054

文章編號：1006-1959（2019）23-0169-02

Application of GPC-3 Combined with CK-19 Immunohistochemical Detection in Diagnosis and Differential Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma

LIU Bing1，YANG Shuai1，F(xiàn)EI Xi-bin1，SONG Jian2

（1.Department of Biochemistry，Baodi District People's Hospital，Tianjin 301800，China;

2.Department of Immunology，Tianjin Central Hospital of Obstetrics and Gynecology，Tianjin 301800， China）

Abstract：Objective? To study the application value of phosphatidylinositol-3 （GPC-3） combined with cytokeratin-19 （CK-19） immunohistochemistry in the diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma. Methods? From January 2017 to January 2019， 91 cases of liver cancer specimens obtained by liver puncture or surgery in our hospital were selected.All specimens were processed according to the GPC-3 and CK-19 test procedures to compare hepatocellular carcinoma （HCC），Positive rate of GPC-3 and CK-19 in intrahepatic cholangiocarcinoma （ICC） and hepatocellular carcinoma combined with intrahepatic cholangiocarcinoma （CHC） specimens，and the positive rate of GPC-3 and CK-19 of different degrees of differentiation HCC.Results? The positive rate of GPC-3 and CK-19 in HCC and CHC was higher than that in ICC， the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of GPC-3 in medium and poorly differentiated HCC specimens was higher than that in well differentiated HCC. The positive rate of CK-19 in medium and poorly differentiated HCC specimens was higher than that in well differentiated HCC，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion? GPC-3 combined with CK-19 immunohistochemistry in the diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma can effectively detect HCC and distinguish it from CHC and ICC， and it has certain application value in early diagnosis.

Key words：Hepatocellular carcinoma;Phosphatidylinositol-3;Cytokeratin-19

肝癌（liver cancer）是臨床較常見的惡性腫瘤之一，根據形態(tài)學及細胞遺傳學，可分為肝細胞癌（HCC）、肝內膽管細胞癌（ICC）及肝細胞癌合并肝內膽管細胞癌（CHC）[1]。甲胎蛋白（AFP）檢測在肝癌診斷中應用較為廣泛，但敏感性和特異性較低，常導致假陰性、假陽性的診斷結果。因此，選用其他可有效檢出肝細胞的手段非常重要[2]。本研究采取磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC-3）聯(lián)合細胞角蛋白-19（CK-19）免疫組檢測診斷HCC，探究此法在HCC診斷及鑒別診斷中的應用價值，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2017年1月～2019年1月天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院通過肝穿刺或外科手術獲取的肝癌標本91例，其中HCC 64例，ICC 19例，CHC 8例;高分化19例（HCC 16例、ICC 2例、CHC 1例），中分化55例（HCC 38例、ICC 12例、CHC 5例），低分化17例（HCC 13例、ICC 3例、CHC 1例），所有標本均符合免疫組化檢測要求。

1.2方法? GPC-3：采用EnVision兩步法檢測，標本切片均經烤片及脫蠟，逐級乙醇從高到低至入水，再放進過3%氧化氫溶液中浸泡5 min后去除，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）浸3次，5 min/次，將標本放進檸檬酸緩沖液（pH：6）行高溫高壓修復，在高壓鍋噴氣后再加熱2 min，繼而改中火2 min，關火燜10 min，取出入冷水使溫度降至37℃，再用PBS重復上述操作，完畢后加入GPC-3一抗（鼠抗人單克隆單體），留置在4℃冰箱中經一夜，再用PBS重復上述操作，DAB顯色，PBS終止染色，乙醇從低到高濃度逐級行脫水入二甲苯，最后封片。CK-19：高溫高壓修復后，在37℃行胃酶消化，時間為1 min，再加入GPC-3一抗（鼠抗人單克隆單體），其余步驟同GPC-3。

1.3評價指標? GPC-3：呈細胞質或細胞質表達，陽性：黃色、棕黃色，以計數陽性細胞率作為評估其表達強度的標準，陰性：細胞陽性率<10%;陽性：細胞陽性率≥10%。CK-19：陽性：膽管上皮細胞質呈黃色、棕黃色，表達強度評估同GPC-3。以上述標準評估各類標本中GPC-3及CK-19檢測陽性率（陽性檢出數/檢測總數），以及不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽性率。

1.4統(tǒng)計學方法? 采用SPSS 23.0軟件進行數據處理，計數資料使用[n（%）]表示，采用？字2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1三類標本GPC-3及CK-19檢測陽性率比較? ?GPC-3主要在肝癌細胞膜、細胞質上著色，即在肝癌細胞上著色，但在正常膽管細胞及肝細胞上無著色，而在ICC標本中只發(fā)現(xiàn)CK-19在正常膽管細胞和癌細胞上著色，而在肝癌細胞上基本不著色，即HCC中CK-19顯示為陰性。HCC與CHC中GPC-3陽性率高于ICC，ICC與CHC中CK-19陽性率高于HCC，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽性率? 中、低分化的HCC標本中GPC-3陽性率高于高分化HCC，中、低分化的HCC標本中CK-19陽性率高于高分化HCC，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 GPC-3聯(lián)合CK-19鑒別HCC、CHC及ICC? ? ? ? HCC：GPC-3陽性或陰性，CK-19陰性;ICC：GPC-3陰性，CK-19陽性;CHC：GPC-3陽性，CK-19陽性。以上述所得不同肝癌GPC-3、CK-19特點為鑒別標準，診斷HCC準確率為93.75%（60/64），診斷ICC準確率為89.47%（17/19），診斷CHC準確率為87.50%（7/8）。

3討論

HCC、CHC及ICC是較難區(qū)分的三種肝腫瘤，其中HCC最為常見。不同類型的肝癌，治療方法及預后結局均有較大差異，故早期診斷及準確鑒別診斷其病理類型非常重要。GPC-3屬于癌胚蛋白的一種，為肝癌標志物，可經糖基磷脂酰肌醇與細胞膜相連接，是影響細胞生長及分化的重要物質，其表達具有顯著的器官組織及分化時相特異性[3]。且其在丙肝晚期患者中陽性率是100%，而在良性肝病及健康者中表達接近0，可作為診斷肝癌的重要指標[4]。

王娟等[5]研究顯示，CK-19與GPC-3的表達可提高臨床對HCC、CHC及ICC診斷的敏感性及特異性的結論。本研究結果顯示，GPC-3主要在肝癌細胞膜、細胞質上著色，即在肝癌細胞上著色，但在正常膽管細胞及肝細胞上無著色，而在ICC標本中只發(fā)現(xiàn)CK-19在正常膽管細胞和癌細胞上著色，而在肝癌細胞上基本不著色，即HCC中CK-19顯示為陰性。此外，HCC標本的GPC-3陽性檢出率超過80%，而HCC標本的CK-19檢測結果全部為陰性，但在CHC及ICC中陽性率超過90%，表明HCC具有CK-19陰性而GPC-3多為陽性的特點，據此可將其與CHC及ICC進行區(qū)分。同時中、低分化的HCC標本中GPC-3陽性率高于高分化HCC，中、低分化HCC標本中CK-19陽性率高于高分化HCC，表明CK-19與GPC-3在中低分化HCC中陽性檢出率均較高，且高于高分化HCC，故CK-19與GPC-3在HCC早期診斷中具有一定價值，與既往研究結果一致。

綜上所述，在肝細胞癌診斷及鑒別診斷中采取GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測，可有效檢出HCC并可與CHC及ICC進行區(qū)分，且在早期診斷中也具有一定應用價值。

參考文獻：

[1]溫實，戴新武，黃麗娟，等.KR1B10與GPC-3免疫組化檢測對肝細胞肝癌的診斷價值[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2015，15（32）：6263-6265.

[2]劉沖，唐浩，鄧霖，等.血清miRNA-186，miRNA-30c在肝細胞性癌中診斷價值的研究[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2016，31（6）：44-47.

[3]周新剛，張亮，王鵬，等.Arginase-1聯(lián)合Glypican-3在肝細胞肝癌和非肝臟來源腫瘤鑒別診斷中的意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2017，33（8）：841-846.

[4]晏文強，謝明水，劉楊.GP73、AFP-L3與GPC-3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價值[J].中國實驗診斷學，2015，19（10）：1651-1654.

[5]王娟，張曙光，孫穎，等.免疫組化檢測GPC-3與CK-19在肝細胞癌診斷中的應用價值[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2017，16（14）：50-53.

收稿日期：2019-9-4;修回日期：2019-9-11

編輯/馮清亮