鄧艷芳 王偉 徐成體 魏希杰

（1，青海省草原總站 810008；2，青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院 810008）

飼料作為動(dòng)物的主要食物，其質(zhì)量直接關(guān)系著動(dòng)物品質(zhì)的高低。飼料中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，因而飼料在加工、運(yùn)輸及儲(chǔ)藏過(guò)程中極容易遭到微生物的感染，在降低飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的同時(shí)也容易對(duì)動(dòng)物健康造成威脅。微生物指標(biāo)作為飼料標(biāo)準(zhǔn)中的一個(gè)重要內(nèi)容，其實(shí)際測(cè)定過(guò)程中的培養(yǎng)基可以根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)由實(shí)驗(yàn)室自制。或者通過(guò)購(gòu)買(mǎi)市售的商品化培養(yǎng)基。本文分別采用自制及購(gòu)買(mǎi)的不同培養(yǎng)基對(duì)3種飼料菌落及霉菌總數(shù)進(jìn)行測(cè)定，從而驗(yàn)證自制及市購(gòu)成品培養(yǎng)基對(duì)飼料微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)飼料分別從北京科奧協(xié)力飼料有限公司購(gòu)入SPF 大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料、兔維持飼料及犬維持飼料。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

平板計(jì)數(shù)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊芝、馬鈴薯-葡萄糖瓊脂、孟加拉紅培養(yǎng)基葡萄糖瓊脂粉及酵母膏購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；胰蛋白胨、葡萄糖及瓊脂粉購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯霉素購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

LDZH-100KBS 不銹鋼立式滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠(chǎng)）；TXB622L 電子天平（島津企業(yè)管理有限公司）；LRH-450F 生化培養(yǎng)箱（上海捷呈實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；BMJ-250C霉菌培養(yǎng)箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌落總數(shù)檢驗(yàn)培養(yǎng)基

（1） 自制平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基

分別稱(chēng)取5g 胰蛋白胨，2.5g 酵母浸膏，1.0g 葡萄糖以及15.0g 瓊脂，加水至1L，在121℃下高壓滅菌15min。

（2） 市購(gòu)成品平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基

稱(chēng)取23.5g 的平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，加水至1L，在121℃下高壓滅菌15min。

（3） 市購(gòu)成品營(yíng)養(yǎng)瓊脂

稱(chēng)取32g 營(yíng)養(yǎng)瓊脂，加水至1L，121℃下高壓滅菌15min。

1.2.2 霉菌總數(shù)檢驗(yàn)培養(yǎng)基

（1） 自制馬鈴薯—葡萄糖瓊脂

將馬鈴薯去皮并切塊后，加入1L 的純水煮沸20min，并用紗布進(jìn)行過(guò)濾。稱(chēng)取300g 的馬鈴薯、20g 的葡萄糖、20g 的瓊脂及0.1g 的氯霉素，加水至1L 后高壓滅菌20min。

（2） 市購(gòu)成品馬鈴薯-葡萄糖瓊脂

稱(chēng)取38g 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂，加水至1L 后在121℃下高壓滅菌20min。

（3） 市購(gòu)成品孟加拉紅培養(yǎng)基

稱(chēng)取35g 孟加拉紅培養(yǎng)基，加水至1L 后在121℃下高壓滅菌20min。

1.2.3 菌落及樣品總數(shù)檢驗(yàn)

（1） 樣品稀釋

在無(wú)菌條件下稱(chēng)取25.0g 飼料，加到裝有225ml 氯化鈉注射液的錐形瓶中，充分振蕩后制成1∶10 的樣品勻液；取1ml 1∶10 的樣品勻液加到裝有9ml 氯化鈉注射液的試管內(nèi)，充分震蕩制成1∶100 的樣品勻液；取1ml 1∶100 的樣品勻液，并加入含有9ml 的氯化鈉注射液的試管內(nèi)，充分震蕩形成1∶1000 的樣品勻液。分別取1ml 的氯化鈉注射液及各個(gè)稀釋樣品勻液加入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，做3 次重復(fù)。

（2） 培養(yǎng)

分別將冷卻后的培養(yǎng)基傾注至平皿內(nèi)，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其充分混合。將菌落總數(shù)檢驗(yàn)培養(yǎng)基置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)在36℃下培養(yǎng)48h，將霉菌總數(shù)檢驗(yàn)培養(yǎng)基置于霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)在28℃下培養(yǎng)5d。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)對(duì)不同動(dòng)物飼料菌落總數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，3種培養(yǎng)基大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料各個(gè)稀釋液均沒(méi)有菌落生長(zhǎng)；兔維持飼料1∶10 的稀釋比例菌落總數(shù)均多不可數(shù)，1∶100 稀釋比例下自制平板、市購(gòu)成品平板以及市購(gòu)成品營(yíng)養(yǎng)瓊脂的菌落總數(shù)分別為79.33±8.02、80.38±7.54、78.21±5.67，1∶1000 的稀釋比例下3種培養(yǎng)基上的菌落總數(shù)分別為29.85±2.34、30.25±2.83、27.21±2.66，各培養(yǎng)基上細(xì)菌總數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）；對(duì)于犬維持飼料，1∶10 的稀釋比例下自制平板、市購(gòu)成品平板及市購(gòu)成品營(yíng)養(yǎng)瓊脂的菌落總數(shù)分別為49.78±7.88、51.05±9.04、48.23±8.93，1∶100 稀釋比例下分別為15.23±4.03、16.02±2.78、14.17±3.05；1∶1000 的稀釋比例下分別為2.01±0.89、1.73±1.02、1.17±0.98，各個(gè)稀釋比例3種培養(yǎng)基上細(xì)菌總數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。

不同飼料霉菌總數(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，對(duì)SPF 大小鼠繁殖飼料，3種不同的飼料各稀釋比例均沒(méi)有霉菌生長(zhǎng)；兔維持飼料1∶10 稀釋比例下自制馬鈴薯-葡萄糖瓊脂、市購(gòu)成品馬鈴薯-葡萄糖瓊脂及市購(gòu)成品孟加拉紅培養(yǎng)基上霉菌總數(shù)分別為3.88±1.53、3.56±1.78、3.56±0.69，1∶100 稀釋比例下分別為0.29±0.47、0.58±0.45、0.58±0.45，3種培養(yǎng)基上霉菌總數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），1∶1000 比例下3種培養(yǎng)基均沒(méi)有霉菌生長(zhǎng)；對(duì)于犬維持飼料，1∶1000 比例3種培養(yǎng)基均無(wú)霉菌生長(zhǎng)，1∶10的稀釋比例下3種培養(yǎng)基上霉菌總數(shù)分別為2.02±0.48、1.95±0.02、1.93±0.87，1∶100 稀釋比例下依次為0.24±0.44、0.53±0.49、0.23±0.47，3種培養(yǎng)基霉菌總數(shù)均不無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于SPF 大小鼠繁殖飼料、兔維持飼料及犬維持飼料，其不同培養(yǎng)基之間1∶10，1∶100 及1∶1000 3 個(gè)稀釋比例的菌落及霉菌總數(shù)均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基測(cè)得的菌落總數(shù)略低于平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，可能是由于平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分更為優(yōu)異。