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        玄黃膏藥對(duì)急性軟組織損傷大鼠損傷組織中IL-1β、TNF-α含量的影響*

        2019-01-05 07:20:06趙曉蕓王敏娟范俊超楊振興竇群立
        陜西中醫(yī) 2019年1期
        關(guān)鍵詞:玄黃外治藥膏

        程 延,趙曉蕓,王敏娟,范俊超,楊振興,竇群立

        1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院骨傷二科(西安710003);2.西電集團(tuán)醫(yī)院急診科(西安710077);3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨傷科(咸陽(yáng)712000)

        急性軟組織損傷在日常生活中十分常見(jiàn),不僅影響人們的日常生活和工作,而且還會(huì)帶來(lái)極大的精神痛苦與醫(yī)療費(fèi)用支出[1-2]。更為嚴(yán)重的是,如果此類損傷不及時(shí)治療和后期正規(guī)康復(fù),往往會(huì)出現(xiàn)慢性、持續(xù)性疼痛,影響人們損傷肢體的功能恢復(fù)及正?;顒?dòng),重者甚至導(dǎo)致自理能力障礙[3]。中醫(yī)藥治療急性軟組織損傷具有很多優(yōu)勢(shì),尤其以外用藥膏、膏藥等最為廣泛,效果顯著[4]。多年來(lái)我們使用純中藥制劑玄黃藥膏治療急性軟組織損傷患者,取得明顯效果,而且該藥使用方法簡(jiǎn)單,使用中未發(fā)生毒副作用及過(guò)敏反應(yīng)等[5]。本課題在前期研究的基礎(chǔ)上,通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究玄黃藥膏對(duì)大鼠急性軟組織損傷模型損傷組織中IL-1β、TNF-α含量的變化,進(jìn)一步探討其治療急性軟組織損傷的機(jī)理。

        材料與方法

        1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠72只,雌雄各半,第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK9(陜):2014-006)。適應(yīng)性喂養(yǎng)3d,精選合格飼料,每天清洗籠具,保持室內(nèi)宜溫、宜濕及室內(nèi)清潔。

        2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 玄黃藥膏組成:酒大黃15 g,梔子30g,蒲公英9g,乳香、沒(méi)藥各8g,?蟲(chóng)3g。所有藥材購(gòu)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房,藥物符合國(guó)家中草藥質(zhì)量規(guī)定。

        藥膏制備:將以上6味中藥按100~120目粉為細(xì)末備用,置于500ml圓底燒瓶中,稱重。然后按1∶1比例向燒瓶中加入凡士林?jǐn)嚢杈鶆颍瞥尚S藥膏,密封,4℃冰箱保存,備用。藥膏制作在陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心完成。

        實(shí)驗(yàn)試劑:扶他林軟膏購(gòu)自諾華制藥西安經(jīng)銷商。IL-1β試劑盒購(gòu)自??藸柹锟萍脊疚靼步?jīng)銷商。TNF-α試劑盒購(gòu)自圖赫實(shí)業(yè)(上海)有限公司。

        3 實(shí)驗(yàn)方法

        3.1 動(dòng)物分組與造模:大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后,隨機(jī)分為模型對(duì)照組(A組)、扶他林組(B組)、玄黃藥膏組(C組)三組,每組24只。實(shí)驗(yàn)前1天用8%硫化鈉涂抹于每組大鼠的右大腿,進(jìn)行術(shù)前脫毛處理,并且對(duì)打擊部位進(jìn)行標(biāo)記處理、編號(hào);實(shí)驗(yàn)當(dāng)天用質(zhì)量100 g的砝碼,從50cm高度的固定位置經(jīng)由塑料管落下,使砝碼準(zhǔn)確打擊到大鼠肢體的標(biāo)記處,反復(fù)進(jìn)行3次,觀察損傷模型。

        3.2 治療方法:造模成功30min后開(kāi)始給藥,玄黃藥膏組、扶他林組分別外敷玄黃藥膏和扶他林各3g,空白對(duì)照組給予凡士林外敷。24h換藥1次,共10d,各組治療完成后用醫(yī)用的紗布覆蓋創(chuàng)面,膠布固定。

        3.3 檢測(cè)指標(biāo):在治療后第1、3、7、10天,每組分別處死6只動(dòng)物,取治療處表皮,組織剪剪下?lián)p傷中心處組織,醫(yī)用鹽水漂洗1min,濾紙將其吸收干后用天平稱重,?。?00±5)mg,10mg組織中配備生理鹽水0.5ml,組織在勻漿器里面均勻的研磨,15min后觀察并且等到勻漿液看上去呈均勻一致懸濁液時(shí),其容器里面均勻的處理到達(dá)15min,等到勻漿液看上去呈上一次處理差不多均勻的液體時(shí),再將組織放于醫(yī)用鹽水漂洗1min,吸干后,再重復(fù)稱取,配醫(yī)用鹽水,組織勻漿等,等到勻漿的組織又一次呈均勻一致的時(shí)候去其液體。再將其放到高速冷凍離心機(jī)中進(jìn)行處理15 min,將上面的液體收集起來(lái),放置于-20℃冰箱中備用。用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)測(cè)定損傷組織中IL-1β、TNF-α含量,具體操作步驟按照試劑盒操作說(shuō)明完成。

        4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢測(cè)結(jié)果以表示,采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        治療后,玄黃藥膏組動(dòng)物損傷組織中IL-1β、TNF-α含量逐漸降低,且隨治療時(shí)間延長(zhǎng),降低越明顯,在各時(shí)間點(diǎn)均低于空白對(duì)照組,優(yōu)于扶他林組(P<0.05),組內(nèi)及組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同時(shí)間各組大鼠損傷組織中IL-1β、TNF-α含量變化比較見(jiàn)表1、2。

        表1 各組IL-1β含量比較(pg/ml)

        表2 各組TNF-α含量比較(pg/ml)

        討 論

        急性軟組織損傷屬中醫(yī)“急性筋傷”范疇,指身體遭受外力作用,引起皮膚、筋膜、肌肉、韌帶、肌腱等損傷,表現(xiàn)為局部疼痛、腫脹、皮膚青紫瘀斑、肢體活動(dòng)障礙等。損傷處常常因?yàn)槌鲅?,組織缺血缺氧等,發(fā)生急性無(wú)菌性炎癥反應(yīng),導(dǎo)致疼痛敏感性增加而疼痛明顯;炎癥致痛因子反過(guò)來(lái)又使血管收縮,導(dǎo)致缺血缺氧加重,形成惡性循環(huán)。其病理變化主要以局部炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)。研究表明[6],急性軟組織損傷的病理過(guò)程,主要是損傷的組織發(fā)生無(wú)菌性炎癥反應(yīng),導(dǎo)致炎癥介質(zhì)和促炎細(xì)胞因子釋放,其中IL-1β是炎性反應(yīng)過(guò)程中一個(gè)重要介質(zhì),組織受損后,炎癥部位及脊髓水平的濃度都會(huì)升高,而且還能誘導(dǎo)其他促炎因子釋放,促進(jìn)、維持炎癥反應(yīng),引發(fā)炎性疼痛。外周組織IL-1β的釋放,使炎癥傷害信息傳入敏化,并誘發(fā)機(jī)械和熱痛覺(jué)過(guò)敏;脊髓水平IL-1β的釋放可以通過(guò)不同的機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)疼痛,這可能與急性疼痛轉(zhuǎn)化為慢性疼痛且慢性疼痛長(zhǎng)期持續(xù)的存在有關(guān)。TNF-α具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng),可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,使機(jī)體發(fā)熱,誘導(dǎo)促進(jìn)炎癥反應(yīng)和誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-1、IL-2等多種細(xì)胞因子,誘發(fā)和擴(kuò)大炎癥反應(yīng),通過(guò)刺激、生成超氧化物,釋放出溶酶體而損傷組織細(xì)胞,使炎癥介質(zhì)聚集,TNF含量與創(chuàng)傷嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。楊進(jìn)等[7]應(yīng)用消腫止痛膏治療角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹,發(fā)現(xiàn)血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量較模型組降低(P<0.05),說(shuō)明消腫止痛膏通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠角叉菜膠足腫脹血清內(nèi)炎癥因子IL-1β、TNF-α水平抑制急性炎癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

        中藥外治是中醫(yī)治療方法的一種重要形式,也最具特色。清徐大椿的《醫(yī)學(xué)源流論》說(shuō):“外科治法,最重外治”。清吳師機(jī)的《理瀹駢文》指出:“外治之理,即內(nèi)治之理;外治之藥,即內(nèi)治之藥,所異者法耳”。外治法在中醫(yī)各科應(yīng)用廣泛,其中藥膏在骨傷科使用非常廣泛,其制作、使用方便,價(jià)格低廉,深受患者信賴和歡迎。一般適用于損傷初中期[8]。中藥經(jīng)過(guò)皮膚吸收,直接作用于損傷組織局部,可以在損傷部位維持相對(duì)穩(wěn)定的血藥濃度,發(fā)揮藥物作用,達(dá)到活血祛瘀、消腫止痛的作用[9]。中藥外治不受口服給藥所帶來(lái)的胃腸道酶及消化液的影響,無(wú)明顯的毒副作用,是治療軟組織損傷不可或缺的一種治療方式[10]。

        中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,本病病機(jī)主要是氣滯血瘀、筋脈阻滯,治療應(yīng)以活血化瘀、消腫止痛為法。本實(shí)驗(yàn)以“活血化瘀、消腫止痛”為法,組外治方“玄黃藥膏”,用于治療急性軟組織損傷(急性筋傷)患者,中醫(yī)證屬“氣滯血瘀”型,經(jīng)多年應(yīng)用,效果顯著。方中大黃、?蟲(chóng)為君藥,用以破瘀通經(jīng)、消腫止痛,乳香、沒(méi)藥輔助活血、行氣、消腫,梔子、蒲公英清熱舒筋,助大黃清泄瘀熱之力。全方共奏活血祛瘀、消腫止痛之效?,F(xiàn)代藥理研究表明,大黃中的大黃素可以抑制炎癥因子生成,對(duì)TNF和IL-1具有十分明顯的抑制作用[11];可降低佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠致炎關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞中PGE2和TNF-α水平;可提高血漿滲透壓,使組織水分向血管內(nèi)轉(zhuǎn)移,以補(bǔ)充血容量,降低血漿黏度[12]。梔子中格尼帕素及去羥梔子甙對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用,同時(shí)具有顯著的鎮(zhèn)痛效果,乳香、沒(méi)藥提取物具有強(qiáng)烈的鎮(zhèn)痛作用。蒲公英有明顯的抗菌、抗病毒作用,這和其清熱解毒的功效聯(lián)系緊密。資料表明[13],活血化瘀藥可以降低毛細(xì)血管通透性,減少炎癥滲出及紅細(xì)胞外漏,對(duì)局部血液循環(huán)尤其是微循環(huán)有修復(fù)和恢復(fù)作用,從而改善組織缺血缺氧狀態(tài),恢復(fù)正常的新陳代謝,加快損傷組織修復(fù)。能夠促進(jìn)大鼠急性軟組織損傷模型損傷部位腫脹、瘀血消散,加快組織修復(fù)。這與中醫(yī)關(guān)于筋傷的認(rèn)識(shí)機(jī)理及辨證論治是相吻合。

        本項(xiàng)目前期研究顯示[14],玄黃藥膏能夠明顯降低損傷組織中IL-6和PGE2含量(P<0.05)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,玄黃藥膏組動(dòng)物損傷組織中IL-1β和TNF-α的含量明顯低于空白對(duì)照組,并優(yōu)于扶他林組(P<0.05),說(shuō)明玄黃藥膏具有明顯的抑制局部損傷組織中炎癥因子產(chǎn)生的作用,從而減輕局部炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí),玄黃藥膏可以顯著降低損傷組織中IL-1β、TNF-α含量,從而有效減少損傷組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織出血、血管擴(kuò)張,抑制一系列炎癥反應(yīng),使痛覺(jué)感受器敏感性降低,痛閾升高以鎮(zhèn)痛。其機(jī)理可能與減少炎性與促炎介質(zhì)分泌和釋放,促進(jìn)炎性因子代謝,有效降低損傷軟組織的炎性反應(yīng)有關(guān)。

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