劉健

（山東省平邑縣畜牧獸醫(yī)局平邑畜牧獸醫(yī)站 273300）

1984年，中國(guó)南方省份首次報(bào)道了一種急性出血性兔病。隨后迅速傳播到華南和華北部分地區(qū)。該疾病的特征是急性起病，發(fā)熱，呼吸急促和猝死，發(fā)病率和死亡率都很高。該疾病被命名為兔病毒性出血癥，病原體是小核糖核酸病毒。使感染兔子的肝臟、肺臟、脾臟和腎臟均質(zhì)化并用甲醛滅活來(lái)制備組織來(lái)源的疫苗。

1 兔病毒性出血癥概述

兔病毒性出血癥可攻擊在密集條件下飼養(yǎng)的兔子。本病的主要傳染源是病兔和帶毒兔。健康兔與之接觸可感染，也可通過(guò)病兔和帶毒兔污染過(guò)的飼料、飲水、用具間接傳染，或經(jīng)呼吸道或黏膜感染。各種家兔均有易感性，其中以長(zhǎng)毛兔最易感[1]。實(shí)驗(yàn)感染后潛伏期約為20～48h。自然病例中，潛伏期為數(shù)小時(shí)至1～2d。自然發(fā)病率爆發(fā)率為70%～80%，受影響的兔子死亡率高達(dá)95%。不同地區(qū)的疫情表現(xiàn)出許多相似之處，可分為3類，超急性形式、急性形式和亞急性形式。

超急性形式兔病毒性出血癥通常在首次引入疾病時(shí)出現(xiàn)。受感染的兔子經(jīng)常沒(méi)有任何臨床突然死亡。偶爾會(huì)出現(xiàn)鼻孔出血和陰道出血現(xiàn)象。急性兔病毒性出血癥在疾病流行地區(qū)占主導(dǎo)地位。受感染的動(dòng)物通常表現(xiàn)出抑郁，不愿意移動(dòng)和厭食。在疾病早期和發(fā)展階段，體溫通常升高至41℃或更高，然后在終末期降至正常水平以下。大多數(shù)動(dòng)物具有快速呼吸和發(fā)紺。一些動(dòng)物表現(xiàn)出腹脹，便秘、腹瀉和血尿。最終，這些動(dòng)物變得斜躺，并使用四肢劃動(dòng)，有些動(dòng)物在抽搐期間死亡。大約20%受影響的兔子鼻孔出現(xiàn)泡沫狀出血。急性兔病毒性出血癥的病程在12～36h。亞急性兔病毒性出血癥經(jīng)常在流行病后期階段遇到。兔子表現(xiàn)出抑郁，厭食和高體溫，身體消瘦，最后衰竭死亡。這些動(dòng)物具有感染性，易感染其他家兔。

2 診斷方法

2.1 病毒分離

病毒的分離與鑒定是診斷兔病毒性出血癥病毒比較準(zhǔn)確、可靠的方法。將無(wú)菌采集的病死兔肝臟等組織經(jīng)過(guò)一系列處理，取上清液過(guò)濾除菌后接種無(wú)兔病毒性出血癥疫苗免疫史和感染史的成年健康易感家兔，并設(shè)立對(duì)照組。觀察兔發(fā)病情況，判斷是否為兔病毒性出血癥病毒感染。對(duì)分離得到的病毒還需進(jìn)行血凝試驗(yàn)、電鏡觀察、RT-PCR等操作來(lái)做進(jìn)一步鑒定。

2.2 血凝和血凝抑制試驗(yàn)

兔病毒性出血癥病毒只有一種血清型，只能凝集人的“O”型紅細(xì)胞，而不凝集其他動(dòng)物，如馬、牛、羊等的紅細(xì)胞，這種凝結(jié)性質(zhì)比較穩(wěn)定。在一定范圍內(nèi)不受溫度、有機(jī)溶劑及某些無(wú)機(jī)離子的影響。血凝和血清抑制試驗(yàn)在兔病毒性出血癥的診斷、兔群免疫監(jiān)測(cè)等方面得到廣泛應(yīng)用，但由于血凝和血清實(shí)驗(yàn)需要人“O”型紅血球制備紅細(xì)胞，樣本血清需經(jīng)吸附處理、試驗(yàn)操作煩瑣、可重復(fù)性差，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。

2.3 RT-PCR方法

RT-PCR技術(shù)具有靈敏、特異、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是實(shí)驗(yàn)室常用的分子生物診斷技術(shù)，也是目前檢測(cè)兔病毒出血癥病毒的主要方法。RT-PCR技術(shù)主要包括常規(guī)RT-PCR方法、套式RT-PCR方法和多重RT-PCR方法。常規(guī)RT-PCR方法可以實(shí)現(xiàn)兔病毒出血癥與其他豬病原體的鑒別檢測(cè)。套式RT-PCR是PCR的一種改良模式，具有更高的特異性和敏感性。隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，兔群多病原混合感染的情況越來(lái)越普遍。多重RT-PCR具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)而且可以同時(shí)檢測(cè)多種病原體。

2.4 FQ-PCR方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescenquantitative polymerase chain reaction，F(xiàn)Q-PCR）方法是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種高度靈敏的核酸定量技術(shù)，是一種新型分子生物學(xué)診斷技術(shù)。熒光定量RT-PCR技術(shù)因?yàn)槎繙?zhǔn)確，具有較高的靈敏度和較強(qiáng)的特異性等優(yōu)點(diǎn)，成為核酸檢測(cè)的重要工具，為兔病毒出血癥的診斷提供了新的模式。

2.5 酶聯(lián)免疫吸附免疫實(shí)驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）主要包括抗原ELISA檢測(cè)方法和抗體ELISA檢測(cè)方法?？乖璄LISA檢測(cè)方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)快捷，為檢測(cè)兔病毒性出血癥病毒開(kāi)發(fā)奠定了強(qiáng)有力的基礎(chǔ)?？贵wELISA法具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，易于規(guī)格化和標(biāo)準(zhǔn)化，在國(guó)內(nèi)外廣泛用于細(xì)菌、病毒及寄生蟲(chóng)抗原和抗體的檢測(cè)[2]。

2.6 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)（Gold immunochromatography assay，GICA）是層析法與免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合的診斷技術(shù)，具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景[3]。該方法為兔病毒性出血癥的現(xiàn)場(chǎng)診斷提供了有效方法，顯示出很好的臨床應(yīng)用前景。

3 小結(jié)與展望

兔病毒性出血癥是20世紀(jì)末新爆發(fā)的兔烈性傳染病，給兔群帶來(lái)毀滅性的打擊和極大的危害性，做好兔病毒性出血癥疾病的診斷和預(yù)防工作是利國(guó)利民的一件大事。在兔病毒出血癥的診斷方法中，病毒的分離與鑒定法是一種準(zhǔn)確可靠的診斷方法，但由于操作周期長(zhǎng)、實(shí)驗(yàn)煩瑣，不建議在實(shí)驗(yàn)室中采用。FQ-PCR方法的特異性強(qiáng)、敏感性高、檢出率高、且在兔感染病毒的早期即可檢測(cè)到病毒核酸，但該方法對(duì)操作人員、儀器設(shè)備與試劑要求較高。ELISA方法具有敏感性和特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、重復(fù)性好、無(wú)輻射、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，適合基層進(jìn)行大批量檢測(cè)，非常適合基層獸醫(yī)部門和廣大養(yǎng)殖戶應(yīng)用。