于莉 劉中書

（洪雅縣疾控中心 四川 洪雅 620360）

布魯氏菌是革蘭氏陰性小桿菌，易感染牛、羊、豬等家畜。人類與病畜接觸或食用病畜肉、乳及乳制品后，也可引起感染，得布魯氏菌病。布病是由布魯氏菌屬細(xì)菌侵入人、動物機體內(nèi)引起的人畜共患的急性傳染病，嚴(yán)重影響了人的身體健康。我們基層疾控中心實驗室常用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗來進(jìn)行分析。

檢測主要通過室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控來實施。室內(nèi)質(zhì)控主要包括人員、環(huán)境、儀器設(shè)施、方法和標(biāo)準(zhǔn)等方面來控制；室間質(zhì)控主要通過上級部門質(zhì)控考核來實現(xiàn)。

室內(nèi)質(zhì)量控制：（1）人員的要求：檢驗人員不僅要有專業(yè)知識和熟練的技術(shù)，還須通過相應(yīng)的培訓(xùn)持證上崗。（2）設(shè)施和環(huán)境條件：實驗室的檢測的設(shè)施以及環(huán)境應(yīng)滿足相關(guān)技術(shù)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)的要求。（3）設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：所有儀器設(shè)備必須建立檔案，專人管理，并定期對其進(jìn)行檢定、校準(zhǔn)和維護(hù)；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)須在有資質(zhì)（國家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)）的地方購買。（4）實驗室應(yīng)優(yōu)先選擇國家標(biāo)準(zhǔn)、再使用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)等，確保使用標(biāo)準(zhǔn)是最新有效的版本。（5）實驗耗材對檢測結(jié)果的影響非常大，為滿足檢測的要求，應(yīng)從購買、使用、儲存等環(huán)節(jié)都要按規(guī)定加以嚴(yán)格控制。

在滿足以上這些條件后，就可以開始進(jìn)行樣品的分析了，樣品分析主要通過分析前、分析中、分析后三個環(huán)節(jié)來實施，三個環(huán)節(jié)都是非常重要，相互影響，相互制約，缺一不可的。

一、分析前質(zhì)量控制是最薄弱的環(huán)節(jié)，這一環(huán)節(jié)也是是確保檢驗信息正確、有效的先決條件，樣本的采集前要登記病人的姓名、性別、年齡、住址、工作單位、身份證號碼、電話等基本信息：病人以往的病史，是否有與牲畜及其相關(guān)產(chǎn)品有接觸史，臨床表現(xiàn)怎樣：是否出現(xiàn)連續(xù)幾天甚至幾周持續(xù)發(fā)熱，多汗，乏力，肌肉以及關(guān)節(jié)疼痛等臨床癥狀。樣品采集后待血清完全分離，再進(jìn)行檢驗，如特殊情況下不能及時檢驗的樣品，應(yīng)分離血清后放入冰箱4℃保存，切不可冷凍存放。

二、分析中質(zhì)量控制是最重要的環(huán)節(jié)，第一，樣品采集后血清的分離：一般是采集后待血液自然凝固后分離出血清，如要縮短時間，需將樣品放入37℃的3箱中孵育30分鐘，待血清完全分離出后再檢驗，我們做過一個比對，同樣采集40個病人的血液標(biāo)本，一種方法是樣本采集后用離心機及時分離出血清，進(jìn)行虎紅平板凝集試驗陽性率為36個，另一種方法是樣本采集后待其自然凝固后分離出血清，進(jìn)行虎紅平板凝集試驗陽性率為30個，再把這些陽性樣本用試管凝集試驗作確認(rèn)，第一種方法的陽性率為30個；第二種方法的陽性率為29個，由此看來，第一種方法出現(xiàn)假陽性的比例較大，大概是20%左右，后來尋找原因，是因為血清未充分分離，里面含有的纖維蛋白絲，與虎紅平板抗原凝集引起假凝集現(xiàn)象，導(dǎo)致實驗結(jié)果假陽性。所以這些細(xì)小的環(huán)節(jié)都是影響實驗的成敗的關(guān)鍵。第二，檢驗中的注意事項：（1）虎紅平板凝集試驗：①必須是清潔的脫脂玻片，因為如果玻片被污染了會影響分析結(jié)果；②經(jīng)過校準(zhǔn)的0.1ml吸管或微量加樣器，這樣加樣才準(zhǔn)確；③充分混勻，混勻不混勻也會影響分析結(jié)果；④在規(guī)定的時間5min內(nèi)判定結(jié)果，超出時間判定結(jié)果可能出現(xiàn)假陽性或假陰性，虎紅平板凝集試驗主要是定性實驗，結(jié)果可分為陰性、陽性兩類。（2）試管凝集試驗：注意事項：①使用經(jīng)過校準(zhǔn)的吸管，被檢血清的稀釋要求準(zhǔn)確。②同時做陰性血清對照和陽性血清對照。③準(zhǔn)確制備判定比濁管，特別是50%清亮度(＋＋)對判定結(jié)果關(guān)系較大。④充分振蕩后放置37℃溫箱中20～22小時，取出后放室溫2小時，再以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。確定每份血清滴度是以出現(xiàn)“十十”及以上的凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度。血清凝集價在1∶50時，該血清樣品疑似反應(yīng)時，經(jīng)3～4周后須再做一次檢查，仍為疑似反應(yīng)者判為陽性，凝集價在1∶50以下則為陰性反應(yīng)。

三、分析后的質(zhì)量控制是最容易忽視的環(huán)節(jié)，認(rèn)為樣品分析完了，也有分析結(jié)果了就沒有什么用了，可以隨意丟棄了，分析后的血液樣品須留樣一周，以待結(jié)果有疑問時復(fù)查。留樣一周后，仍不能隨意丟棄，因其仍具有感染性，須經(jīng)過高壓滅菌器滅菌后，打包后交接給廢棄物管理接收員，統(tǒng)一移交專業(yè)公司處理。

實驗室間質(zhì)量控制主要通過上級部門的質(zhì)量控制考核來實現(xiàn)，每年參加上級部門舉辦的布魯氏菌病監(jiān)測點血清學(xué)質(zhì)量控制考核，并且成績達(dá)到合格。

只有把握好布病檢測的每一個環(huán)節(jié)，保證結(jié)果質(zhì)量，才能更好地完成布病監(jiān)測工作。其發(fā)病又是一個比較復(fù)雜的過程，其臨床表現(xiàn)多種多樣，很難用其中某一臨床癥狀來確診，對于布病病人的診斷應(yīng)綜合考慮，通過病人的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果、臨床癥狀以及實驗室分析后結(jié)果來判定。