陳咪咪 褚耿磊 黃迎康 李 斌 施 勤

(蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部，蘇州 215007)

巨噬細(xì)胞(Mφ)，是一種廣泛分布于全身血液、組織的免疫細(xì)胞[1]，能夠吞噬和殺滅胞內(nèi)寄生蟲、細(xì)菌、腫瘤細(xì)胞以及自身衰老和異常的細(xì)胞，在機(jī)體的免疫防御、免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞主要由骨髓干細(xì)胞發(fā)育而來，在多集落刺激因子(M-CSF)或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等刺激下，發(fā)育成單核母細(xì)胞，再進(jìn)一步分化成為前單核細(xì)胞并進(jìn)入血液，在此處分化成為成熟的單核細(xì)胞[2，3]。單核細(xì)胞穿過血管內(nèi)皮，遷移到不同的組織，分化成為組織特異性的巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞按照其表型和分泌的細(xì)胞因子可以分為兩種極化類型，即經(jīng)典活化的M1型和選擇性活化的M2型巨噬細(xì)胞。在 IFN-γ、LPS和TNF-α等因子的刺激下，分泌炎癥因子，發(fā)揮炎癥功能的巨噬細(xì)胞稱為M1型巨噬細(xì)胞，主要針對(duì)微生物的炎癥反應(yīng)，通過大量分泌相關(guān)細(xì)胞因子殺死病原體和腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮宿主免疫功能和防御功能[4-6]；選擇性活化的M2型巨噬細(xì)胞主要分泌抗炎因子TGF-β、IL-4、IL-10等，M2型巨噬細(xì)胞會(huì)抑制炎癥反應(yīng)，尤其在炎癥反應(yīng)后期和促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)和纖維變性中發(fā)揮重要作用，一般與寄生蟲感染、組織重構(gòu)、纖維化以及腫瘤疾病發(fā)展相關(guān)[7-9]。因此誘導(dǎo)環(huán)境中巨噬細(xì)胞M2的極化成為促進(jìn)組織工程和再生醫(yī)學(xué)的運(yùn)用的策略之一。

力學(xué)刺激在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中起非常重要的作用，參與了骨骼、肌肉、肺、血管等組織和器官的發(fā)生、發(fā)育及生長(zhǎng)。有文獻(xiàn)表明，力學(xué)刺激強(qiáng)度與炎癥反應(yīng)的強(qiáng)弱有關(guān)，已知核因子-κB(NF-κB)是涉及炎癥，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和凋亡以及多種基因的多效調(diào)節(jié)劑，與炎癥反應(yīng)密不可分[10，11]。本實(shí)驗(yàn)中通過力學(xué)拉伸這一形式探索力學(xué)刺激對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響及其可能涉及的調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料、試劑 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞Raw264.7細(xì)胞系購(gòu)自上海中科院并在本單位保存，DMEM高糖培養(yǎng)基(Hyclone，美國(guó))、胎牛血清(FBS，Gibco，美國(guó))、100 U/ml青霉素、0.1 mg/ml鏈霉素、鼠尾膠原(Sigma，美國(guó))、活/死細(xì)胞染色試劑盒(Thermo Fisher，美國(guó))、凋亡試劑盒(BD，美國(guó))、CCK-8試劑盒(同仁，日本)、CD11b-PE、CD86-FITC、CD206-FITC抗體(eBiosicence，美國(guó))、磷酸鹽緩沖液粉末(博士德生物科技有限公司，中國(guó))、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa，日本)、SYBR-Green(Bio-Rad，美國(guó))、NIK、P65、Pi-P65抗體(Abcam，英國(guó))、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)和辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)(碧云天，中國(guó))、化學(xué)發(fā)光試劑ECL顯影液(Thermo Fisher，美國(guó))。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞處理 提前12 h向無菌的拉伸皿內(nèi)加入配制的collagenⅠ溶液(1 ml的PBS溶液中加入100 μl的鼠尾膠原)，放在培養(yǎng)箱內(nèi)靜置過夜。12 h后，接種1×105Raw264.7細(xì)胞，放置在培養(yǎng)箱內(nèi)靜置2 d。2 d后開始拉伸，設(shè)置5%的幅度，頻率為0.5 Hz(拉伸的長(zhǎng)度與原始長(zhǎng)度的比例為5%)，每天拉伸4 h，連續(xù)拉伸3 d、5 d后，再繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞上清液和細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)、PCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)。

1.2.1.1活/死細(xì)胞染色檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài) 吸掉上清液，用PBS溶液輕輕地洗一遍，按照活/死細(xì)胞染色試劑盒說明書配制，即A(鈣黃綠素)∶B(溴乙菲啶豪莫二聚體)∶培養(yǎng)基為 1 μl∶2 μl∶2 ml，加到各組的拉伸皿內(nèi)，室溫避光孵育30 min，PBS溶液清洗2次，通過倒置熒光顯微鏡(Zeiss，德國(guó))進(jìn)行觀察拍照。

1.2.1.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài) 吸掉上清液，用PBS溶液輕輕地洗一遍，0.25%胰酶消化細(xì)胞，1 000 r/min，離心5 min，棄上清，立即置于冰上，分別加入相對(duì)應(yīng)體積的PBS+2%FBS溶液以及相對(duì)應(yīng)的PI和AV，每孔分別加入PI、AV為5 μl、10 μl，加到各組的拉伸皿內(nèi)，4℃室溫避光孵育30 min，離心，1 000 r/min離心5 min，棄上清(洗去未結(jié)合的凋亡試劑)，每孔加入200 μl PBS+2%FBS溶液，轉(zhuǎn)移至96孔板內(nèi)，流式細(xì)胞儀(Merk Millipore，德國(guó))測(cè)試。

1.2.1.3Cell Count Kit (CCK-8)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài) 吸掉上清液，用PBS溶液輕輕地洗一遍，按照CCK-8試劑∶培養(yǎng)基為1∶10配制液體，將配好的液體加入各組的拉伸皿內(nèi)，完全覆蓋細(xì)胞，37℃培養(yǎng)箱孵育2 h，每皿分別吸出100 μl轉(zhuǎn)移至96孔板內(nèi)，450 nm測(cè)其吸光度值。

1.2.2細(xì)胞表型分析 0.25%胰酶消化細(xì)胞，1 000 r/min，離心5 min，棄上清，立即置于冰上，分別加入相對(duì)應(yīng)體積的PBS+2%FBS溶液以及相對(duì)應(yīng)的熒光抗體(CD11b、CD86、CD206)，冰上孵育30 min 后，1 000 r/min離心5 min，棄上清(除去未結(jié)合的熒光抗體)，每孔加入200 μl PBS+2%FBS溶液，轉(zhuǎn)移至96孔板內(nèi)，流式細(xì)胞儀(Merk Millipore，德國(guó))測(cè)試。

1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR Trizol溶液裂解細(xì)胞，通過氯仿-異丙醇-75%酒精等試劑提取RNA，通過測(cè)量其在260 nm處的吸光度計(jì)算總RNA的濃度，1 μg RNA通過逆轉(zhuǎn)錄后得到cDNA，然后再進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光PCR(Bio-Rad，美國(guó))。檢測(cè)的引物分別為致炎基因IL-1β、TNF-α、iNOS和抗炎基因IL-4、IL-10和TGF-β(本實(shí)驗(yàn)引物由金唯智生物科技有限公司合成，基因序列如表1)。

表1基因引物序列

Tab.1Geneprimersequence

GenePrimer sequenceβ-actinForward:5′-GTGACGTTGACATCCGTAAAGA-3′Reverse:5′-GCCGGACTCATCGTACTCC-3′IL-1βForward:GCAACTGTTCCTGAACTCAACT-3′Reverse:5′-ATCTTTTGGGGTCCGTCAACT-3′iNOSForward:5′-ATAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC-3′Reverse:5′-GATGAATTGGATGGTCTTGGTCC-3′TNF-αForward:5′-TGTTACTGCCAGGACCCATA-3′Reverse:5′-CTTCCTTGATGGTCTCCACA-3′IL-4Forward:5′-GGTCTCAACCCCCAGCTAGT-3′Reverse:5′-GCCGATGATCTCTCTCAAGTGAT-3′IL-10Forward:5′-GCTCTTACTGACTGGCATGAG-3Reverse:5′-CGCAGCTCTAGGAGCATGTG-3′TGF-β1Forward:5′-CAGTACAGCAAGGTCCTTGC-3′Reverse:5′-ACGTAGTAGACGATGGGCAG-3′

1.2.4Western blot 0.25%胰酶消化細(xì)胞，1 000 r/min，離心5 min，棄上清后立即置于冰上，加入100 μl 的蛋白裂解液， 4℃搖床上震蕩20 min， 14.8×103g離心20 min，上層無色液體為蛋白溶液。通過BCA試劑盒測(cè)出各組蛋白濃度，調(diào)節(jié)蛋白濃度，加入1/4體積的5×buffer溶液，100℃金屬浴5 min。蛋白上樣量為20 μg，孵育抗體有actin、P65、磷酸化P65和NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)抗體，一抗4℃孵育過夜，選擇相對(duì)應(yīng)的Western blot二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG和辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG)，室溫孵育1 h。使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑ECL顯影液來使蛋白條帶顯影，通過放射自顯影儀器曝光(Bio-Rad，美國(guó))，Image Lab軟件(Bio-Rad，美國(guó))分析條帶的灰度值，檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.15%幅度的力學(xué)拉伸對(duì)Raw264.7細(xì)胞的生長(zhǎng)無影響 細(xì)胞可以感受微環(huán)境的改變并產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)。力學(xué)刺激對(duì)小鼠Raw264.7細(xì)胞的增殖作用通過活/死細(xì)胞染色、CCK-8和流式凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，如圖1A所示，未拉伸對(duì)照組的Raw264.7細(xì)胞幾乎都是活細(xì)胞(綠色)。經(jīng)過5%幅度拉伸的Raw264.7細(xì)胞幾乎也都是活細(xì)胞，圖1B中能觀察到零星的死細(xì)胞(紅色)，但相對(duì)于對(duì)照組來說其差異性并不顯著。流式凋亡結(jié)果(圖1C、D)表明，經(jīng)過5%幅度作用的Raw264.7細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞的凋亡率相似，5%幅度拉伸組的凋亡率略大于對(duì)照組，但兩者之間的凋亡率并沒有顯著性的差異。由圖1E可得，對(duì)照組和5%幅度拉伸組的OD值都由0.53增加到4.0，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，表明拉伸不影響細(xì)胞增殖。以上結(jié)果顯示5%幅度的力學(xué)拉伸不影響小鼠Raw264.7細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2.2拉伸抑制巨噬細(xì)胞M1方向極化而促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2方向極化 為了探索5%幅度的力學(xué)拉伸對(duì)Raw264.7細(xì)胞極化的影響，本實(shí)驗(yàn)用流式方法來檢測(cè)Raw264.7細(xì)胞CD11b陽性的細(xì)胞表面CD86分子(M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物)和CD206分子(M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物)的表達(dá)量。結(jié)果顯示，相對(duì)于對(duì)照組，5%幅度的拉伸可以有效抑制CD86分子的表達(dá)。而CD206分子的表達(dá)略高于對(duì)照組。第3天對(duì)照組CD86/CD206比值是5%幅度拉伸CD86/CD206比值的2.5倍(圖2A、B、E)，第5天對(duì)照組CD86/CD206比值是5%幅度拉伸CD86/CD206比值的15倍(圖2C、D、F)。因此，5%幅度的拉伸可以顯著性增加Raw264.7細(xì)胞CD206/CD86的比值，表明5%幅度的力學(xué)拉伸可以顯著地促進(jìn)Raw264.7細(xì)胞M2方向極化。

2.35%拉伸調(diào)節(jié)Raw264.7細(xì)胞炎癥相關(guān)基因的表達(dá) qRT-PCR結(jié)果顯示，5%幅度拉伸作用細(xì)胞3 d 后，細(xì)胞在致炎基因與抗炎基因的表達(dá)上與對(duì)照組幾乎沒有差異。而5%幅度拉伸作用細(xì)胞5 d后，細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組會(huì)顯著抑制致炎癥基因IL-1β、TNF-α和iNOS的表達(dá)(圖3A)，同時(shí)促進(jìn)抗炎基因IL-4、IL-10和TGF-β的表達(dá)(圖3B)。以上結(jié)果表明5%幅度拉伸促進(jìn)Raw264.7細(xì)胞更多的表達(dá)M2抗炎基因，并抑制M1炎癥基因的表達(dá)。

2.45%幅度的力學(xué)拉伸抑制細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的激活 由PCR和流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)5%幅度的拉伸在抑制炎癥和促進(jìn)抗炎都有很好的效果。為了研究力學(xué)刺激是如何引起Raw264.7細(xì)胞發(fā)生極化作用的，我們通過Western blot技術(shù)研究與炎癥調(diào)控相關(guān)NF-κB信號(hào)通路變化。通過WB結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，5%幅度拉伸明顯地抑制了Raw264.7細(xì)胞NIK蛋白和磷酸化P65的表達(dá)量，5%幅度拉伸后磷酸化P65的表達(dá)量是僅有對(duì)照組的1/2，而P65的蛋白表達(dá)量并無差異(圖4)。由此推斷，5%幅度拉伸抑制了Raw264.7細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的激活。

圖15%幅度拉伸對(duì)Raw264.7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

Fig.15%amplitudecyclictensilestrainaffectgrowthofRaw264.7cell

Note: A，B.The result of live/dead cell staining on the fifth day；C，D.The result of flow apoptosis analysis on the fifth day；E.The result of CCK-8.

圖2 5%幅度的拉伸對(duì)Raw264.7細(xì)胞表面CD86和CD206分子表達(dá)的影響Fig.2 Effect of 5% amplitude cyclic tensile strain on CD86 and CD206 expression of Raw264.7 cellsNote：A，B，E.The result of flow analysis on the third day；C，D，F(xiàn).The result of flow analysis on the fifth day；compared with control group，*.P<0.05.

3 討論

圖3 5%幅度的拉伸對(duì)細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響Fig.3 Effect of 5% amplitude cyclic tensile strain on expression of inflammation and anti-inflammation genesNote：Compared with control group，*.P<0.05.

圖4 5%幅度的拉伸對(duì)NF-κB信號(hào)通路激活的影響Fig.4 Effect of 5% amplitude cyclic tensile strain on activation of NF-κB signaling pathwayNote：Compared with control group，*.P<0.05.

隨著科學(xué)與醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，人類發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞涉及幾乎每一種人類疾病，并在疾病的預(yù)防及治療中發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，它們不同的表型，經(jīng)典活化(M1)和替代性活化(M2)，在組織再生活動(dòng)如外來體反應(yīng)(FBR)和組織重塑中起關(guān)鍵作用[7]，因此調(diào)控巨噬細(xì)胞的M1/M2比例為再生治療提供了新的思路和策略。巨噬細(xì)胞在組織修復(fù)中發(fā)揮重要作用[12-14]，如在血管修復(fù)方面，在炎癥早期，M1型巨噬細(xì)胞會(huì)分泌VEGF、IL-1β和TNF-α等，而這些炎癥因子可以有效防御病原體或細(xì)菌感染傷口。如果炎癥反應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r(shí)期沒有終止，就會(huì)導(dǎo)致組織損傷，因此，在發(fā)生炎癥反應(yīng)之后，必須要有組織的修復(fù)過程，M2型巨噬細(xì)胞則通過分泌PDGF招募間質(zhì)干細(xì)胞和周細(xì)胞，使其附著在新生毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上來穩(wěn)定新生血管[15]。此外，M2巨噬細(xì)胞能夠調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和適應(yīng)性Th2免疫，促進(jìn)血管生成，組織重塑和修復(fù)[8，16]。

機(jī)械刺激的生理水平對(duì)于組織中細(xì)胞的生長(zhǎng)和成熟是重要的，存在于這些組織中的巨噬細(xì)胞也暴露于機(jī)械刺激并做出反應(yīng)。有研究證明3%～8%幅度的力學(xué)刺激對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞無損傷，在本實(shí)驗(yàn)中活/死細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)中可以看出5%幅度的拉伸對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)并不會(huì)有太大的損傷。有文獻(xiàn)報(bào)道低幅度的拉伸(6%)可以通過下調(diào)Raw264.7細(xì)胞mRNA的活化水平而顯著性抑制IL-1β的表達(dá)，通過抑制IL-1β細(xì)胞因子的表達(dá)，拉伸應(yīng)變可以顯著降低IL-1β依賴性免疫應(yīng)答[17]。另有文獻(xiàn)報(bào)道在體外，只有低幅度拉伸刺激會(huì)引起抗炎反應(yīng)，而高幅度拉伸(15%～18%)會(huì)促進(jìn)炎癥反應(yīng)[18，19]，因此在本研究中，我們選擇研究5%幅度的拉伸對(duì)Raw264.7細(xì)胞的M1/M2極化的影響。有文獻(xiàn)報(bào)道，CD86和CD206可分別作為M1和M2巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)志[20]。如圖2、3所示，M1激活標(biāo)志物CD86、IL-1β、TNF-α及M2激活標(biāo)志CD206、IL-4[20]，相對(duì)于對(duì)照組而言，5%拉伸刺激后，Raw264.7細(xì)胞的CD206+/CD86+的表達(dá)比例增強(qiáng)，在基因表達(dá)方面，抗炎基因IL-4和IL-10的表達(dá)增強(qiáng)，炎癥基因IL-1β和TNF-α的表達(dá)顯著性下降，而且連續(xù)拉伸5 d后，抑制炎癥基因和促進(jìn)抗炎基因的表達(dá)效果要強(qiáng)于3 d。綜上所述，我們可以認(rèn)為通過合適的拉伸幅度確實(shí)可以顯著抑制炎癥表達(dá)和促進(jìn)抗炎反應(yīng)，從而進(jìn)一步促進(jìn)組織的重塑和再生。

當(dāng)細(xì)胞暴露于不同的機(jī)械應(yīng)變水平下，作用于細(xì)胞骨架的力會(huì)導(dǎo)致多個(gè)機(jī)械傳感器激活的差異性，從而導(dǎo)致細(xì)胞的表達(dá)發(fā)生變化。隨著對(duì)細(xì)胞骨架認(rèn)識(shí)的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架在細(xì)胞對(duì)力學(xué)刺激的感受和信息傳導(dǎo)的過程中起重要作用。機(jī)械刺激作用于細(xì)胞后，可以通過蛋白激酶C、整合素以及絲裂原激活蛋白激酶等多條信號(hào)通路，且各種信號(hào)傳導(dǎo)通路中存在交聯(lián)，從而影響細(xì)胞骨架的重組，并將力學(xué)刺激進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成化學(xué)信號(hào)，最終完成其生物效應(yīng)[21]。NF-κB參與機(jī)體免疫、炎癥和細(xì)胞凋亡等多種條件下的基因調(diào)控，靜息狀態(tài)下，NF-κB與抑制蛋白IκB-α結(jié)合，存在于胞漿中。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激后，IκB磷酸化降解，P65與IκB解離進(jìn)入細(xì)胞核，與靶基因啟動(dòng)子或增強(qiáng)子的κB序列結(jié)合，啟動(dòng)和調(diào)控眾多促炎細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)(如TNF-α等)表達(dá)[22]。目前證實(shí)NF-κB可誘導(dǎo)細(xì)胞因子(如IL-β、IL-6、TNF-α)的過度或持續(xù)的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，聚集于炎癥部位，最終形成炎癥反應(yīng)[23]。如圖所示，Western blot結(jié)果可以得到5%幅度的力學(xué)刺激對(duì)NF-κB信號(hào)通路的激活有抑制作用，當(dāng)細(xì)胞外的拉伸信號(hào)傳至細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞向M2方向的極化，抑制了巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子。巨噬細(xì)胞將感受到的力學(xué)刺激在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為生物信號(hào)，傳至細(xì)胞下游，引起NIK蛋白表達(dá)發(fā)生變化，繼而進(jìn)一步引起P65蛋白核移位的變化，最終導(dǎo)致NF-κB信號(hào)通路激活被抑制。巨噬細(xì)胞在5%幅度的力學(xué)刺激后會(huì)通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞向M1極化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2方向極化。

研究表明，IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子能刺激破骨細(xì)胞活化，抑制細(xì)胞骨形成。文獻(xiàn)報(bào)道抗炎物質(zhì)15-Deoxy-△12，14-S前列腺素J2被用于大鼠股骨皮質(zhì)缺損時(shí)，可減弱周圍軟組織中IL-6、IL-1β和TNF-α的表達(dá)同時(shí)促進(jìn)和促進(jìn)與骨再生有關(guān)的生長(zhǎng)因子的分泌和隨后的新骨形成[24]。研究發(fā)現(xiàn)，脈狹窄血管再通后腎功能得到改善、纖維化減輕，并使M1/M2比值降低，另外M2巨噬細(xì)胞通過刺激產(chǎn)生鳥氨酸以促進(jìn)細(xì)胞增殖，通過促進(jìn)TGF的產(chǎn)生及合成多胺和膠原進(jìn)行組織修復(fù)[25]。5%幅度的拉伸通過抑制NF-κB信號(hào)通路從而抑制巨噬細(xì)胞向M1方向極化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2方向極化，并引起抗炎因子分泌的增多，從而在組織修復(fù)中發(fā)揮作用。綜上所述，5%幅度拉伸的力學(xué)刺激Raw264.7細(xì)胞，抑制了NF-κB信號(hào)通路的激活，同時(shí)抑制了CD86分子的表達(dá)和促進(jìn)了CD206分子的表達(dá)；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)適度力學(xué)刺激下Raw264.7細(xì)胞可降低致炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌而提高抗炎癥合成，促進(jìn)Raw264.7向M2方向極化，為通過力學(xué)刺激調(diào)控巨噬細(xì)胞的極化促進(jìn)組織重塑和再生提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。