■鮑 坤 王凱英 王曉旭 劉晗璐 李光玉

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春130112）

維生素E（VE）和硒（Se）均是動(dòng)物機(jī)體所必需的營(yíng)養(yǎng)因子，兩者在動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、免疫和抗氧化方面具有協(xié)同、互補(bǔ)和增效作用。VE 作為防止過(guò)氧化物生成的第一道防線，在細(xì)胞外起抗氧化作用；而含Se的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）作為第二道防線，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。兩者均有抗氧化和提高機(jī)體免疫力的重要生理功能，可在一定條件下相互替代（許友卿等，2012）[1]。

目前關(guān)于梅花鹿日糧硒和維生素E添加量的研究國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道，本試驗(yàn)通過(guò)不同水平硒和維生素E添加，通過(guò)對(duì)梅花鹿飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、硒元素留存情況及血液生化指標(biāo)影響的研究，探討梅花鹿日糧適宜的硒元素及VE的添加量，為全混合日糧（TMR）飼養(yǎng)技術(shù)在梅花鹿養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2015 年5 月12 日至7 月22 日，在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所茸鹿試驗(yàn)基地進(jìn)行。

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、日糧及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用28頭1歲雌性梅花鹿。試驗(yàn)開(kāi)始前，試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行為期7 d 的預(yù)飼期，飼喂無(wú)添加的基礎(chǔ)日糧。在7 d預(yù)飼期后，選擇出生日期相近、體重相近的鹿以3×2+1 因子的處理方式被隨機(jī)分成7 個(gè)處理組（每組4 頭）。其中硒3 個(gè)水平(0.2、0.3、0.4 mg/kg)，維生素E兩個(gè)水平（100和200 IU/kg)，具體處理如下：①基礎(chǔ)日糧不添加硒和維生素E(包含0.05 mg Se/kg;G0)；②基礎(chǔ)日糧+0.2 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G1；③基礎(chǔ)日糧+0.2 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G2；④基礎(chǔ)日糧+0.3 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G3；⑤基礎(chǔ)日糧+0.3mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G4；⑥基礎(chǔ)日糧+0.4 mg Se/kg 和100 IU/kg VE，G5)；⑦基礎(chǔ)日糧+0.4 mg Se/kg 和200 IU/kg VE，G6。飼料級(jí)亞硒酸鈉購(gòu)于上海綠源精細(xì)化工廠，硒含量為1%，飼料級(jí)維生素E 購(gòu)于浙江新和成股份有限公司，VE 含量為50%。試驗(yàn)日糧為全價(jià)顆粒料，亞硒酸鈉及維生素E均于加工過(guò)程中添加。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，硒及維生素E添加量見(jiàn)表2。

1.2 飼養(yǎng)管理

在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)鹿被飼養(yǎng)在10 m×20 m的鹿圈內(nèi)，由固定人員飼喂，消除外界環(huán)境和管理不同對(duì)鹿產(chǎn)生的應(yīng)激影響。試驗(yàn)鹿每日06：00、16：00 各飼喂一次，自由采食和飲水，其他均按照常規(guī)飼養(yǎng)管理方法進(jìn)行。定時(shí)清理鹿糞，清掃鹿圈，保持適宜的飼養(yǎng)環(huán)境。

1.3 糞樣采集及分析

預(yù)飼期7 d，試驗(yàn)持續(xù)60 d，試驗(yàn)期結(jié)束最后4 d進(jìn)行消化試驗(yàn)。每天早上06:00按部分收糞法在鹿圈中多個(gè)點(diǎn)收集當(dāng)天部分新鮮糞樣，采集完的糞樣用10%的稀硫酸固氮，然后在65 ℃下烘干，粉碎后過(guò)40 目篩備用。糞樣的收集嚴(yán)格避免鹿毛、沙粒等污染，以免影響到測(cè)定結(jié)果精確度。主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的測(cè)定，參考《飼料分析與飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》（張麗英，2003）[2]，各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率采用2 N 鹽酸不溶性灰分法進(jìn)行測(cè)定，具體步驟參照《家畜飼養(yǎng)試驗(yàn)指導(dǎo)》（楊勝主編，1990）[3]。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4 血樣的采集及測(cè)定

在進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)的前1 d，于早飼前頸靜脈采血10 ml。其中2 ml 全血樣本用于硒元素的檢測(cè)，其余血液樣品在凝血后3 500 r/min離心10 min，分離血清樣品，分裝于Eppendorf 管中于-20 ℃冰柜保存?zhèn)溆?。血液指?biāo)用試劑盒測(cè)定，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，按照說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SAS 9.1進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著性采用Duncan's 法進(jìn)行多重比較，再采用GLM程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行多因子統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，其中P＞0.05為差異不顯著，0.01＜P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 硒和維生素E 添加對(duì)梅花鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

硒和維生素E 添加對(duì)梅花鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 硒和維生素E對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響(%)

如表3 所示，添加硒和維生素E 對(duì)七組日糧干物質(zhì)、酸性洗滌纖維、鈣、磷的表觀消化率差異不顯著(P＞0.05)。硒的添加水平對(duì)粗蛋白、粗脂肪和中性洗滌纖維的表觀消化率有所增加，且達(dá)到差異顯著水平(P＜0.05)。

2.2 硒和維生素E添加對(duì)梅花鹿血液生化指標(biāo)的影響

硒和維生素E 添加對(duì)梅花鹿血液生化指標(biāo)的影響，測(cè)定結(jié)果如表4所示。

表4 硒和維生素E對(duì)血液生化指標(biāo)的影響

如表4 所示，硒水平和VE 水平對(duì)七組動(dòng)物的血清白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的影響不顯著(P＞0.05)。G3 組的總蛋白含量顯著高于G0 組(P＜0.05)。硒和VE的添加使谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著增加(P＜0.05)。硒水平顯著影響了三碘甲腺原氨酸和甲狀腺素的含量(P＜0.05)。硒和維生素E的協(xié)同影響不顯著(P＞0.05)。

2.3 硒和維生素E添加對(duì)硒含量的影響

硒和維生素E添加對(duì)硒含量的影響，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 硒和維生素E添加對(duì)硒含量的影響

如表5所示，全血硒及毛發(fā)硒含量達(dá)到極顯著差異水平（P＜0.01），糞硒的含量達(dá)到差異顯著水平（P＜0.05）。硒的添加顯著影響了全血硒、毛發(fā)中硒元素含量及糞硒含量（P＜0.05）。VE 添加水平及硒和VE的協(xié)同對(duì)硒元素含量的影響不顯著（P＞0.05）。

3 討論

對(duì)于硒和VE添加水平對(duì)梅花鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的影響方面，沒(méi)有公開(kāi)發(fā)表的數(shù)據(jù)。在本試驗(yàn)中，硒元素添加對(duì)粗蛋白、粗脂肪及中性洗滌纖維的表觀消化率影響顯著。這可能是由于纖維素分解菌的活性和數(shù)量提高引起的。之前在其他動(dòng)物上也有相似的研究結(jié)果。Shi(2011)研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加納米硒，改善了羊?qū)Ω晌镔|(zhì)、有機(jī)物、粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維及酸性洗滌纖維的消化率[4]。Wang（2009）研究表明，奶牛日糧中添加0.15、0.3、0.45 mg/kg 硒元素，中性洗滌纖維的消化率呈線性增加[5]。董升(2005)研究證明，日糧中硒水平在0.2～0.5 mg/kg 時(shí)，能夠明顯提高粗纖維的降解率[6]，原因可能是一些微量元素能夠促進(jìn)瘤胃中纖毛蟲(chóng)和某些菌落的新陳代謝，增加數(shù)量，調(diào)節(jié)瘤胃與腸道的發(fā)酵功能，促進(jìn)乳酸菌、纖維素菌群繁殖能力，提高其活性，進(jìn)而瘤胃消化性能得到提升[7]；還有可能是因?yàn)槲鴮⒎雌c動(dòng)物瘤胃中硫氨基酸經(jīng)過(guò)硒-硫取代反應(yīng),生成硒氨基酸，再合成具有硒的蛋白質(zhì)，提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)的利用效率[8]；并且酵母硒中存在充足的谷胱甘肽、維生素B 族、無(wú)機(jī)酸鹽和酵母蛋白等，通過(guò)產(chǎn)生酶的作用（有活性的酵母細(xì)胞能夠產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶等）來(lái)提高機(jī)體腸道消化酶的活性，增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率。

血清白蛋白由肝臟合成，是機(jī)體蛋白質(zhì)來(lái)源之一，總蛋白是白蛋白和球蛋白之和，可作為蛋白質(zhì)代謝的指標(biāo)。由于硒和維生素E的添加改善了氮平衡，能有效保護(hù)心臟和肝臟免受氧化損傷，所以提高了血清白蛋白含量，總蛋白含量也呈升高的趨勢(shì)。GPT、GOT在氨基酸代謝方面及在蛋白質(zhì)、脂肪和糖三者的轉(zhuǎn)換過(guò)程中占有極其重要的地位，是機(jī)體代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶。正常范圍內(nèi)2 種酶活性僅僅由于細(xì)胞的不斷更新而釋放于血液中，因此其活性升高或降低可反映營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)代謝的變化，超出正常范圍則反映心肌、骨骼肌和肝臟的各種損傷，即細(xì)胞內(nèi)酶由于生物膜的損傷而逸出引起。已有資料證明牛缺乏硒和維生素E 能引起GOT 和GPT 活性提高[9]。硒是GSH-Px 的組成成分，同時(shí)硒和維生素E 在生物抗氧化性方面具有互補(bǔ)性。GSH-Px 是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化酶系,它能使有毒過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，同時(shí)促進(jìn)H2O2分解。最終使自由基數(shù)量減少和生成易被機(jī)體代謝的產(chǎn)物，從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能免受過(guò)氧化物的損害和干擾；添加不同水平硒可明顯提高鹿機(jī)體的抗氧化能力。這與大多數(shù)研究結(jié)果相一致[10-12]。

甲狀腺激素具有促進(jìn)新陳代謝和發(fā)育、提高神經(jīng)系統(tǒng)興奮性等作用，在生長(zhǎng)方面與GH 起協(xié)同作用。含硒的脫碘酶（IDI）及其功能（促進(jìn)T4 向T3 的轉(zhuǎn)化）的發(fā)現(xiàn)，揭示了硒可通過(guò)甲狀腺激素作用于機(jī)體代謝。T3參與調(diào)節(jié)戊糖磷酸循環(huán)酶，并與動(dòng)物的GH合成有關(guān)，促進(jìn)智力與體質(zhì)的發(fā)育。動(dòng)物缺硒能引起IDI 的活力下降，降低了T4 向T3 的轉(zhuǎn)化速度,使血液T4含量上升而T3下降，導(dǎo)致動(dòng)物生長(zhǎng)緩慢[13]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，硒水平顯著影響T4 和T3 的濃度(P＜0.05)，秦順義（2007）研究發(fā)現(xiàn)，給健康灘羊羔羊日糧中分別添加含硒量0.1 mg/kg 的富酵母硒和亞硒酸鈉，在試驗(yàn)第30 d 和60 d 時(shí)，富酵母硒組和亞硒酸鈉組的T3濃度顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），T4濃度顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）[14]。這與本試驗(yàn)所得的結(jié)果相似。

在其他動(dòng)物上也有相關(guān)的研究報(bào)道。張偉明[15]研究了飼糧添加不同水平硒對(duì)籠養(yǎng)蛋雛鴨(0～4周)生長(zhǎng)性能及生化指標(biāo)的影響，研究結(jié)果表明，隨日糧硒水平的增加，血清T3 活性和生長(zhǎng)激素水平呈先升高后降低的趨勢(shì)，而T4 活性和皮質(zhì)醇則隨硒水平的升高均呈先降低后升高的趨勢(shì)。林長(zhǎng)光等[16]通過(guò)對(duì)斷奶仔豬的研究結(jié)果認(rèn)為，隨著日糧中硒水平的提高，血清中T3濃度也隨著升高，而T4濃度隨之下降，促進(jìn)了仔豬的生長(zhǎng)。綜合各項(xiàng)指標(biāo)分析納米硒和酵母硒的添加水平為0.5 mg/kg和0.7 mg/kg效果較好。林金玉等[17]研究表明，硒源對(duì)哺乳母豬和哺乳仔豬血清T3、T4質(zhì)量濃度的影響極顯著；納米硒組母豬血清T3質(zhì)量濃度比對(duì)照組、亞硒酸鈉組和酵母硒組依次提高了29.52%、17.24%和23.63%；納米硒組母豬血清T4質(zhì)量濃度比對(duì)照組、亞硒酸鈉組和酵母硒組依次降低了24.71%、30.88%和33.86%。

大量試驗(yàn)證明，硒元素能夠提高動(dòng)物的代謝功能，并且刺激機(jī)體生長(zhǎng)繁育，是動(dòng)物機(jī)體必需的微量元素之一。本試驗(yàn)證明，與未補(bǔ)硒組相比，日糧中添加適量的亞硒酸鈉能顯著提高血液中硒元素含量。Gunter等研究發(fā)現(xiàn)，在牛日糧中添加一定量的硒能顯著或極顯著提高其全血硒含量。與本研究結(jié)果相同。動(dòng)物被毛中的硒含量可作為診斷動(dòng)物缺硒病的一種指標(biāo)，對(duì)研究機(jī)體硒營(yíng)養(yǎng)狀況具有一定的意義。本試驗(yàn)中，對(duì)照組梅花鹿被毛硒含量為0.015 mg/kg，日糧添加亞硒酸鈉后，毛中硒的含量呈上升趨勢(shì)，顯著高于基礎(chǔ)日糧組，表明添加亞硒酸鈉促進(jìn)了硒的代謝，增加了其在毛中的沉積。

4 結(jié)論

添加亞硒酸鈉對(duì)梅花鹿日糧粗蛋白、粗脂肪及中性洗滌纖維的表觀消化率影響顯著；添加亞硒酸鈉及維生素E 顯著影響了血清總蛋白含量、GSH-Px 活性以及T4、T3 的含量；硒的添加提高了硒的代謝水平，促進(jìn)了硒在血液及毛發(fā)中的沉積。