霍 超，曹繼芬，王昌命，趙志堅*

(1.西南林業(yè)大學生命科學學院，云南昆明 650224;2.云南省農業(yè)科學院經濟作物研究所，云南昆明 650205)

由晚疫病菌(Phytophthorainfestans)引起的晚疫病是制約馬鈴薯產業(yè)發(fā)展的重要因素之一。云南省是我國代表性馬鈴薯周年生產區(qū)，馬鈴薯種植面積約66.7萬hm2[1]。昆明市是云南省傳統(tǒng)的馬鈴薯大春作產區(qū)，近年來通過產業(yè)結構調整以及各級政府把馬鈴薯作為脫貧攻堅的主導產業(yè)大力扶持，馬鈴薯已成為昆明市僅次于玉米的第二大作物，周年種植面積超過4萬 hm2。因適宜的氣候環(huán)境條件，晚疫病常年發(fā)生、危害嚴重，每年均造成巨大的經濟損失。防控晚疫病最經濟有效的措施是種植抗病品種，盡管當?shù)匾M了一些馬鈴薯新品種青薯9號、宣薯2號、麗薯6號等，但這些品種抗性較差，晚疫病發(fā)生時主要依賴于化學殺菌劑進行防治。

甲霜靈為苯基酰胺類殺菌劑，在生物活性、內吸性和持效期等方面效果均優(yōu)于同類化合物，被廣泛應用于晚疫病的防治。自首先在歐洲檢測到馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株后，在全球各地馬鈴薯產區(qū)也相繼報道了甲霜靈抗性菌株的出現(xiàn)及其發(fā)生頻率[2]。2000年以后，我國各省馬鈴薯產區(qū)的甲霜靈抗性菌株在晚疫病菌群體中的比例逐年上升[3-5]，表明甲霜靈藥效下降，馬鈴薯晚疫病菌抗藥性已成為晚疫病防控中的一個突出問題。近年來，隨著馬鈴薯晚疫病菌新致病性譜系在馬鈴薯產區(qū)的迅速演替，病原菌群體組成發(fā)生了顯著的變化，增大了晚疫病防控的難度[6-7]。為合理地開展馬鈴薯晚疫病的化學防控，筆者對昆明市馬鈴薯主要產區(qū)晚疫病菌的甲霜靈抗藥性水平進行了測定，以期明確晚疫病菌的抗藥性程度，為馬鈴薯晚疫病合理防控及病原菌抗藥性的科學治理提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌。供試馬鈴薯晚疫病菌共52株，由2015—2016年采自昆明市馬鈴薯主產區(qū)的晚疫病樣本分離、純化所得。

1.1.2供試藥劑。96%甲霜靈原藥由北京明德立達農業(yè)科技有限公司提供，溶于二甲基亞砜(DMSO)后，配制成50 mg/mL儲液，置于4 ℃冰箱備用。

1.2試驗方法參照Forbes[8]的方法，供試菌株培養(yǎng)14 d后采用含藥平板進行甲霜靈敏感性測定。分別配制含甲霜靈0、5、100 μg/mL 3個濃度梯度的黑麥培養(yǎng)基(RSA)平板，用直徑為5 mm的打孔器切取菌落邊緣新鮮菌塊分別置于平板中央，每個處理3次重復，在18 ℃黑暗培養(yǎng)5 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑。每批次測定均用已知的甲霜靈抗性參考菌株作為對照。根據含藥平板的菌落直徑與空白對照菌落直徑之比計算的相對生長量，確定供試菌株對甲霜靈的敏感性。敏感性判定標準：5、100 μg/mL含藥平板的菌落生長量≥40%的0 μg/mL含藥平板生長量為抗性(R)；兩者均<40%的0 μg/mL含藥平板生長量為敏感(S)；5 μg/mL含藥平板的菌落生長量≥40%的0 μg/mL含藥平板的菌落生長量、100 μg/mL含藥平板的菌落生長量<40%的0 μg/mL含藥平板生長量為中抗(M)。相對生長量=(供試菌株菌落直徑-5)/(對照菌株菌落直徑-5)×100%。

2 結果與分析

由表1可知，甲霜靈濃度為5 μg/mL時，晚疫病菌相對生長量最低為59.24%，最高達98.81%；甲霜靈濃度為100 μg/mL時，晚疫病菌相對生長量最低為43.25%，最高達94.15%。52株菌在5、100 μg/mL含藥平板上的相對生長量均大于40%的0 μg/mL含藥平板的菌落生長量，均為甲霜靈抗性菌株，未檢測到中抗和敏感菌株。由此可知，昆明市馬鈴薯產區(qū)的晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性水平很高，用甲霜靈防控晚疫病已經完全失效。

注：R代表抗性

Note：R was resistance

3 結論與討論

甲霜靈自1977年推出后，對植物病原卵菌引起的病害的防治水平得到很大提高。但是甲霜靈對病原菌的作用位點單一，長期單一的使用很容易產生抗藥性。近30年來，全球馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性日益嚴重[2]，長期使用甲霜靈將導致防治無效、成本增加。趙志堅等[6]報道2001—2003年云南省晚疫病菌對甲霜靈抗性、中抗和敏感菌株比例

分別為13.2%、9.4%和77.4%。2003—2005年云南省馬鈴薯晚疫病菌主要由甲霜靈敏感群體組成，甲霜靈抗性菌株比例為20.4%[9]。2008—2011年四川省馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株在群體中的比例為63.0%[10]。2007—2009年，河北、黑龍江、吉林、遼寧和內蒙古北方5省(區(qū))馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性菌株比例為80%[11]。2007—2012年甘肅馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株的比例為55.9%[12]。上述研究表明，隨著甲霜靈在晚疫病防控中的廣泛應用以及晚疫病菌新群體在各個馬鈴薯產區(qū)的替代，甲霜靈抗性菌株已成為優(yōu)勢群體，防控效率顯著下降。該研究測定的昆明市晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性水平顯示：甲霜靈抗性菌株在昆明市馬鈴薯產區(qū)的比例高達100%，表明甲霜靈對昆明市馬鈴薯晚疫病菌已經完全失效，不能再用于馬鈴薯晚疫病的防治。目前，一些新型高效的替代殺菌劑，如銀法利、瑞凡、明贊、烯酰嗎啉、氟嗎啉等對晚疫病有較高的防控效果，可在生產上推廣應用。但需科學合理地輪換和使用這些殺菌劑，應避免長期施用單一殺菌劑，與無交互抗性的殺菌劑輪換使用，降低抗藥性產生的風險，延長殺菌劑在生產上的使用年限。

[1] 桑月秋,楊瓊芬,劉彥和,等.云南省馬鈴薯種植區(qū)域分布和周年生產[J].西南農業(yè)學報,2014,27(3):1003-1008.

[2] SHATTOCK R C.Phytophthorainfestans:Populations,pathogenicity and phenylamides[J].Pest management science,2002,58(9):944-950.

[3] 畢朝位,杜喜翠,車興壁,等.重慶地區(qū)馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthorainfestans)對甲霜靈抗性及抗性水平測定[J].中國馬鈴薯，2002,16(2):70-72.

[4] 朱小瓊,車興璧,國立耘,等.六省市致病疫霉交配型及其對幾種殺菌劑的敏感性[J].植物保護,2004,30(4):20-23.

[5] 陳慶河,翁啟勇,謝世勇,等.福建省致病疫霉交配型分布及對甲霜靈的抗藥性[J].植物保護學報,2004,31(2):151-156.

[6] 趙志堅,曹繼芬,李燦輝,等.云南致病疫霉交配型、甲霜靈敏感性、mtDNA單倍型及其群體演替研究[J].中國農業(yè)科學,2007,40(4):727-734.

[7] 朱杰華,楊志輝,張鳳國,等.馬鈴薯晚疫病菌群體遺傳結構研究進展[J].中國農業(yè)科學,2007,40(9):1936-1942.

[8] FORBES G.Manual for laboratory work onPhytophthorainfestans[J].Cips training manual,1997,98(4)：265-267.

[9] 曹繼芬，孫道旺,楊明英,等.云南省馬鈴薯、番茄晚疫病菌對甲霜靈敏感性及地理分布[J].西南農業(yè)學報，2007,20(5):1027-1031.

[10] 李洪浩,彭化賢,席亞東,等.四川馬鈴薯晚疫病菌交配型、生理小種、甲霜靈敏感性及 mt DNA 單倍型組成分析[J].中國農業(yè)科學,2013,46(4):728-736.

[11] 王文橋,王麗,韓秀英,等.北方五省(區(qū))馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈和精甲霜靈的敏感性檢測[J].植物保護,2012,38(3):116-121.

[12] 張大為,惠娜娜,王立,等.甘肅省馬鈴薯致病疫霉交配型組成及其對甲霜靈的抗藥性[J].西北農業(yè)學報，2014,23(6):184-188.