■曲 木 張寶龍 暴麗梅 白東清 趙子續(xù) 翟勝利*

（1.天津市晨輝飼料有限公司天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點實驗室，天津301800；2.天津農(nóng)學院水產(chǎn)學院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津300384）

VB12是人和動物體內(nèi)非常重要的水溶性維生素之一，參與體內(nèi)一碳基團的代謝，主要起到轉(zhuǎn)甲基的作用[1]。葉酸以多種輔酶形式參與機體內(nèi)一碳單位的轉(zhuǎn)移，對生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)合成具有非常重要的作用[2]。魚類體內(nèi)缺乏葉酸和VB12時，表現(xiàn)為食欲減退，生長低下[3]。經(jīng)過試驗和生產(chǎn)實踐表明，黃顙魚需要維生素B1、B2、B6、B12、泛酸、煙酸、生物素、葉酸、膽堿和維生素C等水溶性維生素[4]，葉酸和VB12作為黃顙魚健康生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，參與生物體內(nèi)許多重要反應和重要物質(zhì)的組成。葉酸促進蛋白質(zhì)的代謝，并與VB12共同促進紅細胞的生成和成熟，是制造紅血球不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)。然而大部分B族維生素不能由魚體自身合成，需從飼料中獲取[5]。

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）隸屬鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、黃顙魚屬（Pelteobagrus）[6]。適應性較強，可在各類淡水水域中養(yǎng)殖[7]，黃顙魚以其肉質(zhì)細嫩、味道鮮美、營養(yǎng)豐富、細刺少等優(yōu)點，受到國內(nèi)外廣大消費者的青睞。近年來，天然水域中的黃顙魚數(shù)量銳減，基本上都是通過人工養(yǎng)殖來滿足市場需求。目前，有關黃顙魚生物學和養(yǎng)殖技術的研究很多，但有關維生素對黃顙魚影響的研究并不多，本試驗用添加了不同水平的葉酸、VB12的飼料飼喂黃顙魚，并測定其生長性能、肉質(zhì)及抗氧化相關指標，探究葉酸、VB12及其交互作用對黃顙魚生長性能、肉質(zhì)及抗氧化能力的影響。

1 試驗材料

1.1 試驗魚與養(yǎng)殖管理

試驗所用黃顙魚購自天津恒潤水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，運往天津市晨輝飼料有限公司循環(huán)水養(yǎng)殖實驗室，對魚體消毒，暫養(yǎng)一周后，挑選體格健壯、規(guī)格一致的黃顙魚900尾，隨機分為10個處理組，每個處理組三個重復，每個重復30尾魚，飼養(yǎng)在（長×寬×高為58 cm×68 cm×40 cm）的室內(nèi)循環(huán)水箱中，有效體積為150 L。養(yǎng)殖周期為56 d，每天飼喂兩次，日投喂量為體重的3%～6%，投喂時間為每天的7:00、19:00。養(yǎng)殖期間水溫為（27±3）℃，pH值為7.75±0.25，溶解氧為（7.65±0.35）mg/l。每天記錄死亡數(shù)及投餌量。

1.2 試驗飼料

試驗以葉酸、VB12為影響因素，采用雙因素試驗設計中的“3×3因子設計”，設計9種飼料，每個因素各設三個水平，分別為葉酸（0.15%、0.30%、0.45%）、VB12（0.05%、0.10%、0.15%），配制成試驗飼料Diet 1、Diet 2、Diet 3、Diet 4、Diet 5、Diet 6、Diet 7、Diet 8、Diet 9，以不添加葉酸和VB12的飼料作為對照組。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 指標測定

1.3.1 生長指標的測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，禁食24 h，分別稱量每個平行中黃顙魚的重量，相關生長指標按照下列公式計算。

增重率(WG，%)=100×（Wt-W0）/W0

特定生長率(SGR，%/d)=100×（lnWt-lnW0）/t

餌料系數(shù)(FC)=F/（Wt-W0）

肝體指數(shù)（HSI，%）=100×Wg/Wt

式中：Wt——終末體重（g）；

W0——初始體重（g）；

F——飼料攝入量（干質(zhì)量，g）；

Wg——肝臟重量（g）；

t——試驗時間（d）。

1.3.2 肉質(zhì)檢測

1.3.2.1 肌肉滴水損失率測定

每個平行隨機取黃顙魚5尾，取其側(cè)線上方的同側(cè)新鮮背肌，干紗布擦干表面水分，稱重記錄，放于10 ml離心管中，離心管底部放有適當?shù)奈垼?℃，4 000 r/min條件下離心20 min后取出，擦干背肌表面水分，稱重記錄。

滴水損失率（DL，%）=（離心前肌肉質(zhì)量-離心后肌肉質(zhì)量）/離心前肌肉質(zhì)量×100

1.3.2.2 肌肉蒸煮損失率測定

每個平行隨機取黃顙魚5尾，取其側(cè)線上方的同側(cè)新鮮背肌，干紗布擦干表面水分，稱重記錄，裝入密封袋中，放入70℃的恒溫水浴鍋中蒸煮15 min，取出冷卻至室溫，擦干背部肌肉表面水分，稱重記錄。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎，%)

蒸煮損失率（CL,%）=（蒸煮前肌肉質(zhì)量-蒸煮后肌肉質(zhì)量）/蒸煮前肌肉質(zhì)量×100 1.3.3 抗氧化指標測定

每個平行隨機取5尾魚進行血液取樣與解剖，血液取樣用1 ml注射器從尾靜脈取血，轉(zhuǎn)移至1.5 ml離心管中，4 ℃靜置6 h，4 000 r/min離心10 min，分離血清保存于-20℃?zhèn)溆?，用于血清抗氧化指標的測定。抽血后的黃顙魚在冰浴條件下進行解剖，剝?nèi)「闻K、脾臟、中腎。

黃顙魚血清及組織中丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性以及過氧化氫酶（CAT）活性測定，均采用南京建成生物公司試劑盒方法測定，試驗操作嚴格按照說明書方法進行。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗所得結(jié)果均用“平均值±標準誤”表示，用SPSS 18.0軟件進行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和雙因素方差分析(Two-Way ANOVA)(顯著水平取0.05)，用Duncan's法多重檢驗分析試驗結(jié)果平均數(shù)的顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚生長性能及肝體指數(shù)的影響（見表2）

由表2可知，與對照組相比，試驗組黃顙魚終末體重、增重率、特定生長率和餌料系數(shù)受葉酸和VB12水平影響顯著（P＜0.05）。Diet 9（葉酸/VB12：0.45%/0.15%）組黃顙魚終末體重最高，與Diet 6組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他飼料組（P＜0.05）；增重率、特定生長率在Diet 9組最高，與Diet 3、Diet 6、Diet 8組差異不顯著（P＞0.05）；黃顙魚餌料系數(shù)在Diet 9組最低，與Diet 3、Diet 5、Diet 6、Diet 8組差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他各組（P＜0.05）；飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚肝體指數(shù)影響不顯著（P＞0.05）。

葉酸水平的提高對黃顙魚終末體重、增重率及特定生長率有顯著影響（P＜0.05），最優(yōu)水平均為0.45%，對黃顙魚肝體指數(shù)、餌料系數(shù)影響不顯著（P＞0.05）；VB12水平的提高對黃顙魚終末體重、增重率、特定生長率及肝體指數(shù)影響顯著（P＜0.05），最優(yōu)水平均為0.15%，對黃顙魚餌料系數(shù)影響不顯著（P＞0.05）；二者交互作用對黃顙魚終末體重、增重率、特定生長率、餌料系數(shù)及肝體指數(shù)影響均不顯著（P＞0.05）。

2.2 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚肌肉滴水損失率和蒸煮損失率的影響（見表3）

表3結(jié)果表明，各試驗組黃顙魚背肌滴水損失率和蒸煮損失率無顯著差異（P＞0.05），但都顯著低于對照組（P＜0.05）。在葉酸/VB12水平為0.45%/0.15%時，黃顙魚肌肉滴水損失率和蒸煮損失率最低。葉酸、VB12水平及其交互作用對黃顙魚背肌滴水損失率、蒸煮損失率無顯著影響（P＞0.05）。

表2 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚生長、肝體指數(shù)和餌料系數(shù)的影響

表3 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚背部肌肉滴水損失率和蒸煮損失率的影響

2.3 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織和血清中T-SOD活性的影響（見表4）

表4結(jié)果表明，黃顙魚肝臟、脾臟及血清中T-SOD活性在Diet 9組顯著高于其他各組(P＜0.05)；中腎T-SOD活性在Diet 9組最高，與Diet 8組差異不顯著(P＞0.05)，但顯著高于其他處理組(P＜0.05)。黃顙魚各組織及血清中T-SOD活性受葉酸和VB12的水平影響顯著(P＜0.05)，葉酸和VB12的最優(yōu)水平分別為0.45%、0.15%；二者交互作用對黃顙魚的肝臟和血清T-SOD活性影響顯著(P＜0.05)，對脾臟和中腎T-SOD活性影響不顯著(P＞0.05)。

2.4 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織及血清中過氧化氫酶（CAT）活性的影響(見表5)

表5結(jié)果表明，黃顙魚肝臟中Diet 9組CAT活性最高，與Diet 6組不顯著，但顯著高于其他組（P＜0.05）；血清中CAT活性在Diet 9組最高，與Diet 8組不顯著，但顯著高于其他組（P＜0.05）；脾臟及中腎CAT活性在Diet 9組最高，與Diet 8組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他處理組（P＜0.05）。

表4 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織和血清T-SOD活性的影響

表5 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織和血清CAT活性的影響

黃顙魚各組織及血清中CAT活性受葉酸和VB12的水平影響顯著（P＜0.05），葉酸和VB12最優(yōu)水平分別為0.45%、0.15%；二者交互作用對黃顙魚的肝臟CAT活性影響顯著（P＜0.05），對脾臟、中腎和血清中CAT活性影響不顯著（P＞0.05）。

2.5 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織及血清中MDA含量的影響(見表6)

表6結(jié)果表明：黃顙魚肝臟、脾臟中MDA含量在Diet 9組最低，與Diet 5、Diet 6、Diet 8組差異不顯著（P＞0.05），與其他組差異顯著（P＜0.05）；中腎MDA含量在Diet 9組最低，與Diet 5、Diet 6、Diet 7、Diet 8組差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他飼料組（P＜0.05）；血清中MDA含量在Diet 9組最低，與Diet 3、Diet 5、Diet 6、Diet 8組差異不顯著（P＞0.05）。

表6 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚各組織和血清MDA含量的影響

黃顙魚各組織及血清中MDA含量受葉酸和VB12的影響顯著（P＜0.05），葉酸和VB12最優(yōu)水平分別為0.45%、0.15%；二者交互作用對黃顙魚的各組織和血清MDA含量無顯著影響（P＞0.05）。

3 討論

3.1 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚生長的影響

葉酸和VB12都屬于B族維生素，是人和動物體內(nèi)非常重要的水溶性維生素，葉酸在機體內(nèi)以多種輔酶的形式參與碳一單位的傳遞并對嘌呤、嘧啶、核酸和蛋白質(zhì)的生物合成以及細胞的分裂生長具有特別重要的作用；VB12參與氨基酸等物質(zhì)的合成，保護葉酸在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)移和貯存，二者協(xié)同作用于生物體可顯著促進生物合成和細胞分裂[1-2]。趙智勇[8]在研究草魚魚種葉酸需要量的試驗中發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加3.6～4.3 mg/kg的葉酸可以促進草魚的生長，還可以提高草魚的飼料利用率。魏建軍等[9]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加2.3 mg/kg葉酸和0.2 mg/kg VB12可有效促進中華絨螯蟹幼蟹的生長。吳凡等[10]通過研究維生素B12對草魚幼魚生長的影響發(fā)現(xiàn)在飼料中添加0.100 mg/kg VB12，草魚幼魚的特定增長率和增重率最高。本試驗結(jié)果表明在葉酸/VB12水平分別為0.45%/0.15%時，黃顙魚的SGR和WG最高，F(xiàn)CR最低，這與上述研究結(jié)論一致，表明飼料中添加適宜的葉酸和VB12可以提高黃顙魚的生長性能，提高飼料效率。

3.2 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚肉質(zhì)的影響

魚肉的肉質(zhì)受外界影響的因素很多，如投喂機制、飼料成分以及環(huán)境因素等[11]，衡量魚體肉質(zhì)的指標很多，在本次試驗中，通過滴水損失率和蒸煮損失率來評定。肌肉滴水損失和蒸煮損失是肌肉蛋白質(zhì)保持水分能力的衡量標準，對肉的營養(yǎng)成分、質(zhì)地和風味等品質(zhì)具有直接的影響[12]。有關維生素對水產(chǎn)動物的肉質(zhì)影響的研究比較少，周明等[13]在研究飼料維生素E添加水平對團頭魴肌肉理化指標影響的試驗中表明，在飼料中添加25～200 mg/kg維生素E可以在一定程度上改善肉質(zhì)。王洋等[11]試驗發(fā)現(xiàn)，飼料中添加維生素K3可以降低肌肉的系水力。目前，有關葉酸和VB12水平對水產(chǎn)動物肉質(zhì)影響的研究還未見報道。本試驗以黃顙魚為試驗研究對象，首次探究葉酸和VB12水平對肉質(zhì)的影響。李小琴等[14]在鹽度對草魚生長和肌肉品質(zhì)的影響的研究中指出，滴水損失率越小，貯藏損失越小。本試驗發(fā)現(xiàn)，在葉酸/VB12水平為0.45%/0.15%時，黃顙魚的肌肉滴水損失率和蒸煮損失率最小，肌肉的貯藏損失最低。本試驗只是圍繞葉酸和VB12水平對黃顙魚滴水損失率、蒸煮損失率進行了初步研究，二者對黃顙魚肌肉系水力的作用機理還需要進一步探討。

3.3 飼料中葉酸、VB12水平對黃顙魚抗氧化能力的影響

T-SOD與CAT是生物體內(nèi)抗氧化酶系的重要組成酶類，能夠清除多余自由基，抵御氧化損傷[15]，其活性的高低可反映機體清除自由基的能力[16]。MDA是脂質(zhì)過氧化反應的最終產(chǎn)物，間接反映機體細胞的損傷程度[17]。葉酸和VB12缺乏時，會導致血漿高同型半胱氨酸水平升高，進而導致氧化損傷，抗氧化功能異常并促進脂質(zhì)過氧化[18]。李萬里等[19]在葉酸對高同型半胱氨酸小鼠MDA及T-SOD活性影響的研究中表明，葉酸可以提高血清T-SOD活性，增強機體抗氧化性。Erickson等[20]研究發(fā)現(xiàn)葉酸可以通過改變機體免疫細胞數(shù)量，調(diào)控機體內(nèi)分泌水平而參與細胞先天性免疫，影響免疫性能。遲曉星等[21]在葉酸的提取和抗氧化性研究試驗中發(fā)現(xiàn)，在適宜濃度范圍內(nèi)，葉酸對羥基自由基和超氧陰離子均有較強的清除作用，且清除作用與葉酸呈一定的量效關系。劉靜波等[22]研究發(fā)現(xiàn)，葉酸水平可以降低豬肝臟中MDA含量。劉歡等[23]在研究葉酸、維生素B6、維生素B12對局灶性腦缺血大鼠抗氧化作用時發(fā)現(xiàn)，補充葉酸和VB12能夠提高組織中抗氧化酶的活性，降低MDA含量。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當飼料中葉酸、VB12水平分別為0.45%、0.15%時，黃顙魚組織及血清中T-SOD、CAT活性最高，MDA含量最低。表明適量添加葉酸和VB12有助于提高黃顙魚機體的抗氧化能力。這與上述學者的結(jié)論一致。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，黃顙魚飼料中添加葉酸和VB12對黃顙魚的生長是有必要的。在葉酸/VB12水平0.45%/0.15%時，葉酸和VB12不僅對黃顙魚的生長具有明顯的促進作用，還對各組織和血清中T-SOD和CAT的生成和活性有較強的誘導能力，降低MDA含量，提高機體的抗氧化能力。