葉 彬 任于晗 王亞娟 俞 珊 王金鋼 郭 妮

作者單位：浙江省嵊州市人民醫(yī)院（浙江大學(xué)附屬一院嵊州分院）消化內(nèi)科（嵊州312400）

幽門螺桿菌（helieobacter pylori，Hp）感染被認(rèn)為與慢性胃炎、胃黏膜腸化生、胃癌等疾病的發(fā)生密切相關(guān)，Hp 感染增加了胃黏膜腸化生、胃癌發(fā)生的幾率[1-2]。miRNAs（microRNA，微小RNA）是一類在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的小的內(nèi)源性非編碼RNA分子，其在癌癥的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要功能[3-4]。研究表明，miRNA584 和miRNA1290 是胃黏膜發(fā)生腸化生機(jī)制中的一個(gè)重要通路[5-9]。本研究觀察Hp 感染與人胃黏膜組織miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)情況，探究Hp 感染與miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2013 年6 月—2014 年12 月在嵊州市人民醫(yī)院行胃鏡檢查的慢性胃炎患者80例，其中男性46 例，女性34 例。平均年齡（52.37±11.47）歲。所有患者均進(jìn)行14C-尿素呼氣試驗(yàn)檢查，檢查結(jié)果Hp 陽(yáng)性患者40 例，Hp 陰性患者40 例。胃鏡檢查分別于胃體中部大彎、小彎側(cè)及胃竇距幽門3cm 大彎、小彎側(cè)各活檢1 塊組織行光鏡檢查，所有活檢組織必須為黏膜全層，包括黏膜肌層。

1.2 試 劑 單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz 公司，二甲苯等試劑購(gòu)自華東試劑公司，醋酸酐等試劑購(gòu)自武漢博士德公司，三乙醇胺等試劑購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑公司，預(yù)雜交液及雜交液購(gòu)自丹麥Exiqon 公司。

1.3 原位雜交方法 對(duì)收集的四塊胃黏膜組織石蠟標(biāo)本，依照脫蠟、水化、染色、水洗殘液、脫水、封片等流程進(jìn)行原位雜交，miRNA584 和miRNA1290 以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的藍(lán)色顆粒為陽(yáng)性染色，采用半定量積分法[10]判斷結(jié)果。染色強(qiáng)度分級(jí)：1 分，無(wú)染色或弱染色；2 分，中等強(qiáng)度染色；3 分，強(qiáng)染色。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分級(jí)：1 分，陽(yáng)性表達(dá)率＜10%；2 分，陽(yáng)性表達(dá)率10%～50%；3 分，陽(yáng)性表達(dá)率＞50%。以上兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相乘，得分0～3 分者為低表達(dá)，＞3 分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

檢測(cè)樣本中miRNA584 和miRNA1290 的陽(yáng)性染色主要出現(xiàn)在胞質(zhì)中，胞膜和胞核無(wú)表達(dá)。Hp 陽(yáng)性患者胃黏膜組織miRNA584 無(wú)染色或弱染色14例，中等強(qiáng)度染色17 例，強(qiáng)染色9 例；miRNA1290 無(wú)染色或弱染色16 例，中等強(qiáng)度染色13 例，強(qiáng)染色11例。Hp 陰性患者胃黏膜組織miRNA584 無(wú)染色或弱染色23 例，中等強(qiáng)度染色13 例，強(qiáng)染色4 例；miRNA1290 無(wú)染色或弱染色27 例，中等強(qiáng)度染色7 例，強(qiáng)染色6 例。與Hp 陰性患者胃黏膜組織比較，Hp 陽(yáng)性患者胃黏膜組織miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)均增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 Hp 感染與胃黏膜組織miRNA584、miRNA1290 表達(dá)[例（%）]

3 討 論

Hp 在胃黏膜腸化及胃癌發(fā)生發(fā)展中起重要的作用，Hp 感染增加了胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[1-2]，已經(jīng)被WHO 正式列為Ⅰ類致癌因子。

研究表明，miRNAs 在胃癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的過(guò)程中起到了重要的作用[11-12]，在萎縮性胃炎及胃黏膜腸化生等胃癌前狀態(tài)中，存在大量表達(dá)異常的miRNAs[13-14]。研究表明，miRNA584 和miRNA 1290 在體外培養(yǎng)的胃黏膜上皮細(xì)胞感染Hp 后發(fā)生腸化生改變中起到重要的作用，在Hp 毒力因子CagA 作用下miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)升高，促進(jìn)了腸化生的發(fā)生，其中miRNA584 通過(guò)Erk1/2 途徑上調(diào)，miRNA1290 通過(guò)NF-κB 通路激活，miRNA584 和miRNA1290 的共同靶基因是Foxa1，該實(shí)驗(yàn)表明，miRNA584 和miRNA1290 是CagA 誘導(dǎo)胃黏膜腸化生機(jī)制中的一個(gè)重要通路[10]。體外實(shí)驗(yàn)表明，miRNA1290 在胃癌細(xì)胞表達(dá)升高，而使用miRNA1290 抑制物后，胃癌細(xì)胞的增殖也受到抑制[15]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與Hp 陰性患者比較，Hp 陽(yáng)性患者胃黏膜組織miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)均增加，提示Hp 感染可能導(dǎo)致miRNA584 和miRNA1290 表達(dá)上調(diào)。根據(jù)已有研究，我們推測(cè)miRNA584 和miRNA1290 可能在Hp 誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞腸化生中起重要作用，但具體機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究。