林丹麗，陳機瓊，馮慧艷，鄒享珍，劉妙娥，王毅軒，鄒前福

(東莞樟木頭醫(yī)院 檢驗科，廣東 東莞523633)

乳腺癌的發(fā)病率逐年升高[1，2]，治療主要以綜合治療為主，只有當腫瘤細胞相應的激素受體如人類表皮生長因子受體2(HER-2)、雌激素受體(ER)或孕激素受體(PR)蛋白陽性表達時，乳腺癌的靶向治療或者全身治療藥物才能夠發(fā)揮抗腫瘤的作用[3]。三陰乳腺癌(TNBC)是指HER-2、ER和PR表達狀態(tài)均呈陰性的乳腺癌亞型[4]，它的復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高，患者的生存時間較短，預后也較其他類型的乳腺癌患者差，而且不能從靶向治療和內(nèi)分泌治療中受益[5]。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)是真核細胞內(nèi)的聚ADP核糖聚合酶，在DNA的損傷修復中具有重要作用[6]。本研究對PARP-1在60例三陰乳腺癌患者細胞中的表達及與Ca153和CEA的臨床相關(guān)性進行研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月到2018年2月在本院，廣州金域醫(yī)學檢驗中心和周邊醫(yī)院檢驗科已經(jīng)診斷為三陰乳腺癌的60例患者作為研究對象。年齡26-68歲，平均年齡(61.93±7.11)，其中18例為低分化(3級)，26例為中分化(2級)，16例為高分化(1級)。納入標準：符合乳腺癌相關(guān)診斷標準且經(jīng)免疫組織化學法證實ER、PR和HER-2均為陰性表達。排除標準：在采集標本之前接受過化療、放療或者其他治療；含有其他可能影響該研究結(jié)果的疾病者；有其他惡性腫瘤者。另選取30例非三陰乳腺癌的患者作為對照組，年齡25-68歲，平均年齡(61.54±7.27)歲，其中7例為低分化，16例為中分化，7例為高分化。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。所有患者均簽署知情同意書且該方案已經(jīng)獲得倫理委員會的批準。

1.2 方法

利用免疫組織化學染色技術(shù)將兩組患者的乳腺組織固定脫水后用石蠟包埋制成厚約4.0 μm的切片，然后采用SP法檢測PARP-1的表達水平。單克隆抗體PARP-1購于Santa Cruz公司，SP法檢測試劑盒購于北京中杉金橋公司，按試劑盒說明書進行操作。使用磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液代替一抗作為陰性對照，陽性樣本片作為陽性對照。在高倍鏡下觀察樣本，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，每張切片觀察5個視野。

1.3 觀察指標

細胞核或者細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒時為陽性反應，發(fā)生陽性反應的細胞為陽性細胞。陽性反應的強度根據(jù)染色的深淺和視野內(nèi)陽性細胞所占的比例進行判定。按染色深淺I進行評分：陰性為0分；黃色為1分；棕黃色為2分；棕色為3分。按視野內(nèi)陽性細胞所占百分比P進行評分：>75%為4分；>50%-75%為3分；5%-50%為2分；5%-25%為1分；≤5%為0分。PARP-1表達水平分值S=P×I[7]。S值<3分為陰性表達，S值≥3分為陽性表達，其中最高分為12分。

1.4 統(tǒng)計學分析

本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三陰乳腺癌和非三陰乳腺癌細胞中PARP-1的表達

三陰乳腺癌細胞中PARP-1表達及陽性率較非三陰乳腺癌細胞中高，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 PARP-1在TNBC和NTNBC細胞中的表達(例數(shù)，%)

2.2 PARP-1與Ca153在三陰乳腺癌細胞中表達的相互關(guān)系

三陰乳腺癌細胞中PARP-1與Ca153的表達呈正相關(guān)(r=0.52,P<0.05)。見表2。

表2 三陰乳腺癌細胞中PARP-1與Ca153表達之間的相關(guān)性

2.3 PARP-1與CEA在三陰乳腺癌細胞中表達的相互關(guān)系

三陰乳腺癌細胞中PARP-1與CEA的表達呈正相關(guān)(r=0.26,P<0.05)。見表3。

表3 三陰乳腺癌細胞中PARP-1與CEA表達之間的相關(guān)性

3 討論

乳腺癌在臨床上較為常見，是女性最常見的惡性腫瘤之一。三陰乳腺癌的惡性程度高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和復發(fā)率也較高，預后較差，對女性的生命健康造成嚴重威脅。目前臨床上尚未出現(xiàn)對三陰乳腺癌有效的靶向治療和全身治療方法。

PARP-1是PARP家族中最有特點和含量最多的一員，它的本質(zhì)是核蛋白酶，可以在除中性粒細胞外的人體所有有核細胞中表達。PARP-1對DNA斷端敏感性高，與DNA斷端結(jié)合后被激活，啟動DNA損傷修復系統(tǒng)，修復損傷DNA。PARP-1的高表達可見于所有類型的乳腺癌[8-11]，其中以在ER、PR或HER2陰性的乳腺癌中PARP-1的高表達更為明顯[12]。本研究結(jié)果顯示，PARP-1在三陰性乳腺癌細胞中陽性表達率為66.67%，在非三陰乳腺癌細胞中的陽性表達率為13.34%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。血清Ca153水平常在乳腺癌中過度表達,被公認為乳腺癌較為特異的腫瘤標志物[13]。CEA常用于乳腺癌、肺癌、消化道腫瘤和胰腺癌等輔助診斷，因為它是一種非特異性的腫瘤標志物，所以常常與其他腫瘤標志物聯(lián)合檢測[14],還有文獻表示CEA對乳腺癌的診斷治療、療效和預后的觀察有一定意義[15]。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在三陰乳腺癌細胞中PARP-1與Ca153和CEA均呈正相關(guān)(r分別為0.52、0.26，P<0.05)，說明PARP-1可用于乳腺癌特別是三陰乳腺癌的診治和預后判斷中。

綜上所述，PARP-1在三陰乳腺癌細胞中高表達且與Ca153和CEA的表達均呈正相關(guān)。