高媛 鞏偉 吳洋

[摘要]目的 對白術通利膠囊的質量標準進行提高和優(yōu)化。方法 鑒別項下，采用薄層色譜法分別對白術、川芎、補骨脂、澤瀉和山楂進行鑒別；含量測定項下用高效液相色譜法（HPLC）測定白術中白術內酯Ⅰ的含量的含量，測定條件為色譜柱采用島津ODS-VP3色譜柱，長250 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm；以甲醇-水（77∶23）為流動相；檢測波長為276 nm，柱溫35℃。結果 薄層色譜鑒別斑點顯色清晰，分離度號，靈敏度高，能有效鑒別出所需要鑒別的成分；含量測定白術內酯Ⅰ在4.0～16.0 μg/ml的濃度范圍內線性關系良好（r=0.9998，n=7），平均回收率為99.37%，RSD為0.84%（n=9）。結論 白術通利膠囊的質量標準經(jīng)提高后可用于其質量控制。

[關鍵詞]白術通利膠囊；質量標準提高；白術內酯Ⅰ；薄層色譜法；高效液相色譜法

[中圖分類號] R283 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）11（c）-0021-05

[Abstract] Objective To improve and optimize the quality standard of Baizhu Tongli capsules. Mehtods In the identification， Thin layer chromatography （TLC） was used to identify the Atractylodes Macrocephala， Ligusticum Chuanxiong， Psoralen， Alisma Orientalis and Hawthorn respectively. Under the content determination， the content of Atractylenolide Ⅰ in Atractylodes Macrocephala was determined by high performance liquid chromatography （HPLC） method. The conditions were as follows： the chromatographic column used SHIMADZU ODS-VP3 column， 250 mm long， inner diameter of 4.6 mm， and the particle diameter is 5 μm， and the methanol water （77∶23） was used as the method. The mobile phase was detected at 276 nm and the column temperature was 35℃. Results The TLC identification spots had clear color， separation number， high sensitivity， and could effectively identify the components needed to identify. The content determination of Atractylodes Ⅰ in the concentration range of 4.0-16.0 μg/ml was good （r=0.9998， n=7）， the average recovery rate was 99.37% （RSD=0.84%， n=9）. Conclusion The improvement is easy-operated and accurate which has a good specificity for the quality control of Baizhu Tongli Capsules.

[Key words] Baizhu Tongli Capsules； Quality standard improvement； Atractylenolide Ⅰ； Thin layer chromatography； High performance liquid chromatography

白術通利膠囊是原濟南軍區(qū)批準的軍隊醫(yī)療機構非標準制劑，臨床上主要用于治療痛風性關節(jié)炎，并能緩解高尿酸血癥癥狀。該制劑臨床應用三十多年，療效確切，應用效果良好。該制劑的處方由白術、川芎、補骨脂、澤瀉、山楂、蘇木、蒼術、丹參等八味藥材組成，白術具有健脾益氣，燥濕利水之功效[1]，為君藥，川芎、補骨脂、澤瀉、山楂合為臣藥，輔以蘇木、蒼術、丹參，共奏健脾利濕、通利關節(jié)之功。但該制劑的質量標準極為簡單，僅有性狀和鑒別項，且鑒別項均為化學反應，專屬性不強，難以有效控制其生產(chǎn)質量，因此有必要對其質量標準進行提高和優(yōu)化。本研究即對鑒別項和含量測定項進行標準提高，擬采用薄層色譜鑒別處方中的白術、川芎、補骨脂、澤瀉和山楂，采用高效液相色譜法（HPLC）測定來源于白術的有效成分白術內酯Ⅰ（C15H18O2）的含量[2]。

1儀器與材料

高效液相色譜儀（LC-20AT）、電子分析天平（AUW 220D）均為日本島津科技公司生產(chǎn)；薄層觀察分析儀（TLA-1型）生產(chǎn)商為長沙克羅瑪公司；上海躍進醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的GZX-DH-300S電熱恒溫干燥箱。津奧特賽恩斯儀器有限公司生產(chǎn)的AS-3120A超聲波清洗器；法國Millipore公司生產(chǎn)的Synergy-UV超純水器。

批號為120925-201109的白術對照藥材、批號為120918-201102的川芎對照藥材、批號為121056-200503的補骨脂對照藥材、批號為121081-201004的瀉對照藥材、批號為121138-200905的山楂對照藥材、批號為111975-201501的白術內酯Ⅰ對照品（含測按99.1%計）等，以上對照藥材或對照品由中檢院標準物質處生產(chǎn)；TEDIA公司生產(chǎn)的色譜純級甲醇，自制超純水，青島海洋化工分廠生產(chǎn)的GF254和硅膠G薄層板。白術通利膠囊（3批，濟南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，規(guī)格：10 g/袋，批號分別為20170301，20170505， 20170716），陰性對照制劑委托濟南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2方法與結果

2.1鑒別（薄層色譜法）

2.1.1白術[3-4]

取白術通利膠囊內容物2 g，加正己烷5 ml，超聲處理（功率280 W，頻率40 kHz）20 min，靜置并吸取上方清晰溶液，再水浴上加熱，濃縮成供試品溶液。另取白術對照藥材0.5 g，按照上述步驟濃縮成對照藥材溶液。另取缺白術的陰性對照制劑2 g，按照上述步驟濃縮成陰性對照溶液。又取適量的白術內酯Ⅰ對照品，加甲醇溶解制成濃度為1 mg/ml的對照品溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗，吸取上述每一種溶液各10 μl，分別點于預制好的同一塊G板上，展開劑選擇為石油醚（60～90℃）-苯-乙酸乙酯（15∶2∶1），按程序薄層展開，顯色劑選擇10%硫酸乙醇溶液，電熱箱設定90℃后加熱30 min，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對照藥材及對照品溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應的位置顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照色譜無相應的斑點（圖1）。

2.1.2川芎[3，5]

取白術通利膠囊內容物1 g置燒瓶中，燒瓶中加入20 ml的乙醚，用回流裝置加入回流1 h，將燒瓶溶液過濾，取濾液于通風櫥內揮干，殘渣滴入0.2 ml的乙酸乙酯溶解后為供試品溶液。另取川芎對照藥材2 g，按照上述步驟制作對照藥材溶液。再取缺川芎陰性對照制劑2 g，按照上述步驟制作陰性對照溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則0502的薄層色譜法試驗，吸取上述每一溶液各5 μl，分別點于預制好的同一塊G板上，展開劑選擇為正己烷-乙酸乙酯（9∶1），按程序薄層展開，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應的位置顯相同顏色的斑點，陰性對照色譜無相應的斑點（圖2）。

2.1.3補骨脂[3，6]

取白術通利膠囊內容物1 g置錐形瓶中，錐形瓶中倒入20 ml的乙酸乙酯，用（功率280 W，頻率40 kHz）的超聲處理15 min，將溶液過濾，濾液置通風櫥內在通過水浴鍋蒸干，蒸干后的殘渣滴入1 ml的乙酸乙酯，此為供試品溶液。再取缺補骨脂的陰性對照溶液1 g，按照上述步驟制作陰性對照溶液。另取適量的補骨脂素對照品，滴加乙酸乙酯制作2 mg/ml的對照品溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗，吸取上述每一溶液各5 μl，分別點于預制好的同一塊G板上，展開劑選擇為正己烷-乙酸乙酯（4∶1），按程序薄層展開，顯色劑選擇以10%氫氧化鉀甲醇溶液，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對照品溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應的位置顯相同的黃白色熒光斑點，陰性對照色譜無相應的斑點（圖3）。

2.1.4澤瀉[3，7]

取白術通利膠囊內容物2 g，加50%乙醇50 ml，回流提取1 h，濾過，濾液濃縮至約6 ml，加等量水稀釋，用乙酸乙酯20 ml，分次提取，合并提取液后將乙酸乙酯層在通風櫥內加熱濃縮到2 ml左右，制作試品溶液。另取澤瀉對照藥材2 g，按照上述相同步驟制作對照藥材溶液。再取缺澤瀉的陰性對照制劑2 g，按照上述相同步驟制作對陰性對照溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗，吸取上述每一溶液各10 μl，分別點于預制好的同一塊G板上，展開劑選擇為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14∶7∶2），按照程序展開，在恒溫箱內105℃的條件下加熱。檢視結果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應的位置顯相同顏色的斑點，陰性對照色譜無相應的斑點（圖4）。

2.1.5山楂[3，8]

取白術通利膠囊內容物1 g，加乙酸乙酯20 ml，用設定條件為功率280 W、頻率40 kHz的超聲處理15 min，超聲后的乙酸乙酯溶液過濾，將濾液在通風櫥內揮干，殘渣滴加0.5 ml的甲醇制作供試品溶液。另取山楂對照藥材2 g，按照上述步驟制作對照藥材溶液。再取缺山楂的陰性對照制劑2 g，按照上述步驟制作陰性對照溶液。照《中國藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗吸取上述每一溶液各10 μl，分別點于預制好的同一塊G板上，展開劑選擇為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5），按照程序展開，顯色劑為硫酸乙醇溶液（3∶10），恒溫箱內80℃加熱。檢視結果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應的位置顯相同的紫紅色斑點，陰性對照色譜無相應的斑點（圖5）。

2.2白術中白術內酯Ⅰ的含量測定[9-10]

2.2.1色譜條件

色譜柱采用島津ODS-VP3色譜柱，長250 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm；以甲醇-水（77∶23）為流動相；檢測波長設定為276 nm，柱溫設定為35℃。理論板數(shù)的要求：按白術內酯Ⅰ色譜峰計算應不低于3000（圖6）。

2.2.2溶液的制備

2.2.2.1白術內酯Ⅰ對照品溶液的制備 用適當工具取適量的白術內酯Ⅰ對照品，用電子分析天平精密稱定，記錄數(shù)據(jù)，然后將之放置100 ml的容量瓶中，在容量瓶中加入甲醇，制成白術內酯Ⅰ對照品貯備液，其濃度為50 μg/ml。

2.2.2.2供試品溶液的制備 用適當工具取適量的白術通利膠囊內容物，用研缽研細之后再混合均勻，取混勻物10 g左右，用電子分析天平精密稱定，記錄數(shù)據(jù)，再放置到100 ml的錐形瓶中，錐形瓶中加入10 ml的甲醇，回流1 h，放冷，濾過，濾液全部轉移至10 ml量瓶中，加適量甲醇定容至容量瓶上的刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.3陰性對照溶液的制備 用適當工具取適量的不含白術的陰性對照制劑適量，用研缽研細之后再混合均勻，取混勻物10 g左右，按照“2.2.2.2”的步驟，制備陰性對照溶液。

2.2.3線性關系考察

分別精密吸取2.2.2.1項目下對照品貯備液適量，加甲醇配制成質量濃度分別為4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0 μg/ml的一系列對照品溶液，分別編號為1～7號溶液，按上述色譜條件，分別進樣10 μl，以白術內酯Ⅰ的實際濃度（X）作為橫坐標，其相應的峰面積（Y）作為縱坐標，畫出標準曲線，從標準曲線上得出線性方程為Y=11778X-2634（R2=0.9997）。結果顯示，白術內酯Ⅰ在4.0～16 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.2.4精密度試驗

取標號為4的對照品溶液，精密吸取10μl的進樣量，連續(xù)6次進樣，讀取6個峰面積。結果顯示，白術內酯Ⅰ色譜峰的峰面積的RSD為0.65%，提示儀器的精密度良好。

2.2.5重復性試驗

取適量的白術通利膠囊（批號：20170301）內容物，按照“2.2.2.2”項下的方法同樣制備6分供試品溶液，測定白術內酯Ⅰ的含量。結果顯示，白術內酯Ⅰ的平均含量為8.0 μg/g，RSD=1.23%（n=6），提示方法的重復性良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗

取“2.2.5”項下供試品溶液一份，置于液相色譜儀中，進樣量為10 μl，每2小時測定1次，測定至第12小時。結果，白術內酯Ⅰ的峰面積RSD為0.88 %，提示供試品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.2.7加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的白術通利膠囊內容物9份（批號：20170301），每份約5 g，分別精密加入80%、100%、120%的白術內酯Ⅰ對照品，按“2.2.2.2”項下的方法同樣制備供試品容易，測定峰面積，按照準確度公式計算加樣回收率，計算結果顯示白術內酯Ⅰ的平均加樣回收率為99.37%，RSD為0.84%，符合要求（表1）。

2.2.8樣品含量測定

取3批白術通利膠囊適量，按“2.2.2”方法制備供試品溶液，測定并計算含量。3批白術通利膠囊的平均含量為8.0 μg/g，結果見表2。

3討論

薄層色譜法作為一種成熟有效的鑒別方法，已經(jīng)被廣泛應用于中成藥的質量控制當中[11]。一般來講，中成藥的化學成分復雜多變，因此如果要對中成藥進行有效的質量監(jiān)控，會有眾多的干擾因素，是故在薄層色譜鑒別過程中，需要采取合理有效的前處理步驟，才能得到科學、準確的薄層色譜圖。通過多次探索和研究，本試驗中供試品溶液、對照品溶液或對照藥材溶液所產(chǎn)生的薄層色譜圖中的薄層特征明顯，分離度較好，上述方法比化學反應靈敏，專屬性較強，體現(xiàn)出了薄層色譜法鑒別處方中的有關藥物的優(yōu)越性。

白術通利膠囊處方中，君藥是白術。白術內酯Ⅰ為白術的有效藥理成分[12]，結合中國藥典[3]和文獻報道[13-15]相關內容，含量測定決定采用HPLC法測定白術通利膠囊中白術內酯Ⅰ的含量。方法學考察顯示，用HPLC對該制劑中的白術內酯Ⅰ進行含量測定是合理、有效和可行的。白術內酯Ⅰ的含量限（幅）度的制定，則需要依照《中國藥典》藥品質量標準分析方法驗證指導原則的要求[16]來制定，應至少測定3批及以上的含量數(shù)據(jù)，按其平均值的±20%作為限度的制定幅度。本次測定的白術內酯Ⅰ的含量平均值為8.0 μg/g，將其調低20%，為6.4 μg/g，因此擬定白術內酯Ⅰ的含量限度為6.4 μg/g。以上為白術通利膠囊中白術內酯Ⅰ含量限度的確定提供了參考。

綜上所述，經(jīng)提高后的質量標準操作簡便、精密度好、結果準確，可用于白術通利膠囊的質量控制。

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