漆艷萍 彭潔 戚青林

[摘要]目的 分析精子DNA碎片率對(duì)輔助生殖結(jié)局的影響。方法 選擇2015年6月～2017年6月在我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者為研究對(duì)象，依據(jù)DNA碎片率（DFI）的不同分為A組（DFI≤17.6%）、B組（17.6%0.05）；②A、B、C三組受精率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A、C兩組及B、C兩組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A、B兩組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；③A、B、C三組生化妊娠率、臨床妊娠率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 精子DNA碎片率對(duì)輔助生殖結(jié)局無顯著性影響，但一定程度上會(huì)對(duì)受精結(jié)局造成影響。

[關(guān)鍵詞]精子；DNA碎片率；輔助生殖結(jié)局

[中圖分類號(hào)] R714.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）11（b）-0101-03

[Abstract] Objective To analyze the effect of sperm DNA fragmentation index （DFI） on assisted reproductive outcomes. Methods A total of 325 patients who underwent adjuvant reproductive （fertilization-embryo transfer in vitro） treatment from June 2015 to June 2017 were enrolled in the study. They were divided into groups A （DFI≤17.6%）， B（（17.6%0.05）. The differences of fertilization rates among three groups were significant. To be specific， the cleavage rates and high quality embryo rates between group A and group C， and group B and group C （P<0.05）， while no much difference between group A and group B （P>0.05）. The biochemical pregnancy rate and clinical pregnancy rate of the three groups didn′t differ statistically （P>0.05）. Conclusion Sperm DFI has no significant effect on assisted reproductive outcomes， but it will affect the outcome of fertilization to some extent.

[Key words] Sperm； DNA fragmentation index； Assisted reproductive outcome

近年來，我國(guó)不孕不育的人數(shù)呈不斷增多的趨勢(shì)，不孕不育的影響因素有多種，如環(huán)境污染嚴(yán)重、生活習(xí)慣的改變以及精神壓力過大等，不孕不育不僅影響家庭和諧，還會(huì)給患者心理造成一定負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。臨床經(jīng)驗(yàn)顯示，所有不孕不育患者中，至少有50%是由男方因素造成的，過去臨床常采用精液常規(guī)分析對(duì)男性生育能力進(jìn)行判斷，但該方法無法取得理想的效果。隨著實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，精子DNA檢測(cè)方法應(yīng)用在臨床，并且成為臨床重點(diǎn)研究課題[2]。本研究重點(diǎn)對(duì)精子DNA碎片率對(duì)輔助生殖結(jié)局的影響效果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2015年6月～2017年6月于我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者作為研究對(duì)象，經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：夫妻雙方染色體檢查結(jié)果正常，單純由女性輸卵管因素導(dǎo)致不育，且女性年齡在36周歲以下。排除重度少弱精子癥患者，中途退出本研究或放棄治療等[3]。依據(jù)DNA碎片率（DFI）的不同分為A組（DFI≤17.6%）、B組（17.6%0.05），具有可比性。

1.2檢測(cè)方法

①精液標(biāo)本用生理鹽水調(diào)整濃度為500～1000萬/ml（密度為100×106左右，一般為90 μl生理鹽水+10 μl精液）。②溶液A溶解（90～100℃）5 min，放置在37℃恒溫箱5 min，加入30 μl精液混合。③20 μl瓊脂糖精液加入到玻片上，蓋上蓋玻片，放置在4℃冰箱5 min。④從冰箱中取出后，立即放入溶液B（母液1 ml加入9 ml蒸餾水混勻，重復(fù)使用。）中7 min，放入溶液C（一次性使用）10 ml中25 min，然后分別浸入蒸餾水中1 min、75%乙醇5～8 min、100%乙醇1 min，取出后自然晾干。⑤染色：加溶液D 10滴染色2 min，加溶液E 10滴染色10 min（期間充分混勻），自來水下沖洗5 s，自然晾干后400倍鏡下觀察500個(gè)精子涂片形態(tài)[4]。

1.3觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)和計(jì)算方法

觀察指標(biāo)：①精液常規(guī)參數(shù)，包含精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力[5]。②體外受精（IVF）受精結(jié)局，包含受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率；③妊娠結(jié)局，包含生化妊娠率、臨床妊娠率[6]。計(jì)算方法：①2PN受精率=2PN受精卵數(shù)/MII卵數(shù)×100%[7]。②2PN卵裂率=2PN卵裂數(shù)/2PN受精卵數(shù)×100%[8]。③優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/2PN受精卵數(shù)×100%[9]。判定標(biāo)準(zhǔn)：①生化妊娠：發(fā)生在妊娠5周內(nèi)的早期流產(chǎn)，血中可以檢測(cè)到HCG升高，>25 mIV/ml或尿妊娠試驗(yàn)陽性，但超聲波檢查看不到孕囊，提示受精卵著床失敗[10]。②臨床妊娠：宮腔內(nèi)見妊娠囊則為臨床妊娠[11]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組精液常規(guī)參數(shù)的比較

A、B、C組精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2三組IVF受精結(jié)局的比較

三組受精率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A與B組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；A與C組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B與C組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3三組妊娠結(jié)局的比較

三組生化妊娠率、臨床妊娠率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3）。

3討論

不孕不育治療的首要條件是對(duì)病因進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，過去臨床主要采用常規(guī)檢查進(jìn)行病因診斷，但接近一半比例的患者無法找到明確的病因，無法得到有效的治療[12]。隨著近些年醫(yī)療水平的進(jìn)步，相關(guān)學(xué)者指出，精子DNA碎片率異?？赡苁窃斐刹辉胁挥脑蛑?，即使是常規(guī)檢查結(jié)果正常的患者，精液中也可能存在較高比例的DNA結(jié)構(gòu)損傷的精子[13]。精子DNA碎片化的機(jī)制有多種，如精子異常凋亡、氧化應(yīng)激及精子發(fā)生過程中的染色質(zhì)組裝異常等。精子異常凋亡是指生理、病理?xiàng)l件下發(fā)生的以細(xì)胞核為表現(xiàn)的細(xì)胞死亡，而精子暴露在過量的氧分子中，可能造成多聚不飽和脂肪酸的過氧化，導(dǎo)致精子細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受損，并且精子核染色質(zhì)的組裝過程容易受到機(jī)體內(nèi)外環(huán)境有害因素干擾，導(dǎo)致精子遺傳物質(zhì)方面出現(xiàn)缺陷[14]。目前國(guó)外部分生殖中心已經(jīng)開展精子DNA碎片率的檢測(cè)，并應(yīng)用在輔助生殖結(jié)局的預(yù)測(cè)，但國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)于精子DNA碎片率檢測(cè)得出的結(jié)論存在較大差異，關(guān)于精子DNA碎片率對(duì)輔助生殖結(jié)局的影響存在爭(zhēng)議[15]。本研究主要以我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者為研究對(duì)象，回顧性比較分析DNA碎片率的不同對(duì)精液常規(guī)參數(shù)、IVF受精結(jié)局及妊娠結(jié)局的影響，本研究結(jié)果顯示，DNA碎片率的不同對(duì)精液常規(guī)參數(shù)（包含精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力）無顯著影響，DNA碎片率越高受精率越低，高DNA碎片率對(duì)卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率會(huì)造成一定程度影響。

綜上所述，對(duì)精子DNA碎片進(jìn)行研究有重要意義，可為輔助生殖結(jié)局預(yù)測(cè)提供相應(yīng)依據(jù)，對(duì)精子DNA碎片率高的患者早發(fā)現(xiàn)、早治療，可提高助孕的有效性。由于本實(shí)驗(yàn)樣本有限，實(shí)驗(yàn)結(jié)果需要大量樣本做進(jìn)一步研究，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅供臨床作為參考。

[參考文獻(xiàn)]

[1]宋焱鑫，郭燕京，董波，等.精子DNA碎片指數(shù)閾值與體外受精-胚胎移植結(jié)局的相關(guān)性研究[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2017，26（6）：546-551.

[2]黃智勇，王立雅，謝春雨，等.精子DNA碎片指數(shù)對(duì)體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局預(yù)測(cè)價(jià)值的研究[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2016，23（4）：97-99.

[3]李婷婷，彭金濤，劉貴華.精子DNA碎片對(duì)體外受精-胚胎移植胚胎發(fā)育的影響[J].中華男科學(xué)雜志，2016，22（5）：467-470.

[4]張娜，劉敬澤，趙世彬，等.精子DNA碎片與活性氧的關(guān)系研究及對(duì)IVF結(jié)局的影響[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2012， 20（8）：122-124.

[5]奚荻，陳赟，戴玉田.精子DNA碎片指數(shù)與IVF/ICSI成功率的關(guān)系[J].中華男科學(xué)雜志，2016，22（1）：77-81.

[6]江偉杰，金帆，周黎明.精液優(yōu)化處理后DNA碎片指數(shù)、精子畸形率與IVF胚胎發(fā)育、早期自然流產(chǎn)的相關(guān)性[J].中華男科學(xué)雜志，2016，22（6）：520-524.

[7]高松城，謝春雨.精子形態(tài)、精子DNA碎片指數(shù)和精漿鋅對(duì)體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的影響[J].中國(guó)生化藥物雜志，2017，37（6）：369-371.

[8]王箭，吳方貴，鄒紅艷，等.精子DNA碎片率、精子形態(tài)率與精子頂體酶之間的關(guān)系及其對(duì)妊娠結(jié)局影響的研究[J].中國(guó)婦幼保健，2015，30（22）：3845-3847.

[9]張寧鋒，劉彩霞，鄭靈燕，等.精子DNA碎片率及頂體酶活性對(duì)男性不育的診斷價(jià)值[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2018，39（1）：93-100.

[10]馬剛，李路，冀雪霞，等.精子DNA碎片率與AIH或IVF-ET臨床妊娠率的相關(guān)性[J].中國(guó)性科學(xué)，2017，26（12）：94-96.

[11]瞿虎，江春強(qiáng)，汪中揚(yáng)，等.精子DNA碎片率與形態(tài)學(xué)及輔助生殖結(jié)局的相關(guān)性分析研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2015， 13（13）：1-3.

[12]史海躍，鄭娟，周黎明，等.精子DNA碎片率對(duì)男性不育及早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2015，53（26）：72-75.

[13]蔡昭煒.精子DNA碎片率與體外受精結(jié)局的相關(guān)性研究[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，26（17）：15-16.

[14]黃智勇，王立雅，謝春雨，等.精液優(yōu)化處理前后精子 DNA碎片率和畸形率的變化及對(duì) IVF 妊娠結(jié)局的影響[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，37（3）：321-322.

[15]陳捷.精子DNA碎片率與體外受精實(shí)驗(yàn)室結(jié)局的關(guān)系[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2017，12（12）：82-83.

（收稿日期：2018-04-26 本文編輯：崔建中）