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        N-Cadherin、sCD40水平變化與多發(fā)性骨髓瘤患者臨床分期的關(guān)聯(lián)性分析

        2018-12-21 04:40:52賈新勇郭改玲王秋平申燕
        實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2018年6期
        關(guān)鍵詞:血清差異水平

        賈新勇,郭改玲,王秋平,申燕

        (漯河醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院檢驗科,河南 漯河462300)

        多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是惡性漿細(xì)胞病的一種常見類型,該病起病緩慢、病情隱匿,且骨髓瘤細(xì)胞增生程度、浸潤程度及部位不同,致使臨床表現(xiàn)復(fù)雜,缺乏特異性。MM不同臨床分期預(yù)后不同,治療方案的選擇及實施亦有差異,故對MM進(jìn)行準(zhǔn)確的臨床分期,可為治療方案的制定提供客觀依據(jù),對改善患者預(yù)后極其重要。近年隨臨床對MM研究深入發(fā)現(xiàn),骨髓微環(huán)境與細(xì)胞因子在其發(fā)病及進(jìn)展中均有重要參與[1,2]。神經(jīng)鈣黏素(N-Cadherin)是鈣黏附分子家族中的一員,其介導(dǎo)的細(xì)胞與細(xì)胞間黏附調(diào)節(jié)著細(xì)胞行為,故研究發(fā)現(xiàn)N-Cadherin可通過介導(dǎo)成骨細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞相互黏附而對成骨細(xì)胞分化產(chǎn)生抑制作用,最終導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,參與骨髓瘤黏附、遷移、定居[3]。白細(xì)胞分化抗原40(CD40)為腫瘤壞死因子受體超家族Ⅰ型跨膜蛋白,其與表達(dá)在CD4+T細(xì)胞上的配體結(jié)合后可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,同時參與炎癥反應(yīng)等生理病理過程,且研究發(fā)現(xiàn)MM患者血清可溶性白細(xì)胞分化抗原40(sCD40)呈異常表達(dá)狀態(tài)[4]。本研究選取我院79例MM患者,以探討N-Cadherin及血清sCD40與其臨床分期的相關(guān)性,報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2014年8月-2017年9月我院收治的79例MM患者設(shè)為觀察組,均符合《中國多發(fā)性骨髓瘤工作組.中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2013年修訂)》中MM診斷標(biāo)準(zhǔn)[5],其中男35例,女 44 例,年齡 36~67 歲,平均(50.22±10.43)歲;ISS臨床分期[6]:Ⅰ期22例,Ⅱ期29例,Ⅲ期28例。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核同意,且入組對象均知情同意;排除妊娠期或哺乳期女性、合并自身免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病。

        1.2 方法

        1.2.1 N-Cadherin表達(dá) 穿刺抽取0.2ml骨髓液樣本,注入肝素抗凝管內(nèi),取50μl骨髓液置入流式試管,同時加入單克隆抗體,避光環(huán)境下放置20min,再于試管內(nèi)加入1ml紅細(xì)胞裂解液,室溫下放置10min;離心(1000r/min,5min)后舍棄上清液,并于試管中注入1.5ml 0.9%氯化鈉溶液,再離心(1000r/min,5min)棄去上清液;試管內(nèi)加入 500μl 0.9%氯化鈉溶液,上機待檢,儀器為Epics XL型流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter公司),以CD45/SSC設(shè)門法直接檢測,計算N-Cadherin(CD325)陽性細(xì)胞在CD38+/CD138+細(xì)胞中比例。

        1.2.2 血清sCD40水平 抽取空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血 3ml,離心(3000r/min,10min)后上層血清液立即送檢或-70℃凍存待檢;以酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清sCD40水平,儀器為Bio-Rad iMark酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司),試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司,具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

        1.3 觀察指標(biāo) ⑴對比MM不同臨床分期之間NCadherin表達(dá)及血清sCD40水平,分析N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的相關(guān)性;⑵根據(jù)不同臨床分期選擇手術(shù)、化療、放療等方案進(jìn)行治療,根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組(n=53)及預(yù)后不良組(n=26),治療有效、疾病轉(zhuǎn)歸或病情穩(wěn)定為預(yù)后良好,治療無效、疾病進(jìn)展為預(yù)后不良。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 以SPSS 18.0軟件統(tǒng)計分析,計量資料(±s)表示,t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗,采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析,計數(shù)資料 n(%)表示,χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平 MM不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)無顯著差異(P>0.05),血清 sCD40水平隨臨床分期增加呈增高趨勢,兩兩比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05),見表 1。

        表1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較(±s)

        表1 不同臨床分期N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較(±s)

        臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F值P值例數(shù) N-Cadherin(%) sCD40(pg/ml)22 29 28/ /10.72±2.18 11.54±1.19 11.17±1.63 5.514 0.227 236.21±36.24 416.22±62.25 651.46±83.16 256.04 0.000

        2.2 N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的關(guān)聯(lián)性 N-Cadherin表達(dá)與MM臨床分期無明顯相關(guān)性(P>0.05),血清sCD40水平與MM床分期呈明顯正相關(guān)(P<0.05),見表 2。

        表2 N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平與MM臨床分期的關(guān)聯(lián)性(n=79)

        2.3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平 治療前,預(yù)后良好組N-Cadherin表達(dá)與預(yù)后不良組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),血清sCD40水平低于預(yù)后不良組(P<0.05);治療后,預(yù)后良好組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前顯著下降(P<0.05),預(yù)后不良組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前無顯著差異(P>0.05),見表 3。

        表3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較(±s)

        表3 不同預(yù)后治療前后N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平比較(±s)

        注:與本組治療前比較,*P<0.05。

        預(yù)后 例數(shù)N-Cadherin(%) sCD40(pg/ml)預(yù)后良好組預(yù)后不良組t值P值53 26/ /治療前11.09±1.35 11.52±1.27 1.356 0.179治療后 治療前 治療后6.35±1.04*10.89±1.25 17.043 0.000 414.25±53.63 574.69±62.22 10.305 0.000 285.31±20.14*565.71±65.87 29.636 0.000

        3 討論

        MM是血液系統(tǒng)常見腫瘤疾病,由于其治療方案的制定與實施主要由臨床分期決定,故早期診斷并進(jìn)行準(zhǔn)確的臨床分期對指導(dǎo)臨床治療、促進(jìn)患者預(yù)后改善至關(guān)重要[7]。目前,MM發(fā)病機制尚不清楚,可能與細(xì)胞內(nèi)信號通路傳導(dǎo)異常、骨髓微環(huán)境異常等因素有關(guān),因此對MM診斷及臨床分期可從此方向切入研究。

        MM患者多伴有骨質(zhì)破壞,且研究證實骨髓瘤病主要由成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞功能失調(diào)所致[8,9]。動物學(xué)試驗則發(fā)現(xiàn),N-Cadherin可表達(dá)于成骨細(xì)胞,且其過度表達(dá)會抑制成骨細(xì)胞分化,而在沉默N-Cadherin表達(dá)后,可顯著削弱其對骨細(xì)胞標(biāo)志物生成的抑制作用[10]。上述間接提示N-Cadherin可能參與MM發(fā)生。此外,亦有研究指出,在MM微環(huán)境中,表達(dá)于骨髓瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞的NCadherin可介導(dǎo)二者相互作用,以維持MM干細(xì)胞靜息狀態(tài),誘導(dǎo)疾病復(fù)發(fā)[11-13]。細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)對骨髓瘤細(xì)胞生長、發(fā)育有調(diào)節(jié)作用,腫瘤壞死因子-α可誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞產(chǎn)生白介素-6,并與白介素-6形成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò),以發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),骨髓瘤細(xì)胞中CD40及其配體共表達(dá)對白介素-6分泌及調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子-α功能具有重要作用,提示CD40參與亦有可能參與MM發(fā)病過程[14-16]。本研究中,觀察組N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平較高,證實N-Cadherin及sCD40在MM發(fā)病中有重要參與作用。研究結(jié)果還顯示,NCadherin表達(dá)與MM臨床分期無明顯相關(guān)性 (P>0.05),而血清sCD40水平隨臨床分期增加而上升,呈明顯正相關(guān)(P<0.05),提示 N-Cadherin 過度表達(dá)雖參與了MM的發(fā)生,但不隨臨床分期而變化,血清sCD40水平則可用于MM臨床分期的診斷與評估。此外,由于預(yù)后不良患者多為Ⅲ期患者,且N-Cadherin表達(dá)與臨床分期無明顯關(guān)聯(lián)性,而血清sCD40水平則與臨床分期密切相關(guān),故治療前不同預(yù)后MM患者N-Cadherin表達(dá)無差異,血清sCD40水平有差異。此外,治療后預(yù)后良好組NCadherin表達(dá)及血清sCD40水平較治療前降低(P<0.05),預(yù)后不良組則無明顯變化(P>0.05),提示N-Cadherin及血清sCD40隨疾病轉(zhuǎn)歸其異常表達(dá)有恢復(fù)正常的趨勢,故其水平變化預(yù)示著MM預(yù)后轉(zhuǎn)歸情況。

        綜上,血清sCD40水平隨MM臨床分期增加呈升高趨勢,與臨床分期呈明顯正相關(guān),且可評估預(yù)后情況,N-Cadherin表達(dá)則與MM臨床分期無明顯相關(guān)性,N-Cadherin表達(dá)及血清sCD40水平隨預(yù)后轉(zhuǎn)歸而降低,故聯(lián)合檢測可為臨床診斷、疾病分期或預(yù)后評估提供客觀依據(jù)。

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