王云溪

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

幽門螺桿菌(Helicobacter Pylori，HP)是一種革蘭氏陰性桿菌，是目前所知能夠在人胃中生存的唯一微生物種類。幽門螺桿菌病包括由幽門螺桿菌感染引起的胃炎、消化道潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤等[1]。HP感染是慢性胃炎最主要的病因，其不良預(yù)后可能導(dǎo)致胃癌，因此對HP感染胃炎的及時治療十分重要。研究發(fā)現(xiàn)[2]，HP感染慢性胃炎患者白細(xì)胞介素－8（IL－8）、熱休克蛋白 70（HSP70）水平表達(dá)呈不同特征。HSP70表達(dá)增高后能增加胃粘膜血流以提高胃粘膜對損傷刺激的抵抗能力[3]。IL－8是涉及中性粒細(xì)胞浸潤胃粘膜炎癥反應(yīng)的主要因子[4]。本研究進(jìn)一步探討HP感染胃炎患者的IL－8、HSP70水平，并分析其臨床意義，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1．1 患者一般資料 選取 2016年8月－2017年8月在我院接受治療的慢性胃炎患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥18周歲；⑵符合慢性胃炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑶無其他消化系統(tǒng)疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并免疫功能障礙者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)90例，其中HP陽性組48例，男28例，女20例，年齡39～65歲，平均49．87±4．13 歲；HP 陰性組 42 例， 男 25 例， 女 17例，年齡 42～65 歲，平均 49．85±4．21 歲。 兩組患者年齡、性別等一般資料比較無明顯差別，具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1．2 方法

1．2．1 舌苔檢查 納入研究的患者在當(dāng)日取坐位，含麻藥后自然伸出舌頭，在自然光下仔細(xì)觀察患者舌苔。

1．2．2 檢測 IL－8、HSP70 表達(dá) 采用免疫組織化學(xué)染色法檢測兩組標(biāo)本中IL－8、HSP70蛋白的表達(dá)，將切片進(jìn)行二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化處理，S－P法檢測，使用3%雙氧水封閉內(nèi)源性過氧化物酶，室溫留置15min以封閉內(nèi)源性過氧化物酶。3%牛血清清蛋白封閉1h處理，然后分別滴加1∶100鼠抗人單克隆抗體（美國Santa Cruz公司）和兔抗人IL－8多克隆抗體 （武漢博士德生物工程有限公司），4℃過夜。PBS沖洗三次后，滴加生物素標(biāo)記的驢抗兔IgG工作液（武漢艾美捷科技有限公司），室溫孵育1h，PBS沖洗三次，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，孵育1h。DAB顯色處理，自來水沖洗，蘇木素復(fù)染。切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。脫色后顯微鏡下觀察處理。設(shè)計空白對照，以PBS代替一抗，其他操作步驟相同。

1．2．3 血清 PGⅠ、PGⅡ、G－17水平測定 清晨抽取患者靜脈血4ml送檢，ELISA法檢測血清PGⅠ、PGⅡ、G－17水平，試劑盒購自北京康美天鴻生物科技有限公司，所有操作按照說明進(jìn)行。

1．3 評價指標(biāo) 觀察兩組患者臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G－17、IL－8、HSP70 水平的差異。分析 HP陽性患者IL－8、HSP70水平與臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G－17水平的相關(guān)性。臨床癥狀積分評價：0分：無癥狀；1分：偶有癥狀但不明顯，不影響日常工作、生活；2分：癥狀較為常見，輕度影響日常工作、生活；3分：癥狀嚴(yán)重，頻繁出現(xiàn)，且影響工作及生活。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 11．5軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)和計量資料分別采用率和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組患者臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G－17、IL－8、HSP70水平的比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，采用Pearson相關(guān)分析法分析HP陽性患者IL－8、HSP70水平與臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G－17水平的相關(guān)性。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組患者臨床癥狀積分的比較 表1顯示，HP陽性組患者舌苔黃膩、胃脘痛或脹痛、噯氣、大便異常、口苦癥狀積分高于HP陰性組，腕痞惡心、納呆、肢體困重癥狀積分低于HP陰性組。

表1 兩組患者臨床癥狀積分的比較

2．2 兩組患者PGⅠ、PGⅡ、G－17水平的比較 表2顯示，HP陽性組患者的PGⅠ、PGⅡ、G－17水平均低于 HP 陰性組 （t=－18．186、－8．476、－8．482，P＜0．001）。

表2 兩組患者PGⅠ、PGⅡ、G-17水平的比較

2．3 兩組患者 IL－8、HSP70水平的比較 表 3顯示，HP陽性組患者的IL－8、HSP70相對表達(dá)量均高于 HP 陰性組患者（t=23．845、4．588，P＜0．001）。

表3 兩組患者IL-8、HSP70水平的比較

2．4 HP 陽性患者 IL－8、HSP70 與臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G－17的相關(guān)性 表 4顯示，HP陽性患者IL－8、HSP70水平與舌苔黃膩、胃脘痛或脹痛、噯氣、大便異常、口苦癥狀積分正相關(guān)，與PGⅠ、PGⅡ、G－17水平負(fù)相關(guān)。

表4 HP陽性患者IL-8、HSP70水平與臨床癥狀積分、PGⅠ、PGⅡ、G-17水平的相關(guān)分析

3 討論

慢性胃炎是由各種病因引起的胃黏膜慢性炎癥，臨床表現(xiàn)癥狀無特異性，癥狀的輕重與胃黏膜的病變程度并非一致，多表現(xiàn)為上腹痛及飽脹。HP感染是其最常見的致病因素[5]。HP感染機(jī)體后，可以穿透黏液層在胃上皮細(xì)胞表面定居，通過釋放毒素因子等破壞胃上皮細(xì)胞，損害患者胃粘膜的結(jié)構(gòu)和功能。胃泌素17(G－17)是一種重要的胃腸激素，主要由G細(xì)胞分泌[6]。G－17的生理功能主要是促進(jìn)胃腸道的分泌功能，其次可通過促進(jìn)胃竇、胃體收縮，來增加胃腸道的運(yùn)動。研究顯示，G－17可以促進(jìn)胰島素和降鈣素的釋放[7]。胃蛋白酶原（pepsinogen，PG）是由胃部分泌的參與消化的胃蛋白酶的前體，可分為PGⅠ和PGⅡ二種亞型。PG的檢測指標(biāo)能較為準(zhǔn)確的顯示胃黏膜細(xì)胞的狀態(tài)和功能。胃酸分泌減少或胃黏膜腺體萎縮時血清PGⅠ降低。PGⅠ的下降是中、重度胃體和胃底萎縮性胃炎的敏感性和特異性指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，HP陽性組患者的PGⅠ、PGⅡ、G－17水平均低于HP 陰性組（P＜0．001）；這是由于胃底腺大量喪失，代之以假幽門腺化生導(dǎo)致。同時慢性胃炎導(dǎo)致G細(xì)胞喪失和G－17分泌減少，從而降低了PGⅠ和PGⅡ的表達(dá)。結(jié)果提示血清PGⅠ、PGⅡ、G－17水平含量變化與HP感染發(fā)生有一定的相關(guān)性，HP感染的人群中血清G－17和PG－Ⅱ值低于非感染者。

核因子 κB(nuclear factor κB，NF－κB)是一種廣泛存在于各種細(xì)胞、具有多種調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子[9]。NF－κB在炎癥發(fā)生時復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起著中心調(diào)節(jié)作用。近年來的研究表明HP感染可以誘導(dǎo)和激活胃粘膜NF－kB信號通路。NF－kB信號通路受到激活可啟動多種炎性細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素－8(interleukin－8，IL－8)、腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF－α） 等引發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng)。Pratap[10]研究認(rèn)為，NF－kB的誘導(dǎo)和激活是引發(fā)HP胃損傷的原因之一。IL－8主要靶細(xì)胞是在感染免疫中發(fā)揮重要作用的粒細(xì)胞群，IL－8通過直接或間接途徑吸引粒細(xì)胞進(jìn)入組織間隙。研究顯示，IL－8在許多疾病炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[11]。謝會忠[12]等研究發(fā)現(xiàn)，HP感染慢性胃炎患者胃黏膜中的IL－8表達(dá)明顯增強(qiáng)。熱休克蛋白（heat shock protein）又稱應(yīng)激蛋白，是機(jī)體細(xì)胞在一些理化因素刺激后高效表達(dá)的一組蛋白質(zhì)[13]。HSP70是主要的伴侶蛋白之一，對維持機(jī)體的自身穩(wěn)定性起著重要作用，可以提高細(xì)胞對應(yīng)激因素的耐受。HSP70的水平反映機(jī)體的應(yīng)激水平或受損害程度，其表達(dá)水平和粘膜損傷程度呈負(fù)相關(guān)[14]。本研究結(jié)果顯示，HP陽性組患者的IL－8、HSP70相對表達(dá)量均高于 HP 陰性組患者（P＜0．001）。Bharati[15]等研究發(fā)現(xiàn)，HP陽性胃炎患者胃粘膜中的HSP70表達(dá)明顯高于陰性的胃炎患者。結(jié)果表明IL－8、HSP70蛋白表達(dá)與感染可能在一定程度上存在著相關(guān)性。此外，本研究發(fā)現(xiàn)HP陽性患者IL－8、HSP70水平與舌苔黃膩、胃脘痛或脹痛、噯氣、大便異常、口苦癥狀積分正相關(guān)，與PGⅠ、PGⅡ、G－17水平負(fù)相關(guān)。表明HP感染慢性胃炎患者與臨床癥狀積分和胃激素水平密切相關(guān)。

綜上所述， 血清中 G－17、PG－Ⅰ、PG－Ⅱ的陽性檢出變化與HP感染有一定的相關(guān)性，HP感染胃炎患者的IL－8、HSP70水平較高，且與臨床癥狀積分和胃激素水平密切相關(guān)。對HP感染患者應(yīng)及早進(jìn)行治療，可以預(yù)防不良預(yù)后的發(fā)生發(fā)展，有利于慢性胃炎的早期診斷和治療。