亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        Rho激酶抑制劑聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)再生的實(shí)驗(yàn)研究

        2018-12-20 06:09:30董春霞
        實(shí)用醫(yī)藥雜志 2018年12期
        關(guān)鍵詞:前肢軸突步態(tài)

        董春霞,金 善

        神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)中,屬于神經(jīng)調(diào)節(jié)因子之一,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、存活、再生和功能維護(hù)等多方面具有調(diào)控作用;同時(shí)對(duì)于受損傷的神經(jīng),可以發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)修復(fù)及再生的作用。研究發(fā)現(xiàn)髓鞘源性抑制分子可以激活Rho激酶活性,而NGF可以對(duì)此過(guò)程產(chǎn)生明顯的抑制作用,因此能夠在上游途徑阻斷Rho/Rho激酶信號(hào)通路[1,2];Fasudil屬于 Rho 激酶的抑制劑,可以從下游途徑對(duì)Rho/Rho激酶信號(hào)通路進(jìn)行阻斷。因此NGF聯(lián)合Rho激酶抑制劑能夠在上下游途徑同時(shí)阻斷Rho/Rho激酶信號(hào)通路,從而最大程度地促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和再生。目前針對(duì)脊髓損傷的情況,尚未有機(jī)構(gòu)將二者聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行研究。該研究選擇應(yīng)用Fasudil聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)行治療,目的在于研究二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠脊髓損傷神經(jīng)再生的促進(jìn)作用。

        1 材料與方法

        1.1 基礎(chǔ)資料及分組方式 該次研究共選擇40只清潔級(jí)健康的雌性SD大鼠,體重均在250~300 g。按照隨機(jī)分組的方式分成四組,每組10只,具體分為對(duì)照組,F(xiàn)asudil治療組,NGF治療組和Fasudil+NGF聯(lián)合治療組四組。其中Fasudil治療組在對(duì)大鼠進(jìn)行脊髓橫斷后,立即給予腹腔注射Fasudil Hydrochloride 5 mg/kg,1次/d,同時(shí)采用微量注射泵以3μl/h的速度經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔持續(xù)注射生理鹽水20μl/d,連續(xù)注射4 W;NGF治療組每只大鼠經(jīng)微量注射泵以3μl/h的速度持續(xù)蛛網(wǎng)膜下腔注射N(xiāo)GF20 μl(60 μg)/d,同時(shí)腹腔注射生理鹽水(與Fasudil Hydrochloride同體積)1次/d,連續(xù)4 W;Fasudil+NGF聯(lián)合組同時(shí)腹腔注射Fasudil Hydrochloride 5 mg/kg,1次/d及微量注射泵蛛網(wǎng)膜下腔注射 NGF 3 μl/h,20 μl(60 μg)/d,連續(xù) 4 W;對(duì)照組腹腔及蛛網(wǎng)膜下腔注射等量生理鹽水。

        1.2 主要試劑 多聚甲醛 (上海化學(xué)試劑廠),Mouse Anti-Tau1抗體 (美國(guó) Millipore公司),SABC-Cy3試劑盒 (武漢博士德生物工程有限公司),F(xiàn)asudil Hydrochloride(天津紅日藥業(yè)有限公司),注射用鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(武漢海特生物制藥股份有限公司)。

        1.3 儀器 眼科維納斯剪(江蘇六六視覺(jué)科技股份有限公司),手術(shù)顯微鏡(上海醫(yī)療儀器廠),微量注射泵(來(lái)普LP210型),MDF-32V超低溫冰箱(日本SANYO),恒冷箱切片機(jī)(德國(guó)Leica公司),熒光顯微鏡(奧林巴斯BX51),多聚賴(lài)氨酸載玻片(上海桑戈生物科技有限公司)。

        1.4 方 法

        1.4.1 模型制備 使用10%的水合氯醛對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉,按照0.4 g/kg給藥劑量注射;待麻醉起效后,將大鼠取俯臥四肢外展體位固定于手術(shù)臺(tái)上。該次研究脊髓損傷位置均選擇在T10節(jié)段,根據(jù)T9~T11的骨性標(biāo)志進(jìn)行查找定位,然后對(duì)手術(shù)區(qū)進(jìn)行備皮、消毒并鋪設(shè)無(wú)菌洞巾。在手術(shù)區(qū)域沿棘突做一約4 cm長(zhǎng)的縱行切口,分層切開(kāi)皮膚和淺筋膜,然后進(jìn)行軟組織分離,至T7~T9椎板暴露;將T8的椎板和棘突咬除,并注意盡量減少對(duì)周?chē)窘M織的撕扯,以防由于椎管內(nèi)靜脈叢破裂而導(dǎo)致大出血。然后在顯微鏡下進(jìn)行操作,將椎管和硬膜囊充分暴露出來(lái),并剪開(kāi)硬膜囊,應(yīng)用眼科維納斯剪跨過(guò)脊髓背側(cè)中線將脊髓后3/4剪斷,深度約為1.5 mm(該次研究所選大鼠的脊髓深度約在2 mm左右);并用棉片對(duì)受傷位置輕壓止血,利用前期分離出的軟組織進(jìn)行創(chuàng)口填塞,從而達(dá)到減少腦脊液外漏及隔絕外界炎性物質(zhì)刺激的作用,防止對(duì)脊髓繼續(xù)造成損傷;同時(shí)在創(chuàng)口撒上青霉素粉劑,按照組織分層,從肌肉到皮下、皮膚逐層進(jìn)行縫合。對(duì)于假手術(shù)組所有過(guò)程與橫斷組相同,但不進(jìn)行脊髓切斷。

        1.4.2 大鼠蛛網(wǎng)膜下腔置管 大鼠橫斷模型制備成功后暫不完全縫合創(chuàng)口,于T10節(jié)段處蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)插入硬膜外導(dǎo)管,導(dǎo)管與椎旁軟組織及皮膚固定,另一端露于皮膚外,石蠟封口,注射藥物時(shí)與微量注射泵連接。

        1.4.3 術(shù)后護(hù)理 由于脊髓神經(jīng)損傷,術(shù)后大鼠體溫調(diào)節(jié)功能?chē)?yán)重失調(diào),出現(xiàn)體溫偏低的情況,所以術(shù)后應(yīng)將飼養(yǎng)環(huán)境中的溫度保持在25~28℃,同時(shí)注意通風(fēng)問(wèn)題。術(shù)后預(yù)防性給予青霉素40萬(wàn)U,肌肉注射1次/d,連續(xù)給藥7 d;同時(shí)為防止出現(xiàn)水電解質(zhì)紊亂給予生理鹽水10 ml/d,腹腔注射,連續(xù)給藥7 d;另外術(shù)后7 d內(nèi)給予含有呋喃坦啶的飲用水以防止和減輕尿路系統(tǒng)感染;術(shù)后應(yīng)加強(qiáng)飲食營(yíng)養(yǎng)支持,可給予適量餅干。術(shù)后實(shí)驗(yàn)大鼠分籠飼養(yǎng),避免互相影響,墊料需要每日定時(shí)更換;同時(shí)為了避免大鼠術(shù)后出現(xiàn)下肢水腫和壓瘡,應(yīng)每日進(jìn)行患肢按摩,并對(duì)下肢周?chē)つw進(jìn)行清洗和干燥。術(shù)后1~2 W大鼠可以恢復(fù)自主排尿功能,在此之前應(yīng)通過(guò)按摩和擠壓膀胱輔助進(jìn)行排尿2次/d。

        1.4.4 運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià) 采用 BBB(Basso,Beattie,and Bresnahan)Locomotor Rating Scale[3]運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法對(duì)大鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)采用實(shí)驗(yàn)操作者以外的雙人、雙盲獨(dú)立評(píng)價(jià)方式,最后按照平均值進(jìn)行評(píng)分。具體標(biāo)準(zhǔn)如下:0分:后肢完全未能運(yùn)動(dòng)。1分:1或2個(gè)關(guān)節(jié)可以進(jìn)行輕微運(yùn)動(dòng),多數(shù)為膝或踝關(guān)節(jié)。2分:存在1個(gè)可以進(jìn)行廣泛運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié),可同時(shí)伴或不伴有另1個(gè)可輕微運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)。3分:存在2個(gè)可以進(jìn)行廣泛運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)。4分:3個(gè)關(guān)節(jié)均可以進(jìn)行輕微運(yùn)動(dòng)。5分:2個(gè)可輕微運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)和第3個(gè)可進(jìn)行廣泛運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)。6分:2個(gè)可進(jìn)行廣泛運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)和第3個(gè)可輕微運(yùn)動(dòng)的關(guān)節(jié)。7分:3個(gè)關(guān)節(jié)均可以進(jìn)行廣泛運(yùn)動(dòng)。8分:無(wú)負(fù)重狀態(tài)下可以進(jìn)行運(yùn)動(dòng)或足底踏地。9分:只有在靜止?fàn)顟B(tài)下可以進(jìn)行負(fù)重足底踏地,或者頻繁甚至持續(xù)的足背踏地。10分:負(fù)重足底步態(tài)偶爾發(fā)生,但與前肢運(yùn)動(dòng)并不協(xié)調(diào)。11分:負(fù)重足底步態(tài)頻繁或持續(xù),但與前肢運(yùn)動(dòng)并不協(xié)調(diào)。12分:負(fù)重足底步態(tài)頻繁或持續(xù),與前肢運(yùn)動(dòng)偶爾協(xié)調(diào)。13分:負(fù)重足底步態(tài)頻繁或持續(xù),與前肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)較為頻繁。14分:持續(xù)存在負(fù)重足底步態(tài),且與前肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)狀態(tài)持續(xù)存在;在剛抬腿和剛接觸地面時(shí)姿勢(shì)以內(nèi)旋或外旋為主,呈現(xiàn)出頻繁的足底步態(tài),前后肢運(yùn)動(dòng)持續(xù)協(xié)調(diào),偶見(jiàn)足背步態(tài)。15分:持續(xù)存在負(fù)重足底步態(tài),且與前肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)狀態(tài)持續(xù)存在;前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)未見(jiàn)或偶見(jiàn)趾尖交替踏地,爪子初次接觸地面時(shí)爪位與身體方向相同且較有力量。16分:持續(xù)存在負(fù)重足底步態(tài),且與前肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)狀態(tài)持續(xù)存在;前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)趾尖交替踏地較頻繁,當(dāng)爪子初次接觸地面時(shí),及立足姿勢(shì)在結(jié)束抬爪之前,爪位與身體方向相同且較有力。17分:足底步態(tài)和與前肢相協(xié)調(diào)的運(yùn)動(dòng)持續(xù)存在,前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)趾尖交替踏地頻繁,在落爪和抬爪時(shí),爪位與身體方向相同且較有力。18分:足底步態(tài)和與前肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)狀態(tài)持續(xù)存在,前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)趾尖交替踏地頻繁,在落爪和抬爪時(shí),爪位與身體方向相同且十分有力。19分:足底步態(tài)和與前肢相協(xié)調(diào)的運(yùn)動(dòng)持續(xù)存在,前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)趾尖交替踏地頻繁,在落爪和抬爪時(shí),爪位與身體平行,且積極有力,大鼠尾部始終保持下垂?fàn)顟B(tài)。20分:足底步態(tài)和與前肢相協(xié)調(diào)的運(yùn)動(dòng)持續(xù)存在,前肢向前運(yùn)動(dòng)時(shí)趾尖交替踏地頻繁,在落爪和抬爪時(shí),爪位與身體平行且有力,大鼠尾部持續(xù)抬起狀態(tài),軀干穩(wěn)定性差。21分:連續(xù)的足底步態(tài),且步態(tài)協(xié)調(diào),腳尖持續(xù)踏地,整個(gè)過(guò)程爪位有力且與身體平行,尾部持續(xù)抬起狀態(tài),且軀干穩(wěn)定。

        特別說(shuō)明:(1)足底步態(tài)是指足底與地面接觸以支持自身體重,且后肢積極進(jìn)行向前方運(yùn)動(dòng)時(shí)足底能夠再次與地面接觸并支持體重。(2)足背步態(tài)是指在行走的過(guò)程中,足背的某個(gè)部位發(fā)揮支持體重的作用。

        1.5 脊髓組織切片制備 每次評(píng)分結(jié)束后,在四組大鼠內(nèi)各隨機(jī)抽取5只,將右心耳剪開(kāi),然后經(jīng)左心室插管到升主動(dòng)脈內(nèi),首先灌注500 ml 37℃的生理鹽水,然后快速灌注250 ml 4%的多聚甲醛(pH7.4),當(dāng)大鼠全身抽搐時(shí)需要首尾拉直并減緩灌注速度;1 h內(nèi)再次灌注250 ml的多聚甲醛,此時(shí)大鼠出現(xiàn)全身僵硬。完成灌注后,在脊髓橫斷上下位置各0.5 cm處取1 cm長(zhǎng)度的損傷段脊髓,置于4%的多聚甲醛內(nèi)進(jìn)行固定,時(shí)間為6 h,然后進(jìn)行脫水處理、石蠟包埋,恒冷切片機(jī)內(nèi)切片,矢狀位切片厚6μm,并貼于防脫載玻片上,晾干后-20℃保存。最后應(yīng)用SABC法進(jìn)行RhoA和ROCK2免疫組織化學(xué)染色。

        1.6 免疫熒光染色(Tau1)方法 具體操作如下:(1)將冰凍切片在室溫環(huán)境下放置1 h,然后置入0.01mol PBS 中清洗 3 次,10min/次;(2)滴加 0.01mol PBS1∶10稀釋的正常血清封閉液,室溫10 min,除去多余液體;(3)滴加 0.01 mol PBS1∶500 稀釋的小鼠抗 Tau1 一抗,37 ℃ 2 h;(4)0.01 mol PBS 洗滌2 min×3 次;(5) 滴加 0.01 mol PBS1∶100 稀釋的生物素化抗小鼠 IgG,37 ℃ 30 min;(6)0.01 mol PBS洗滌 2 min×3 次;(7) 滴加 1∶100 稀釋的 SABCCy3,37 ℃ 30 min;(8)0.01 mol PBS 洗滌 5 min×3次;(9)1∶1 甘油 PBS 封固。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以 (x±s)表示,采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析,兩組之間比較行Dunnett t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        該次研究成模的40只大鼠,在4 W觀察期內(nèi),4只大鼠死亡,其中2只死于體重過(guò)低,另2只死于皮膚感染,已根據(jù)各組的條件死亡時(shí)及時(shí)給予補(bǔ)充。

        2.1 大鼠BBB評(píng)分對(duì)比 Fasudil治療組、NGF治療組和對(duì)照組大鼠術(shù)后3 d BBB評(píng)分為0分,F(xiàn)asudil+NGF聯(lián)合組術(shù)后3 d有部分大鼠開(kāi)始出現(xiàn)后肢輕微運(yùn)動(dòng);術(shù)后 7 d、14 d及 28 d時(shí)間點(diǎn)Fasudil+NGF聯(lián)合組、Fasudil治療組和NGF治療組BBB評(píng)分均較對(duì)照組明顯升高(P<0.05);術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)Fasudil+NGF聯(lián)合組BBB評(píng)分均較Fasudil治療組和NGF治療組升高,差異有顯著性意義 (P<0.05)。 見(jiàn)表 1、圖 1。

        2.2 免疫熒光染色結(jié)果 Tau1為軸突標(biāo)志物,陽(yáng)性纖維顯示為紅色熒光,用image軟件測(cè)量陽(yáng)性纖維的截面積。4 W時(shí)對(duì)照組損傷段脊髓組織內(nèi)陽(yáng)性纖維數(shù)量極少;NGF治療組陽(yáng)性纖維較對(duì)照組增加,但排列紊亂;Fasudil治療組陽(yáng)性纖維也較對(duì)照組明顯增加,且部分陽(yáng)性纖維連續(xù)性增強(qiáng);Fasudil+NGF聯(lián)合組陽(yáng)性纖維數(shù)量較其他三組均明顯增加,連續(xù)性也明顯增強(qiáng),如表2所示具有顯著性差異(P<0.05)。相應(yīng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)見(jiàn)圖2。

        表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分,分)

        表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分,分)

        注:與 Fasudil組、NGF 組比較,*P<0.05;與 Fasudil組、NGF 組和 Fasudil+NGF 組比較,▲P<0.05。

        ?

        表2 各組大鼠4周時(shí)免疫熒光染色陽(yáng)性纖維截面積(mm2)

        圖1 術(shù)后不同時(shí)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)功能

        圖2 4 W時(shí)免疫熒光染色結(jié)果

        3 討論

        當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)出現(xiàn)損傷時(shí),局部可發(fā)生較為復(fù)雜的生理和病理變化,同時(shí)存在著多種抑制神經(jīng)再生的因素,例如局部神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的缺乏或濃度過(guò)低,以及損傷局部出現(xiàn)再生抑制蛋白以及在損傷區(qū)形成膠質(zhì)瘢痕等情況,均不利于神經(jīng)的修復(fù)和再生。Rho/ROCK信號(hào)通路的主要生理功能為調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白的合成、降解、移動(dòng)和收縮等,并參與細(xì)胞的遷移、增殖和存活等基本生命過(guò)程[4,5]。大量研究顯示,Rho/Rho激酶信號(hào)通路對(duì)損傷脊髓的神經(jīng)修復(fù)和再生具有很強(qiáng)的抑制作用,起到關(guān)鍵作用;因此阻斷該信號(hào)通路將有助于促進(jìn)損傷后的神經(jīng)再生。神經(jīng)再生過(guò)程主要分為三個(gè)階段:軸突芽生、再生軸突的生長(zhǎng)和延伸、恢復(fù)神經(jīng)支配原靶器官。研究發(fā)現(xiàn)Rho激酶抑制劑Fasudil能夠改善脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能,促進(jìn)軸突再生,減輕繼發(fā)性損傷[6]。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)廣泛存在于各機(jī)體神經(jīng)系統(tǒng)中,屬于神經(jīng)調(diào)節(jié)因子之一,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、存活、再生和功能維護(hù)等多方面具有調(diào)控作用;同時(shí)對(duì)于受損傷的神經(jīng),NGF可以發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)修復(fù)及再生的作用。對(duì)其生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行分析,主要包括以下四個(gè)方面:(1)NGF具有較強(qiáng)的促進(jìn)神經(jīng)再生作用,可以直接對(duì)再生軸突發(fā)揮作用,通過(guò)受體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),激活周?chē)鞣N分化因子,有效發(fā)揮神經(jīng)趨化作用,從而引導(dǎo)軸突生長(zhǎng)并加快生長(zhǎng)速度;并通過(guò)促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖分化,吞噬、清除細(xì)胞殘?jiān)?,為神?jīng)元的重生提供空間,神經(jīng)膜細(xì)胞同時(shí)可以產(chǎn)生髓磷脂對(duì)神經(jīng)軸突進(jìn)行包繞,恢復(fù)超微結(jié)構(gòu),從而為神經(jīng)傳導(dǎo)恢復(fù)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。(2)NGF具有促進(jìn)神經(jīng)芽生的作用。(3)NGF對(duì)炎性反應(yīng)趨化作用和再生神經(jīng)的血管形成均有促進(jìn)作用。通過(guò)以上分析可見(jiàn),NGF可以有效促進(jìn)中樞和外周神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、成熟,既能夠維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能,又可以加快神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的修復(fù)[2]。同時(shí)NGF對(duì)已經(jīng)出現(xiàn)損傷的神經(jīng)元的基因表達(dá)發(fā)揮調(diào)控作用,抑制細(xì)胞凋亡,降低受損神經(jīng)細(xì)胞的死亡率,具有抑制凋亡速度的作用,從而降低神經(jīng)元的損傷程度。可能的作用機(jī)制包括:(1)NGF可以有效促進(jìn)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白 43mRNA (growth-associated protein,GAP-43 mRNA)的合成;(2)NGF能促進(jìn)突觸素p38mRNA的表達(dá);(3)對(duì)毒性氨基酸的釋放具有顯著的抑制作用;(4)對(duì)超氧自由基的釋放和鈣離子的超載也有顯著的抑制作用[7,8]。脊髓損傷后外源性NGF能夠發(fā)揮神經(jīng)再生修復(fù)作用,但對(duì)損傷局部再生仍然存在著抑制作用,從而使NGF不能發(fā)揮促神經(jīng)再生的最佳效果,如果在給予外源性促神經(jīng)生長(zhǎng)因子的同時(shí)阻斷微環(huán)境中抑制神經(jīng)再生的關(guān)鍵信號(hào)傳導(dǎo)通路,即Rho/Rho激酶信號(hào)通路,就可以最大程度地發(fā)揮促進(jìn)損傷神經(jīng)的修復(fù)和再生作用。目前針對(duì)脊髓損傷的情況,尚未有將二者聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行的研究。本研究針對(duì)大鼠脊髓損傷情況,選擇應(yīng)用Fasudil聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)行治療,采用BBB評(píng)分及微管相關(guān)蛋白Tau1免疫熒光染色法觀察聯(lián)合應(yīng)用對(duì)損傷后軸突再生及運(yùn)動(dòng)功能的改善作用,結(jié)果顯示兩者聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同效應(yīng),能在更大程度上促進(jìn)軸突再生及改善運(yùn)動(dòng)功能。

        鹽酸法舒地爾(fasudil hydrochloride)注射液,屬于ROCK抑制劑,可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)ROCK催化內(nèi)的ATP結(jié)合位點(diǎn),發(fā)揮競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用,從而阻斷ROCK活性,達(dá)到抑制Rho/Rho激酶信號(hào)通路下段的作用[9]。在Rho/Rho激酶信號(hào)通路被阻斷后,對(duì)于可以導(dǎo)致生長(zhǎng)錐形成塌陷的髓鞘源性的再生抑制分子,包括Nogo2A、MAG和Omgp等的傳導(dǎo)受到抑制,從而使得損傷后的軸突可以繼續(xù)進(jìn)行修復(fù)和再生[10]。外源性NGF的應(yīng)用補(bǔ)充了損傷環(huán)境中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的缺乏,同時(shí)近年來(lái)的研究還發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘源性再生抑制分子(Nogo2A、MAG和Omgp等)與NGF之間存在一個(gè)共同的低親和力受體,即p75NTR,所以通過(guò)給予外源性NGF,增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)局部NGF的濃度,從而大量與p75NTR發(fā)生結(jié)合,達(dá)到競(jìng)爭(zhēng)性抑制Nogo2A、MAG和Omgp等與受體的結(jié)合,從而抑制其對(duì) Rho 的激活[1,2]。 由此可見(jiàn)NGF能夠在Rho/Rho激酶信號(hào)通路的上游途徑發(fā)揮抑制作用,但由于p75NTR只是NGF的低親和受體[2],因此可能這種抑制作用并不完全。NGF與Fasudil聯(lián)合應(yīng)用后,前者部分阻斷了Rho/Rho激酶信號(hào)通路的上游途徑,后者阻斷了下游途徑,兩者共同作用下在更大程度上抑制了Rho/Rho激酶信號(hào)通路的傳導(dǎo),而此時(shí)NGF在再生抑制機(jī)制被阻斷的前提下能夠更有效地發(fā)揮其促神經(jīng)再生的作用,因此NGF與Fasudil的聯(lián)合應(yīng)用在更大程度上促進(jìn)了脊髓損傷后的軸突再生和相應(yīng)的神經(jīng)功能恢復(fù)。該次研究結(jié)果顯示,聯(lián)合應(yīng)用Fasudil+NGF組的大鼠術(shù)后3 d時(shí)BBB評(píng)分明顯高于對(duì)照組與單獨(dú)應(yīng)用Fasudil治療和NGF治療組的大鼠(P<0.05),同時(shí)Fasudil+NGF聯(lián)合用藥組的大鼠多數(shù)在術(shù)后3 d已經(jīng)開(kāi)始出現(xiàn)后肢輕微運(yùn)動(dòng);之后各時(shí)間點(diǎn)的比較,F(xiàn)asudil+NGF聯(lián)合組的BBB評(píng)分也均高于其他三組,由此可以印證,采用Fasudil和NGF聯(lián)合用藥,分別對(duì)Rho/Rho激酶信號(hào)通路的上游和下游進(jìn)行阻斷,達(dá)到徹底阻斷的作用。另外免疫熒光染色結(jié)果顯示,F(xiàn)asudil和NGF聯(lián)合應(yīng)用后,軸突陽(yáng)性纖維數(shù)量更多且排列整齊,連續(xù)性更強(qiáng),也說(shuō)明二者聯(lián)合用藥對(duì)神經(jīng)的再生具有很好的促進(jìn)作用。

        綜上所述,聯(lián)合應(yīng)用Fasudil與NGF可以有效促進(jìn)受損脊髓神經(jīng)修復(fù)和再生,軸突纖維再生增多且連續(xù)性強(qiáng),可以有效改善運(yùn)動(dòng)功能,兩者聯(lián)合應(yīng)用將為脊髓損傷的藥物治療提供新的思路。

        猜你喜歡
        前肢軸突步態(tài)
        小螞蟻與“三角步態(tài)”
        microRNA在神經(jīng)元軸突退行性病變中的研究進(jìn)展
        奶牛難產(chǎn)助產(chǎn)技術(shù)
        基于面部和步態(tài)識(shí)別的兒童走失尋回系統(tǒng)
        電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:04
        基于Kinect的學(xué)步期幼兒自然步態(tài)提取
        樹(shù)懶
        大自然探索(2017年7期)2017-07-25 07:39:04
        霸王龍有了小兄弟
        神經(jīng)干細(xì)胞移植聯(lián)合腹腔注射促紅細(xì)胞生成素對(duì)橫斷性脊髓損傷大鼠神經(jīng)軸突的修復(fù)作用
        便宜假肢能模仿正常步態(tài)
        香港台湾经典三级a视频| 国产一区二三区中文字幕| 国产一区二区三免费视频| 国产欧美一区二区精品久久久| 扒开双腿疯狂进出爽爽爽视频| 在线精品日韩一区二区三区| 国产麻豆成人精品av| 亚洲国产美女高潮久久久| 闺蜜张开腿让我爽了一夜| 日韩在线观看你懂的| 国产成人自拍视频在线观看网站| 三级国产精品久久久99| 国产肥熟女视频一区二区三区| 免费AV一区二区三区无码| 国产午夜精品av一区二区三| 精品国产午夜肉伦伦影院| 欧洲精品免费一区二区三区| 亚洲国产精品国语在线| 国产一区二区在线中文字幕| 国产97色在线 | 国产| 又黄又爽又高潮免费毛片| 亚洲无码vr| 一区二区三区午夜视频在线| 丰满少妇被粗大的猛烈进出视频 | 少妇性俱乐部纵欲狂欢电影| 亚洲日韩精品国产一区二区三区| 国产精品美女久久久久浪潮AVⅤ | 国产精品卡一卡二卡三| 2020最新国产激情| 亚洲精品久久区二区三区蜜桃臀| 亚洲国产精品ⅴa在线观看| 亚洲小说图区综合在线| 老司机在线免费视频亚洲| 又色又爽又黄的视频软件app | 欧韩视频一区二区无码| 日本在线一区二区三区观看| 中文字幕乱码在线人妻| 麻豆成人精品国产免费| 久久久久久一级毛片免费无遮挡| 国产精品毛片一区二区三区| 亚洲欧美日韩精品久久|