劉麗娜，高 陽(yáng)

［作者單位］451100河南新鄭，新鄭市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（劉麗娜，高陽(yáng)）

乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）感染率較高，感染后該病毒持續(xù)復(fù)制導(dǎo)致疾病遷徙、容易反復(fù)且難以治愈，最終發(fā)展成為肝硬化、肝衰竭，HBV已經(jīng)嚴(yán)重危害人類健康［1］。合理的使用抗病毒藥物是治療HBV感染的主要手段［2］。目前檢測(cè)肝組織內(nèi)cccDNA是判斷抗HBV療效及患者預(yù)后的金標(biāo)準(zhǔn)，但該檢測(cè)屬于有創(chuàng)檢測(cè)，對(duì)患者的損傷較大，在臨床上普及較困難［3］。有研究表明，血清HBsAg作為肝內(nèi)cccDNA血清學(xué)的替代指標(biāo)，血清HBsAg水平的變化貫穿在整個(gè)病程中，準(zhǔn)確地檢測(cè)血清HBsAg水平的變化可以預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展、觀察治療效果［4］。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和電化學(xué)發(fā)光免疫法（CLIA）是常用的血清HBsAg水平檢測(cè)方法，在臨床上均被廣泛應(yīng)用，為了解兩種檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)，現(xiàn)將兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性、精密度和靈敏度進(jìn)行比較，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 血清標(biāo)本 由衛(wèi)生部臨檢中心提供標(biāo)準(zhǔn)血清盤50份，其中陽(yáng)性標(biāo)本30份，陰性標(biāo)本20份，陽(yáng)性率為60%。由北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司提供HBsAg血清（液體）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度為2IU/ml和1IU/ml兩種規(guī)格，產(chǎn)品編號(hào)分別為GBW（E）090071（GY-004）和 GBW（E）090071（GY-003）。

1.2 試劑與儀器 ELISA法使用安圖PHOMO酶標(biāo)儀，HBsAg使用上?？迫A試劑盒，CLIA法檢測(cè)儀器為德國(guó)羅氏E411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀，試劑與該儀器配套。

1.3 測(cè)定方法 （1）分別使用ELISA法和CLIA法對(duì)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)血清盤進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，每次檢測(cè)均行內(nèi)部質(zhì)控，計(jì)算兩種方法陽(yáng)性檢出率，與標(biāo)準(zhǔn)血清陽(yáng)性率做對(duì)比。（2）將HBsAg血清（液體）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（2 IU/ml、1 IU/ml）分裝 20 份，10 份冷凍保存每天監(jiān)測(cè)一次，進(jìn)行批間重復(fù)性試驗(yàn)；另外10份同批檢測(cè)，進(jìn)行批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)。（3）將HBsAg血清（液體）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（1 IU/ml）按倍比稀釋（1.0、0.5、0.25、0.125、0.063、0.032），將稀 釋 后 的 標(biāo) 本 分 別 使 用ELISA法和CLIA法檢測(cè)，檢測(cè)重復(fù)5次，平均值作為檢測(cè)結(jié)果，將能測(cè)出的最低濃度作為檢出限。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用SPSS 22.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料組間采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確性比較 ELISA法和CLIA法檢測(cè)陽(yáng)性率均為65%，與標(biāo)準(zhǔn)血清盤提供情況相符，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 精密度比較 CLIA法批內(nèi)CV值、批間CV值均小于ELISA法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ELISA法和CLIA法檢測(cè)HBsAg的變異系數(shù)值比較（%）

2.3 靈敏度比較 ELISA法在0.5 IU/ml時(shí)為陽(yáng)性，0.25 IU/ml時(shí)為陰性，即ELISA法檢出限為0.5 IU/ml；CLIA 法 0.063 IU/ml為陽(yáng)性，在 0.032 IU/ml為陰性，CLIA法檢出限為0.063 IU/ml。CLIA法檢出限低于ELISA法。見(jiàn)表2。

表2 ELISA法和CLIA法檢測(cè)HBsAg靈敏度比較（IU/ml）

3 討論

我國(guó)是HBV感染高流行區(qū)，約有1.2億人攜帶HBV，在HBV攜帶者中約有25%患者發(fā)展為慢性肝病，最終惡化成肝硬化甚至肝癌，該病毒通過(guò)血液、體液傳播，傳播范圍廣，嚴(yán)重影響人們的生活［5］。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，許多藥物對(duì)抑制HBV的復(fù)制、減輕肝臟炎癥、控制疾病有很好的作用，可以阻止疾病進(jìn)展，減輕感染HBV對(duì)生活帶來(lái)的影響［6］。HBsAg的出現(xiàn)常伴隨HBV病毒的存在，對(duì)HBsAg檢測(cè)可以反映體內(nèi)HBV病毒復(fù)制的情況，其檢測(cè)方式分為定性及定量?jī)煞N方式［7］。定性檢測(cè)可判斷是否有HBV病毒感染，定量檢測(cè)對(duì)于判斷治療效果、確定治療方案及治療時(shí)間有重要指導(dǎo)價(jià)值。目前定量檢測(cè)在臨床上的作用越來(lái)越受重視，血清HBsAg水平可以作為HBV攜帶者觀察病情變化的指標(biāo)。

ELISA法是將酶標(biāo)記物作為檢測(cè)的指示物，通過(guò)以抗原和抗體的結(jié)合發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的研究［8］。HBV病毒的抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合后，通過(guò)酶的催化作用，使含量較少的抗原或抗體能在短時(shí)間內(nèi)被標(biāo)識(shí)出來(lái)。該方法作為一種傳統(tǒng)方法，具有價(jià)格便宜操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，在我國(guó)HBV病毒感染篩查中被廣泛應(yīng)用。但由于該操作流程較多，每步的操作都會(huì)影響最終的結(jié)果，ELISA法在樣本濃度過(guò)高或過(guò)低時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象，在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)同一份標(biāo)本在不同的實(shí)驗(yàn)室中測(cè)出不同結(jié)果，甚至在同一實(shí)驗(yàn)室中不同時(shí)間點(diǎn)不同人操作也會(huì)出現(xiàn)不一樣的結(jié)果。這也降低了檢測(cè)結(jié)果的可信度，給患者和臨床醫(yī)務(wù)人員帶來(lái)了不必要的麻煩。CLIA法是將免疫技術(shù)與電化學(xué)檢測(cè)結(jié)合到一起的一種免疫分析方法，這種方法是以化學(xué)發(fā)光物質(zhì)作為標(biāo)記物，利用抗原和抗體免疫前后電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的改變進(jìn)行的［9］。CLIA法利用電化學(xué)引發(fā)的特異性發(fā)光技術(shù)在電極表面的作用，提高了檢測(cè)的靈敏度和線性范圍，且該檢測(cè)過(guò)程極大地降低了交叉污染，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)方面有廣泛的應(yīng)用前景。

該研究中，ELISA法和CLIA法在血清HBsAg檢測(cè)陽(yáng)性率方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），與殷蓓琦等［10］CLIA法陽(yáng)性檢測(cè)率高于ELISA法的結(jié)果不符，這可能與該研究樣本量較小、血清HBsAg濃度分布不均有關(guān)。另外ELISA法平均批內(nèi)CV為8.64%，批間CV為16.39%；CLIA法平均批內(nèi)CV為1.62%，批間CV為5.21%，這說(shuō)明CLIA法比ELISA法精密度好，這與韓春俐等［11］將ELISA法和CLIA法用于檢測(cè)HIV病毒的研究結(jié)果一致。研究結(jié)果顯示CLIA法的檢出限低于ELISA法，即CLIA法的靈敏度更高，在低濃度的樣本測(cè)定中優(yōu)勢(shì)明顯，熊海燕等［12］使用兩種方法檢測(cè)孕婦乙肝表面抗原的研究結(jié)果也與該研究觀點(diǎn)一致。