洪獻(xiàn)梅

(麗江市林業(yè)科學(xué)研究所，云南 麗江 674100)

1 引言

白芨為蘭科白芨屬多年生草本植物。分布在河南、陜西、甘肅、浙江、福建、四川、貴州、云南等地。白芨塊莖入藥，具有收斂、補(bǔ)肺止血、消腫生肌等廣泛的藥用價值。白芨市場需求量較大，但由于人們長期的采挖導(dǎo)致野生資源愈來愈少，瀕臨滅絕，而常規(guī)的分株繁殖，繁殖系數(shù)低，難以滿足市場需求，本實驗選用白芨種子進(jìn)行無菌播種，獲得無菌苗后建立快繁體系，為規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗奠定基礎(chǔ)。

2 試驗設(shè)計

(1)試驗儀器：電子天平，超凈工作臺，高壓滅菌鍋等。

(2)試劑：基本培養(yǎng)基(MS，1/2MS)，植物外源激素(萘乙酸，6-芐氨基嘌呤)，蔗糖，瓊脂，消毒試劑(HgCl2，酒精)等。

(3)培養(yǎng)材料：白芨種子。

(4)基本藥劑和培養(yǎng)基。

試驗設(shè)計采用MS和1/2MS兩種基礎(chǔ)培養(yǎng)基和不同激素配比的培養(yǎng)基，附加蔗糖3%，瓊脂0.65%，pH為5.8～6.0。

誘導(dǎo)白芨種子萌發(fā)培養(yǎng)基采用3個不同配比做對比:①1/2MS2.47 g/L+NAA1 mg /L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；②MS4.74 g/L+NAA1 mg /L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；③1/2MS2.47 g/L+6-BA1 mg/L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L。

白芨叢芽增殖培養(yǎng)基采用4個不同配比做對比:④1/2MS2.47 g/L+6-BA1.0 mg/L+NAA0.15 mg/L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑤MS4.74 g/L+6-BA1.0 mg/L+ NAA0.15 mg/L + 瓊脂6.5 g/L+ 蔗糖30 g/L；⑥MS4.74 g/L+6-BA1.0 mg/L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑦M(jìn)S4.74 g/L+ NAA0.15 mg/L+瓊脂6.5 g/L+ 蔗糖30 g/L。

壯苗生根培養(yǎng)基采用3個不同配比做對比：⑧1/2MS2.47 g/L+NAA0.5 mg /L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑨1/2MS2.47 g/L+NAA1 mg/L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑩1/2MS2.47 g/L +NAA1.5 mg/L+瓊脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L。

3 試驗方法及過程

(1)環(huán)境消毒。將組培操作室、培養(yǎng)室清潔消毒，然后將操作室內(nèi)及潔凈工作臺上的紫外燈開啟照射消毒30min，保證工作臺工作區(qū)內(nèi)處于無菌環(huán)境。

(2)外植體消毒。選取較飽滿的白芨種子用少量洗衣粉水清洗干凈，在超凈工作臺上采用70%乙醇消毒30 s，無菌水沖洗后用0.1%升汞消毒15 min，再用無菌水沖洗3～4次，用無菌濾紙把水分吸干。從果實中部剝開，取出種子，迅速接種到配置好的培養(yǎng)基上。

(3)培養(yǎng)基配制。按照試驗設(shè)計，根據(jù)不同階段各個培養(yǎng)基配方的不同處理，分別稱取各個成分并加入少量水加熱完全溶解后，混合定溶，調(diào)節(jié)pH值，分裝到組培瓶內(nèi)，連同接種用具一起進(jìn)行高溫滅菌。在121 ℃高溫蒸汽滅菌30 min后冷卻備用。

(4)接種。做好器具及雙手消毒后，在超凈工作臺里按無菌操作要求打開瓶蓋，用鑷子夾取適量上述準(zhǔn)備好的種子，均勻撒落在培養(yǎng)基上，并蓋好瓶蓋。

(5)培養(yǎng)室培養(yǎng)。將接種好的組培瓶移至組培室內(nèi)組培架上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境條件設(shè)定為：溫度25±1 ℃，光照1000～1500 Lx，光周期為14 h。

培養(yǎng)2個月后培養(yǎng)基養(yǎng)份耗盡并且小苗過密，更換培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到叢芽增殖培養(yǎng)基并進(jìn)行分瓶，更換培養(yǎng)基瓶后繼續(xù)培養(yǎng)2個月左右再轉(zhuǎn)接至壯苗生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。前后總共培養(yǎng)大約7個月左右，即可出瓶煉苗。

4 煉苗移栽

煉苗移栽基質(zhì)采用透氣性和保濕性較好的珍珠巖、蛭石、松樹皮、泥炭土等。移栽前在大棚室內(nèi)煉苗3～5 d，提高抗性和適應(yīng)性。將小苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，移栽到準(zhǔn)備好的基質(zhì)中。適度遮蔭，濕度保持在80%左右，待組培移栽苗新葉展開和新根長出后，即可按常規(guī)管理。

5 結(jié)果分析

通過不同成分配比培養(yǎng)基的試驗比較，認(rèn)真觀察記錄各個階段白芨在培養(yǎng)基上生長表現(xiàn)狀況，分析白芨種子萌發(fā)增殖生根表現(xiàn)最佳的培養(yǎng)基，試驗結(jié)果見表1。

表1 4個不同配比的培養(yǎng)基對苗高的影響-方差分析

表1的結(jié)果表明F>Fcrit，差異顯著，說明編號為④、⑤、⑥、⑦這4種不同培養(yǎng)基的對苗高的影響有顯著的差異。

表2 3種不同濃度NAA對誘導(dǎo)白芨苗生根的影響-方差分析

表2的結(jié)果表明F>Fcrit，差異顯著，說明編號為⑧、⑨、⑩這3種不同培養(yǎng)基對生根的影響有顯著的差異。

根據(jù)白芨組培苗在各個階段不同培養(yǎng)上的生長表現(xiàn)狀況，進(jìn)行綜合評價分析，表現(xiàn)較好的用+++表示，一般的用++表示，相對較差的用+表示。結(jié)果如表3。

表3 白芨組培各階段不同培養(yǎng)基表現(xiàn)狀況匯總

結(jié)果表明：在相同培養(yǎng)條件下，種子的萌發(fā)率及長勢對比可見①>②、①>③，說明MS, 1/2MS這兩種常用的基本培養(yǎng)基中，1/2MS培養(yǎng)基更有利于白芨種子的萌發(fā)。NAA，6-BA這兩種外源激素對比，NAA更利于白芨種子萌發(fā)；增殖培養(yǎng)中⑤>④、⑤>⑥、⑤>⑦，說明MS, 1/2MS相比，MS更有利于白芨的增殖生長，外源激素同時加6-BA和NAA對促進(jìn)增殖生長的影響要強(qiáng)于只加其中一種；壯苗生根培養(yǎng)中⑧>⑨>⑩,說明低濃度的外源激素NAA更有利于誘導(dǎo)生根。本實驗采用NAA作為誘導(dǎo)生根的外源激素，誘導(dǎo)出來的根較長、較粗壯，植株生根率為100%。移栽后成活率達(dá)到了70%左右(圖1、2)。

圖1 接種一周后白芨種子萌發(fā)狀況

圖2 清洗干凈的組培苗

6 結(jié)論

6.1 不同基本培養(yǎng)基對白芨種子萌發(fā)的影響

MS培養(yǎng)基鹽分較高，而1/2MS的鹽分相對較低，在誘導(dǎo)白芨種子萌發(fā)時，低鹽的1/2MS作為種子萌發(fā)的基本培養(yǎng)基，更有力于種子萌發(fā)。而在白芨進(jìn)行叢芽增殖的時候，富含更多鹽分的MS則更加適合，能夠提供更多的養(yǎng)分。

6.2 不同的植物激素對白芨組培的影響

通過試驗表明：不同的外源激素及不同的濃度對白芨組培各階段的影響都不同。種子萌發(fā)最好的NAA1mg/L；叢芽增殖培養(yǎng)較適宜6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L ；壯苗生根較適宜NAA0.5mg/L 。