劉佳欣, 吳方銀, 梅 榕, 明 娟, 劉 玖

(四川省婦幼保健院, 1. 婦幼健康管理部; 2. 生殖醫(yī)學(xué)中心, 四川 成都, 610045)

宮頸癌是較為常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病原因與病毒感染有關(guān)，尤其與人乳頭瘤病毒(HPV)16、18型感染高度相關(guān)[1-3]。HPV病毒種類多樣，按照其引起的不同臨床表現(xiàn)可分為黏膜高、低危型與皮膚高、低危型[4-6]。高危型HPV會引起外生殖器癌、子宮頸癌和宮頸上皮細(xì)胞癌變，對患者的生命健康造成嚴(yán)重威脅[7-8]。本研究選取34 000名檢測HPV的女性，探討HPV的類型分布特征及宮頸癌患病的高危人群，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2018年4月四川省婦幼保健院行HPV檢測的34 000位婦女為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 年齡25～65歲; ② 無精神失常類疾病以及其他身體缺陷; ③ 無外陰部細(xì)胞學(xué)與宮頸異常病史; ④ 子宮和宮頸完整，未采用手術(shù)切除或部分切除; ⑤ 無懷孕患者; ⑥ 戶口所在地為成都市武侯區(qū)，且為轄區(qū)常住人口; ⑦ 同意簽署知情同意書。經(jīng)過篩選，有14 000名婦女被納入調(diào)查，登記研究對象姓名并編號。

1.2 實驗方法

1.2.1 宮頸細(xì)胞采樣: 所有參加本次調(diào)查的醫(yī)生以及調(diào)查人員進(jìn)行2周的培訓(xùn); 規(guī)范調(diào)查問卷書寫方式和標(biāo)準(zhǔn)(如有不能書寫的調(diào)查對象，則由該調(diào)查對象進(jìn)行口頭描述，研究人員代寫); 規(guī)范宮頸脫落細(xì)胞的收集流程與保存的方式、方法。接受調(diào)查的所有人員先要填寫一份調(diào)查問卷，不符合篩選條件的不再進(jìn)行進(jìn)一步分析。符合條件者需接受1個常規(guī)婦科檢查，并在檢查過程中采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，要求所有樣本在3周內(nèi)檢測完畢。

1.2.2 試劑與儀器: 人乳頭狀瘤病毒核酸擴增熒光檢測試劑盒、人乳頭狀瘤病毒核酸擴增分型檢測試劑盒購自Takara; 瓊脂糖、溴化乙錠、三羥甲基氨基甲烷購自美國Sigma公司；硼酸、乙二胺四乙酸購自北京化工廠；宮頸拭子、標(biāo)本儲存瓶購自北京艾然生物科技有限有限公司; PCR管購自美國Corning公司；微量移液槍購自法國Eppendorf公司; Hybri Max型導(dǎo)流雜交儀購自凱普生物科技公司; Nanodrop光度計購自Thermo Scientific。

1.2.3 檢測方法: 先用HPV核酸擴增熒光檢測試劑盒，該試劑盒可以檢測出13種與宮頸癌相關(guān)的HPV類型(16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68), 但是該試劑盒不能對DNA進(jìn)行分型。先用此試劑盒鑒定研究對象是否被HPV病毒感染，實驗嚴(yán)格按照試劑說明書依次進(jìn)行DNA提取、濃度測定，置于ABI Stepone PCR 擴增儀上擴增檢測，根據(jù)擴增過程中收集的熒光信號判斷是否存在HPV病毒的感染及判斷陽性者的病毒載量，然后將PCR擴增產(chǎn)物通過人乳頭狀瘤病毒核酸擴增分型檢測試劑盒進(jìn)行分型檢測。核酸擴增采用美國ABI公司7500型PCR儀，核酸雜交采用凱普公司配套生產(chǎn)的醫(yī)用核酸分子快速雜交儀(Hybri Max)。感染2種及以上HPV基因型為復(fù)合型感染[9]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

使用Graphpad Prism數(shù)據(jù)處理軟件對計數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計與作圖分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同年齡組HPV陽性率比較

14 000名受檢對象根據(jù)年齡分為A組(≤35歲)、B組(>35歲～≤45歲)、C組(>45歲～≤55歲)、D組(>55歲～≤65歲)。A組、B組、C組、D組HPV陽性率分別為7.93%(230/2 900, 95%CI為6.70～7.94)、8.90%(430/4 830, 95%CI為7.12～7.15)、9.94%(90/5 330, 95%CI為7.46～8.51)、9.57%(530/940, 95%CI為8.65～10.60), 其中A組與B組無顯著差異(P>0.05), 但C組與A、B、D組相比均有顯著差異(P<0.05)。本研究人群高危型HPV總感染率9.14%(1 280/14 000, 95%CI為7.63～8.11)。在1 280例高危型HPV病毒感染患者中，有120例不能與21型探針的任一基因型進(jìn)行配對，將這些基因樣本記為未知型X，下文只對余下的1 160例高危型HPV病毒類型的基因進(jìn)行探討。

2.2 與宮頸癌相關(guān)的人乳頭瘤病毒類型及比例

在與宮頸癌相關(guān)的單一類型人乳頭瘤病毒類型中，比例最高的為-52型(22.41%), 其次為-16型(12.56%), -33型(9.76%), -58型(5.26%), -68型(5.20%), -18型(5.16%), -31型(3.34%), -59型(4.01%), -39型(2.02%), -51型(1.32%), -56型(1.12%), -35型(0.48%), -45型(0.37%)。單一類型HPV感染率為69.82%, 還有27.90%人群被診斷為多種高危HPV感染。

2.3 復(fù)合HPV感染例數(shù)及比例

感染1種HPV病毒者810例(69.83%), 感染2種HPV病毒者160例(13.79%), 感染3種HPV病毒者140例(12.07%), 感染4種HPV病毒者30例(2.59%), 感染5種HPV病毒者18例(1.55%), 感染6種及6種以上HPV病毒者2例(0.17%)。

2.4 與宮頸癌相關(guān)的人乳頭狀瘤病毒的年齡分布

統(tǒng)計所有高危型HPV感染患者(包括單一感染和多重感染)的年齡，發(fā)現(xiàn)各高危型HPV亞型中不同年齡段比例的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 且呈隨機分布，見表1。

表1 單一類型HPV感染類型的年齡分布情況[n(%)]

2.5 多種HPV感染與年齡分布

隨著年齡的增加，人群中感染2種以上HPV的概率增大，其中D組感染3、4、5種HPV的患者比例最高(P<0.05), 各組感染1或6種HPV的患者比例無顯著差異(P>0.05), 見表2。

表2 多種HPV感染的年齡分布情況[n(%)]

3 討 論

宮頸癌是較為常見的女性生殖器惡性腫瘤，與肝癌、肺癌、胃癌等許多原發(fā)癌癥不同，宮頸癌可以通過分析宮頸脫落細(xì)胞學(xué)進(jìn)行篩查，從而在宮頸細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化前加以控制，降低宮頸細(xì)胞癌變對機體的損害[10]。研究[11]證明原發(fā)性宮頸癌的發(fā)生與HPV感染有關(guān)。HPV是一種可引起人體皮膚黏膜鱗狀上皮細(xì)胞增殖的球形DNA病毒，有多種亞型，其中可以引發(fā)宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等多種癌癥的統(tǒng)稱為高危型HPV[12]。

有研究[13]指出，高危型HPV感染率與地域、年齡、生活作息習(xí)慣等有密切聯(lián)系。本研究選取本地25～65歲婦女作為研究對象，其主要原因為35～60歲為宮頸癌的高發(fā)年齡，鑒于宮頸癌的發(fā)病有年輕化的趨勢，所以將年齡范圍擴展至25～65歲。作者發(fā)現(xiàn)成都市武侯區(qū)14 000例受檢對象中共有1 280例調(diào)查對象被確認(rèn)為與宮頸癌相關(guān)的HPV攜帶者，感染率為9.14%, 高于楊麗娟等[14]報道的西南地區(qū)HPV平均感染率7.89 %。處于45～55歲的高危型HPV感染率(9.94%)顯著高于處于其他任一年齡段的高危型HPV感染率，原因可能與中國女性在45周歲以后開始出現(xiàn)絕經(jīng)有關(guān)，絕經(jīng)期后婦女的性激素水平與絕經(jīng)前相比明顯降低，這直接導(dǎo)致了絕經(jīng)后婦女某一時段免疫力的下降，從而導(dǎo)致了HPV的易感性及潛伏時間的延長[15]。作者通過對不同年齡段-52型HPV感染情況進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn), -52型HPV在年齡大于55歲以上的人群中具有較高的比例。在所有的HPV攜帶者中還有較高比例的人群被診斷為多種高危型HPV感染，該比例為27.34 %(350/1 280)。復(fù)合型HPV感染分析結(jié)果顯示，復(fù)合型HPV感染率的感染型別與感染人數(shù)呈負(fù)相關(guān)，但是高危型HPV型別隨著年齡的增加而呈現(xiàn)出一定的正相關(guān)性。