蔡培培，張 威，周連群，嚴(yán)茹紅，朱紅楠△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州科技城醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇蘇州 215153；2.中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所，江蘇蘇州 215153)

便攜式凝血儀具有體積小、攜帶方便、檢測快速，只需指尖血便可快速測定凝血酶原時間(PT)、國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)的特性[1]。近年來，現(xiàn)場快速檢驗(yàn)(POCT)在國外的應(yīng)用已較為普遍，而國內(nèi)采用POCT檢測凝血指標(biāo)尚未普及。本文將課題組所研制的派瑞林修飾石英晶體微天平(P-QCM)家用便攜式凝血儀的PT、INR結(jié)果與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果進(jìn)行比對，旨在探討兩種儀器測定結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017年11月至2018年2月南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州科技城醫(yī)院門診住院患者50例，其中40例為建卡孕婦，10例口服華法林患者。

1.2儀器與試劑 P-QCM家用便攜式凝血分析儀及其配套芯片和試劑；Sysmex CS5100全自動凝血分析儀；KDC-2046低速冷凍離心機(jī)；PT試劑(批號：546983)，ISI為1.01。

1.3方法 采集患者空腹靜脈血。標(biāo)本使用109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑與靜脈血的比例為1∶9；加入靜脈血1.8 mL，立即混勻送檢，1 h內(nèi)離心(3 000 r/min離心10 min)分離血漿測定。

1.3.1P-QCM凝血檢測 以Parylene-C修飾QCM芯片作為PT檢測芯片，在芯片上滴加待測的全血樣本，隨著血液的凝固所產(chǎn)生的終產(chǎn)物纖維蛋白會使得芯片上的檢測頻率發(fā)生改變，通過測定芯片的頻率變化，計算出樣本PT，并利用公式轉(zhuǎn)化為INR。

1.3.2Sysmex CS5100全自動凝血檢測 50 μL血漿樣本經(jīng)一定時間加溫后，加入PT試劑，采用波長660 nm的光照射樣本，凝血過程中血漿的混濁度可以通過測量散射光光強(qiáng)度的改變來測定，通過凝固曲線得到凝血酶原時間，計算得出INR值。

1.3.3精密度檢測 使用Sysmex CS5100和P-QCM對20次室內(nèi)質(zhì)控品檢測結(jié)果，進(jìn)行批間分析。

1.3.4比對試驗(yàn)及一致性分析 以50例樣本進(jìn)行結(jié)果比對試驗(yàn)，PT、INR的偏倚分別小于7.5%、10%。以參加原國家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評活動的Sysmex CS5100凝血分析儀作為參比儀器，P-QCM家用便攜式凝血檢測儀作為被比對儀器，進(jìn)行相關(guān)性分析。采用Bland-Altman法進(jìn)行兩種儀器的一致性分析[2-3]。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用Office EXCEL2007軟件，對檢測結(jié)果進(jìn)行比對，并繪制相應(yīng)的散點(diǎn)圖，作相關(guān)性分析和Bland-Altman分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1P-QCM凝血儀檢測精密度 采用P-QCM和Sysmex CS5100對室內(nèi)質(zhì)控品測定，計算PT、INR的變異系數(shù)(CV)。結(jié)果顯示，P-QCM的PT、INR的正常批間CV值分別為2.15%、3.77%，異常批間CV分別為4.58%、2.90%。見表1。

2.2相關(guān)性分析 P-QCM與Sysmex CS5100檢測PT、INR的相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.940和R2=0.922(P<0.05)。結(jié)果顯示，PT、INR分別有2%(1/50)、6%(3/50)的點(diǎn)在95%一致性界限以外。其中，兩種儀器PT測量結(jié)果的差值的絕對值最大為1.58 s，而這兩種儀器PT測定結(jié)果的平均值為11.71 s，這種相差幅度在臨床上可以接受。同樣，兩種儀器INR測量結(jié)果的差值的絕對值最大為0.16，而兩種儀器INR測定結(jié)果的平均值為1.15，這樣的相差幅度在臨床上也可以接受。因此，這兩種儀器測量PT、INR的結(jié)果具有較好的一致性，表明這兩種儀器在臨床檢測上可以互相替代。

圖1 PT、INR Bland-Altman分析

圖2 PT、INR比對結(jié)果

狀態(tài)指標(biāo)P-QCM凝血檢測儀均值標(biāo)準(zhǔn)差CV(%)Sysmex CS5100均值標(biāo)準(zhǔn)差CV(%)正常PT13.360.292.1512.230.151.19INR1.300.053.771.040.011.20異常PT42.781.964.5841.850.902.15INR3.800.112.901.040.092.16

2.3Bland-Altman分析 50例配對測定PT、INR結(jié)果差值均數(shù)和差值標(biāo)準(zhǔn)差分別做Bland-Altman圖，見圖1。結(jié)果顯示，兩種儀器檢測PT值的偏倚為96%(48/50)和INR值的偏倚94%(47/50)，結(jié)果在可接受范圍，比對結(jié)果均合格。見圖2。

3 討 論

PT、INR主要用于心臟瓣膜置換、血管支架及植入性手術(shù)術(shù)后抗凝藥物(如華法林)治療的監(jiān)測[4-6]，而華法林治療窗比較窄，需要定期頻繁監(jiān)測并進(jìn)行劑量調(diào)整，以維持華法林治療的有效性和安全性[7]。由于傳統(tǒng)PT、INR的檢測需要在醫(yī)院完成，受檢測流程復(fù)雜、用時長、居住條件等因素影響，難以進(jìn)行PT、INR的實(shí)時監(jiān)測。20世紀(jì)90年代歐美等發(fā)達(dá)國家開始接受并鼓勵長期服用抗凝藥物患者在家自測PI、INR，進(jìn)行自我管理，提高抗凝治療的依從性[8-9]、有效性和安全性[10-11]，有效的降低并發(fā)癥和死亡率[12]。

研究發(fā)現(xiàn)，在INR<2時，兩種儀器INR差值絕對值的最大值僅為0.16，符合國際標(biāo)準(zhǔn)化組織的要求的加減0.5范圍內(nèi)[13]，表明P-QCM檢測結(jié)果是準(zhǔn)確可信。從上述的P-QCM精密度分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，P-QCM的PT-INR批間CV均小于5%，符合凝血試驗(yàn)批間精密度的要求[14]，表明P-QCM有較好的穩(wěn)定性。

通過線性擬合，P-QCM與Sysmex CS5100檢測PT-INR的相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.940和R2=0.922，具有良好的線性相關(guān)性。Bland-Altman分析顯示，PT測量結(jié)果的差值的絕對值最大為1.58 s，而這兩種儀器PT測定結(jié)果的平均值為11.71 s，這種相差幅度在臨床上可以接受。同樣，兩種儀器INR測量結(jié)果的差值的絕對值最大為0.16，而兩種儀器INR測定結(jié)果的平均值為1.15，這樣的相差幅度在臨床上也可接受。因此兩種儀器的INR檢測結(jié)果具有一致性，P-QCM可用于PT、INR的臨床檢測。

同時，P-QCM除了本身的一些缺點(diǎn)外，也存在目前POCT凝血儀廣泛存在的問題[15]，如不能夠應(yīng)用大批量的臨床檢測、檢測結(jié)果易出現(xiàn)波動等，這就需要對設(shè)備中所用的壓電石英傳感器進(jìn)行更加合理、科學(xué)的研究，以提升其重復(fù)性、穩(wěn)定性及檢測限，這也將是后期研究的主要目的。

綜上所述，P-QCM凝血儀檢測PT、INR，符合臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量要求，可以實(shí)現(xiàn)患者抗凝治療的自我監(jiān)測及自我管理，提高患者服藥的依從性，保障患者用藥的安全性，具有較好的應(yīng)用價值和市場前景。