沈妙娜，陳海雷，劉 勇

(中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院兒科，廣州 510120)

珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血，以下簡稱“地貧”)是一種由于基因缺失或突變導(dǎo)致珠蛋白合成障礙導(dǎo)致的遺傳性溶血疾病，根據(jù)編碼α及β肽鏈的基因缺失或突變情況，地貧主要分為α-地貧及β-地貧，未檢出地貧基因攜帶視為健康新生兒[1-2]。重型α-地貧一般在妊娠后期發(fā)生胎兒水腫，胎死宮內(nèi)或在出生后48 h內(nèi)死亡；中重型β-地貧和部分中間型α-地貧在出生后3～6個月出現(xiàn)貧血癥狀，并進(jìn)行性加重[3-4]。輕型地貧與缺鐵性貧血相似，少數(shù)輕型地貧患者可伴缺鐵性貧血，貧血影響兒童生長發(fā)育[5-7]。對新生兒進(jìn)行地貧篩查，可及早發(fā)現(xiàn)中重型地貧。本研究旨在探討新生兒臍帶血與出生后1～3 d外周血血紅蛋白(Hb)組分與表達(dá)量對地貧的篩查準(zhǔn)確性,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年1月至2017年6月在本院出生，并進(jìn)行地貧攜帶基因篩查的新生兒220例為研究對象，其中男89例，女131例。

1.2儀器與試劑 主要儀器有法國Sebia公司Capillarys2全自動毛細(xì)管電泳儀與Hb分析檢測試劑盒及質(zhì)控品。DNA提取與檢測試劑盒由深圳亞能生物有限公司提供。

1.3方法 應(yīng)用全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)分析新生兒臍帶血或外周血Hb組分。

1.3.1標(biāo)本類型 選取胎齡大于37周新生兒，臍帶血為新生兒出生時臍帶殘留靜脈血，外周血為新生兒出生1～3 d采集的靜脈血。

1.3.2Hb毛細(xì)管電泳分析 檢測臍帶血與外周血Hb組分，包括HbA、HbF及異常條帶。

1.3.3地貧基因檢測 α-地貧基因檢測：東南亞缺失(--SEA/αα)、3.7及4.2缺失(-α3.7/αα、-α4.2/αα)；3種非缺失點突變：-αCS/αα、-αQS/αα和-αWS/αα。β-地貧基因檢測：βCD41-42/βN(-TTCT)、βIVS-Ⅱ-654/βN(C>T)、β-28/βN(A>G)、βCD71-72/βN(+A)、βCD17/βN(A>T)、βCD26/βN(G>A)、βCD31/βN(-C)、βCD27-28/βN(+C)、βIVS-Ⅰ-1/βN(G>T)、βCD43/βN(G>T)、β-32/βN(C>A)、β-29/βN(A>G)、β-30/βN(T>C)、βCD14-15/βN(+G)、Cap+40-43(-AAAC)、起始密碼子突變Initiation condon(T>G)和βIVS-Ⅰ-5/βN(G>C)。

2 結(jié) 果

2.1新生兒地貧基因與Hb電泳結(jié)果 220例新生兒地貧基因診斷結(jié)果中，地貧基因攜帶者以靜止型α-地貧16例、輕型α-地貧56例與輕型β-地貧34例為主；中間型α-地貧5例；輕型α-地貧復(fù)合β-地貧1例，其HbF水平為83.10%，HbA水平為15.50%，Hb Bart′s水平為1.10%。未檢出β-地貧雙重雜合子或純合子，各種基因類型Hb電泳結(jié)果見表1。地貧基因檢測結(jié)果見表2。

表1 Hb分析結(jié)果

注:與健康新生兒比較，*P<0.05；-為檢測結(jié)果為陰性

表2 地貧基因檢測結(jié)果

2.2新生兒外周血與臍帶血Hb結(jié)果比對 220例研究對象中，外周血組74例，臍帶血組146例。兩組在健康新生兒、輕型α-地貧與輕型β-地貧HbF、HbA百分比重疊，結(jié)果一致。

2.3ROC曲線分析 通過ROC曲線分析，HbF篩查輕型β-地貧曲線下面積達(dá)到0.958，截斷值為86.65%，靈敏度為94.12%(32/34)，特異度為84.26%(91/108)。

3 討 論

人體不同發(fā)育時期珠蛋白生成存在著一定的變化規(guī)律。妊娠5周，α珠蛋白基因、γ珠蛋白基因開始在肝臟表達(dá)，胎兒血中開始出現(xiàn)HbF，妊娠10周，β珠蛋白基因開始表達(dá)，血中出現(xiàn)HbA，而此時α珠蛋白基因、γ珠蛋白基因表達(dá)達(dá)到高峰，HbF成為主要Hb。之后α珠蛋白基因持續(xù)高表達(dá)，δ珠蛋白開啟并維持比較低的表達(dá)水平，血中出現(xiàn)HbA2，γ珠蛋白基因在出生前后關(guān)閉，HbF迅速減少，至6個月后不超過5%[8]。

α珠蛋白基因在胚胎12周后持續(xù)高表達(dá)，β珠蛋白基因在胎兒36周后才逐漸表達(dá)增加[9]。Hb合成受珠蛋白基因調(diào)控。本研究結(jié)果顯示，健康新生兒與輕型α-地貧、輕型β-地貧HbF、HbA水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明新生兒，甚至胚胎時期，輕型α-地貧、輕型β-地貧導(dǎo)致珠蛋白基因表達(dá)減少影響了Hb合成，Hb的表達(dá)量變化可以用于篩查地中海貧血。

本研究結(jié)果顯示，輕型β-地貧HbF值高于健康新生兒，HbA低于健康新生兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時，本研究采用ROC曲線分析并計算曲線下面積，評價臍血或外周血Hb 電泳對β-地貧診斷的準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示，HbF截斷值為86.65%，靈敏度為94.12%(32/34)，特異度為84.26%(91/108)，曲線下面積達(dá)到0.958，與相關(guān)研究比較，HbA截斷值為13.00%，靈敏度稍低，特異度高，總體AUC高[10]。但該研究未指出新生兒胎齡，可能存在胎齡對Hb影響。

由于α珠蛋白鏈既合成HbF，又合成HbA，當(dāng)α珠蛋白鏈合成減少時，機體優(yōu)先合成攜氧功能的HbA，因此本研究結(jié)果出現(xiàn)輕型α-地貧HbA百分比值甚至高于健康新生兒，靜止型與中間型α-地貧HbA水平也高于健康新生兒。說明HbA、HbF對α-地貧不是合適的篩查指標(biāo)。

Hb Bart′s是α-地貧代償機制中產(chǎn)生的異常Hb。體內(nèi)合成Hb Bart′s(γ4)對氧的親和力極高，即使在低氧的組織中也不能釋放氧，因此Hb Bart′s胎兒水腫綜合征造成胎兒宮內(nèi)嚴(yán)重缺氧，全身組織器官水腫，最終致死[11-12]。本研究中輕型α-地貧外周血18例，臍血38例均可檢出Hb Bart′s，均值都在2.80%。5例α-地貧中間型Hb Bart′s均大于20.00%。把電泳出現(xiàn)Hb Bart′s條帶作為新生兒輕中型α-地貧篩查指標(biāo)，其靈敏度為100.00%(61/61)，特異度為100.00%(108/108)。而16例靜止型α-地貧僅2例出現(xiàn)Hb Bart′s，用Hb Bart′s條帶篩查α-地貧主要漏檢靜止型α-地貧，與其他年齡段篩查存在同樣缺陷[13]。比較成人α-地貧篩查，新生兒出生時進(jìn)行α-地貧具有最高的特異度。

綜上所述，新生兒出生時的臍帶血或出生1～3 d的靜脈血進(jìn)行毛細(xì)管Hb電泳對于篩查地貧意義重大。篩查輕型β地貧選HbF 86.65%作為截斷值，篩查α-地貧選擇Hb Bart′s條帶，一旦電泳出現(xiàn)Hb Bart′s條帶，考慮α-地貧特異度為100.00%。由于新生兒Hb處于變化的動態(tài)過程中，新生兒胎齡對Hb影響大，本文中選取大于胎齡37周新生兒，對于胎齡小于37周Hb情況需進(jìn)一步研究。