劉善利

摘要 目的：探討甲狀旁腺激素PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移瘤生長的影響。方法：選取36只4～5周齡BALB/C小鼠，隨機(jī)分為正常對照組（12只）、模型組（12只）和實驗組（12只），構(gòu)建小鼠乳腺癌模型，分別給予生理鹽水腹腔注射與PTH（1—34）腹腔注射。結(jié)果：實驗組與模型組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗組小鼠BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組（P<0.05）；實驗組P、BSP、β-CTX等血清生化標(biāo)志物與正常對照組、模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于正常對照組（P<0.05）。結(jié)論：血清生化指標(biāo)能夠輔助診斷骨轉(zhuǎn)移瘤，PTH（1—34）能夠增加骨轉(zhuǎn)移率，加快腫瘤的生長，可為臨床PTH（1—34）抗體的研發(fā)提供參考。

關(guān)鍵詞 甲狀旁腺激素；骨轉(zhuǎn)移瘤；血清生化標(biāo)志物；腫瘤生長

作為臨床中常見的促骨形成藥物，甲狀旁腺激素PTH（1-34）在臨床中有著廣泛的應(yīng)用。

臨床研究表明，小劑量PTH（1-34]的間斷注射能夠增加骨密度，促進(jìn)骨微結(jié)構(gòu)的改善，對于骨質(zhì)疏松癥治療有顯著的療效。而高劑量PTH（1-34）則會對大鼠骨肉瘤起到誘發(fā)作用，加快骨轉(zhuǎn)換。

目前臨床中對于PTH（1-34）在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制尚未達(dá)成一致，為探究甲狀旁腺激素PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移瘤生長的影響，本研究選取36只小鼠建立骨轉(zhuǎn)移模型，并對研究結(jié)果做出相應(yīng)總結(jié)。

資料與方法

實驗動物：BALB/C健康小鼠，36只，購自上海加科生物科技有限公司，均為雌性，鼠齡4～6周，平均體重（16.4±2.4）g。實驗前1周于塑料鼠盒內(nèi)對小鼠進(jìn)行喂養(yǎng)，將其置于層流架上，確保室內(nèi)通風(fēng)，室溫保持23℃左右，并給予12h光照交替。

小鼠不限制飲食，自來水及飼料均保持自由攝入，喂養(yǎng)1周后實施分組飼養(yǎng)。

實驗方法：在預(yù)實驗中采用腫瘤細(xì)胞懸濁液注射法及腫瘤組織懸濁液注射法建立小鼠乳腺癌模型，于每組中抽取1只，對腫瘤塊進(jìn)行剝離并制作病理切片，確定為乳腺癌，為荷瘤鼠造模方式的選擇提供參考。將36只BALB/C小鼠分為正常對照組（12只）、模型組（12只）和實驗組（12只），于小鼠前肢腋下皮下給予乳腺癌組織塊懸濁液注射，建立小鼠乳腺癌模型，1周后選取腫瘤長徑>4mm的小鼠作為造模成功鼠，每組均為12只。

造模成功后，給予模型組小鼠生理鹽水腹腔注射，實驗組則給予400μg/kgPTH（1-34）腹腔注射。

觀察指標(biāo)：實驗期間，對3組小鼠的體重、腫瘤生長情況、血清生化指標(biāo)水平等進(jìn)行定期測定。

小鼠處死前，給予全身骨X線掃描，對骨破壞情況進(jìn)行觀察，明確病變部位，采用DEXA法對小鼠的全身BMD進(jìn)行測定，剝離腫瘤，測定腫瘤的重量與大小，將病變脛骨制備成脫鈣骨石蠟切片，給予HE染色和病理學(xué)觀察。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用X²檢驗；計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

實驗組與模型組骨轉(zhuǎn)移破壞情況比較：模型組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率為8.3%，實驗組為41.7%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3組小鼠BMD、股骨灰干重比比較：實驗組小鼠的BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。模型組BMD、股骨灰干重低于正常對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3組小鼠血清生化標(biāo)志物比較：3組小鼠血清Ca水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。實驗組的P、BSP、B-CTX等血清生化標(biāo)志物與正常組、模型組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。模型組血清P、BSP均高于正常對照組，ALP、BGP低于正常對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

實驗組與模型組小鼠腫瘤質(zhì)量與體積比較：實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表4。

討論

臨床研究表明，惡性腫瘤對骨破壞的作用機(jī)制主要包括兩個方面，首先為轉(zhuǎn)移局部以旁惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至骨細(xì)胞因子的產(chǎn)生，其能夠促進(jìn)破骨細(xì)胞骨溶解；其次無骨轉(zhuǎn)移條件下惡性腫瘤分泌的PTH（1-34）體液因子在腫瘤轉(zhuǎn)移及骨破壞中的參與作用。

學(xué)者研究表明，PTH（1-34）與乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多種腫瘤疾病有著密切的相關(guān)性，PTH（1-34）的過度表達(dá)，會誘發(fā)破骨細(xì)胞的成熟與分化，增加骨轉(zhuǎn)移破壞。

此次研究中實驗組小鼠骨轉(zhuǎn)移破壞率明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示PTH（1-34）對骨轉(zhuǎn)移破壞的促進(jìn)作用。

目前，臨床中將骨轉(zhuǎn)化生化指標(biāo)作為藥物療效的重要表現(xiàn)，以便為臨床治療提供參考。Ca、BGP、BSP能夠?qū)俏諣顟B(tài)進(jìn)行不同程度的反應(yīng)，能夠?qū)Τ晒羌?xì)胞活性予以反應(yīng)，成為病情檢測的重要指標(biāo)。

研究中3組小鼠Ca水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這很大程度上是由于復(fù)雜的內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用。而實驗組P、β-CTX、BSP指標(biāo)均顯著高于正常對照組與模型組。說明，實驗組存在腫瘤骨轉(zhuǎn)移，且伴隨溶骨性骨吸收。而模型組BSP指標(biāo)有升高趨勢，但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），說明其腫瘤存在潛在的骨轉(zhuǎn)移，但進(jìn)程相對緩慢。

另外，實驗組小鼠ALP、BGP指標(biāo)的下降也能夠反映出PTH（1-34）在破骨細(xì)胞活性的作用。

研究表明，骨密度能夠反映出骨質(zhì)疏松程度，BMD指標(biāo)與骨折發(fā)生率呈現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。

此次研究中實驗組小鼠的BMD及股骨灰干重比顯著低于正常對照組與模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示在PTH（1-34）作用下，骨量會明顯減少，骨組織對外力的抵抗能力降低。實驗組小鼠腫瘤質(zhì)量及體積均高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明PTH（1-341對腫瘤生長有著直接的促進(jìn)作用。

綜上所述，PTH（1-34）是骨轉(zhuǎn)移率升高的直接促進(jìn)因素，其能夠加快腫瘤生長，可為進(jìn)一步研發(fā)抵抗PTH（1-34）藥物提供參考。