陳 晶 李 斌 喬 璐 張潔娟 王 愚 王紫赟

(包頭醫(yī)學(xué)院,1 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院,2 2014級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科3班,3 2016級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科1班,包頭 014040)

靜脈是心血管系統(tǒng)中引導(dǎo)、輸送血液返回心的管道,人的中靜脈管徑1～10mm。靜脈管壁薄,平滑肌和彈力纖維均較少,缺乏收縮性和彈性。在臨床上以靜脈動(dòng)脈化手術(shù)方式解決斷指(肢)再植和治療肢體缺血癥等方面的應(yīng)用與研究已開展多年[1],因此對(duì)靜脈血管結(jié)構(gòu)研究具有重要意義。中靜脈組織結(jié)構(gòu)在不同種屬間是否存在差異,相關(guān)研究較少。本研究比較了人、羊、兔、大鼠、小鼠的中靜脈的血管管壁結(jié)構(gòu),并比較了各種動(dòng)物的中靜脈與中動(dòng)脈的管壁結(jié)構(gòu)。

1 材料和方法

1.1 取材

取各10只清潔級(jí)大鼠、小鼠、家兔雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈,取2只羊單側(cè)腎動(dòng)、靜脈,取2具人尸體標(biāo)本旋髂淺靜脈。

1.2 固定與包埋

將取到的標(biāo)本迅速固定于10%甲醛溶液中,石蠟包埋。

1.3 染色

切片厚度6μm,一部分切片行H-E染色,一部分切片行地衣紅染色,一部分切片行彈性纖維混合染色。

1.4 H-E染色

染色流程：二甲苯20min 2次,無水乙醇5min 2次,95%乙醇5min,80%乙醇5min,70%乙醇5min,自來水洗,蘇木精4min,自來水洗,1%鹽酸乙醇分化,自來水洗,伊紅15min,70%乙醇1s,80%乙醇1s,95%乙醇2min,95%乙醇5min,無水乙醇5min 2次,二甲苯10min 2次。

1.5 地衣紅染色[2-4]

地衣紅染液的配制：將1g地衣紅溶于99ml 70%乙醇中,然后緩緩加入1ml濃鹽酸,調(diào)pH至1.1,配制后室溫靜置6h后濾過使用。

染色流程：二甲苯20min 2次,無水乙醇5min 2次,95%乙醇5min,80%乙醇5min,70%乙醇5min,自來水洗,地衣紅2h,70%乙醇1s,80%乙醇1s,95%乙醇2min,95%乙醇5min,無水乙醇5min 2次,二甲苯10min 2次。

1.6 彈性膜復(fù)合染色

采用焦油紫、偶氮桃紅、苯胺藍(lán)等進(jìn)行復(fù)合染色顯示彈性膜、平滑肌、膠原纖維和基質(zhì)的方法[5]。1%偶氮桃紅染液的配置：2g偶氮桃紅加甲醇100ml溶解,加冰乙酸10ml,用時(shí)取上清液。0.1%焦油紫溶液的配置：0.1g焦油紫溶于100ml蒸餾水,用時(shí)加10%冰乙酸17滴。1%水溶性苯胺藍(lán)液的配置：1g水溶性苯胺藍(lán)溶于1%磷鎢酸100ml水溶液中。染色流程：二甲苯20min 2次,無水乙醇5min 2次,95%乙醇5min,80%乙醇5min,70%乙醇5min,自來水洗,蒸餾水洗2次,0.5%過碘酸溶液15min,蒸餾水洗2min,0.1%焦油紫溶液20min 60℃,蒸餾水洗,95%乙醇分色,1%偶氮桃紅4min,70%乙醇分色,1%苯胺藍(lán)溶液2min,70%乙醇1s,80%乙醇1s,95%乙醇2min,95%乙醇5min,無水乙醇5min 2次,二甲苯10min 2次。

2 結(jié)果

羊、兔、大鼠、小鼠與人的中動(dòng)脈管壁都分為內(nèi)膜、中膜、外膜3層，其中內(nèi)、外彈性膜明顯。中靜脈管壁分為內(nèi)膜、中膜、外膜，其中外膜厚，羊的中靜脈外膜中有縱行的平滑肌束，這在人的中靜脈外膜中亦可見。

圖1 中動(dòng)脈和中靜脈H-E染色。A1：兔中靜脈,×400；A2：兔中動(dòng)脈,×400；B1：羊中靜脈,×100；B2：羊中動(dòng)脈,×100；C1：人中靜脈,×200.

圖2 中動(dòng)脈和中靜脈地衣紅染色。A1：兔中靜脈,×400：A2：兔中動(dòng)脈,×400；B1：羊中靜脈,×100；B2：羊中動(dòng)脈,×100；C1：人中靜脈,×200；D1：小鼠中靜脈,×400；D2：小鼠中動(dòng)脈,×400；E1：大鼠中動(dòng)脈、中靜脈,×200；E2：大鼠中動(dòng)脈、中靜脈,×400.

圖3 中動(dòng)脈和中靜脈彈性膜復(fù)合染色。A1：兔中靜脈,×400；A2：兔中動(dòng)脈,×400；A3：兔中靜脈,×1 000；A4：兔中動(dòng)脈,×1 000；B1：羊中靜脈,×200；B2：羊中動(dòng)脈,×100.

Fig 1 Medium-sized artery and medium-sized vein by H-E staining.A1：Medium-sized vein of rabbit,×400；A2：Medium-sized artery of rabbit,×400；B1：Medium-sized vein of sheep,×100；B2：Medium-sized artery of sheep,×100；C1：Medium-sized vein of human,×200.

Fig 2 Medium-sized artery and medium-sized vein by orcein staining.A1：Medium-sized vein of rabbit,×400；A2：Medium-sized artery of rabbit,×400；B1：Medium-sized vein of sheep,×100；B2：Medium-sized artery of sheep,×100；C1：Medium-sized vein of human,×200；D1：Medium-sized vein of mouse,×400；D2：Medium-sized artery of mouse,×400；E1：Medium-sized artery and medium-sized vein of rat,×200；E2：Medium-sized artery and medium-sized vein of rat,×400.

Fig 3 Medium-sized artery and medium-sized vein by elastic composite staining.A1：Medium-sized vein of rabbit,×400； A2：Medium-sized artery of rabbit,×400；A3：Medium-sized vein of rabbit,×1 000；A4：Medium-sized artery of rabbit,×1 000；B1：Medium-sized artery of sheep,×200；B2：Medium-sized artery of sheep,×100.

H-E染色顯示(圖1，見封三)，兔的中靜脈靠近內(nèi)膜處可見一層染為粉紅色、呈波浪狀的結(jié)構(gòu)(圖1A1箭頭所示)，這層結(jié)構(gòu)類似中動(dòng)脈內(nèi)彈性膜(圖1 B2所示)；在兔中靜脈中膜與外膜交界處有多層波浪狀、斷斷續(xù)續(xù)染為粉紅色的結(jié)構(gòu)(圖1A1▲所示)，類似中動(dòng)脈的外彈性膜的結(jié)構(gòu)(圖1A2所示)。

地衣紅是一種弱酸性染色劑，在酸性溶液中呈深橙紅色，且地衣紅易溶于乙醇，參照范軍等[3-4]的方法，采用酸化的地衣紅乙醇溶液進(jìn)行染色，顯示彈性膜。結(jié)果顯示(圖2，見封三)，地衣紅染色顯示在兔腎靜脈中靠近內(nèi)膜處可見染為棕色一層波浪狀的類似內(nèi)彈性膜的結(jié)構(gòu)(圖2A1箭頭所示)，在中膜與外膜交界處有多層斷斷續(xù)續(xù)、波浪狀的染為棕色的類似外彈性膜的結(jié)構(gòu)(圖2A1▲所示)，并且這種結(jié)構(gòu)不如中動(dòng)脈中內(nèi)、外彈性膜發(fā)達(dá)；而在人、羊、大鼠、小鼠的中靜脈中均無此結(jié)構(gòu)。

彈性膜復(fù)合染色可將平滑肌染為紅色、膠原纖維染為紫紅色、基質(zhì)呈藍(lán)色，內(nèi)、外彈性膜呈波浪狀無色透明(圖3，見封三)。其中中動(dòng)脈的內(nèi)彈性膜如圖3A4所示，外彈性膜如圖3A4、B2所示，呈無色透明波浪狀，在兔的中靜脈中亦可見此類似結(jié)構(gòu)，如圖3A1、A3所示(箭頭處表示類似內(nèi)彈性膜結(jié)構(gòu)，▲表示類似外彈性膜結(jié)構(gòu))，而在人、羊、大鼠、小鼠的中靜脈中均無此結(jié)構(gòu)。

3 討論

本研究利用H-E染色、地衣紅染色和彈性膜復(fù)合染色法對(duì)幾種動(dòng)物和人的血管組織切片進(jìn)行染色。結(jié)果顯示,兔血管中靜脈組織結(jié)構(gòu)與人、大鼠、小鼠、羊有差異,有類似中動(dòng)脈內(nèi)、外彈性膜結(jié)構(gòu)。國內(nèi)外尚未見到相關(guān)報(bào)道。

彈性膜由彈性蛋白組成,在血管橫切面上,因血管管壁收縮,彈性膜呈波浪狀。人的中動(dòng)脈有明顯的內(nèi)彈性膜,1～2層,為內(nèi)膜與中膜的分界;較大的中動(dòng)脈在中膜和外膜交界處有外彈性膜,為多層,呈斷斷續(xù)續(xù)。人的中靜脈無內(nèi)、外彈性膜,外膜較中膜厚,由結(jié)締組織構(gòu)成,可含縱行平滑肌纖維束。動(dòng)物血管結(jié)構(gòu)與人血管結(jié)構(gòu)相似,本研究對(duì)小鼠、大鼠、兔、羊的中動(dòng)脈和中靜脈進(jìn)行石蠟切片,其管壁均分為內(nèi)膜、中膜、外膜3層,在中動(dòng)脈管壁中都存在明顯的內(nèi)、外彈性膜。但對(duì)靜脈的研究顯示,兔的中靜脈管壁結(jié)構(gòu)略有不同,經(jīng)過H-E染色、地衣紅染色和彈性膜復(fù)合染色,均可見在內(nèi)膜處有1層波浪狀的類似彈性膜的結(jié)構(gòu),在中膜、外膜交界處可見呈多層斷斷續(xù)續(xù)、波浪狀的類似外彈性膜的結(jié)構(gòu)。

王媛媛等[6]對(duì)獼猴、小鼠、大鼠、日本大耳白兔、比格犬、樹鼩6種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,顯示6種動(dòng)物大動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)無明顯差異,但中膜厚度與膠原纖維、彈性纖維含量有差異。李文春等[7]對(duì)人臍靜脈研究表明臍靜脈存在內(nèi)彈性膜,且呈疊扇狀,這與本研究結(jié)果有相似之處,但并未見臍靜脈有類似外彈性膜結(jié)構(gòu)。本研究所用人體標(biāo)本為尸體標(biāo)本中靜脈,未見到類似彈性膜的結(jié)構(gòu)。本研究顯示家兔腎靜脈存在類似內(nèi)彈性膜、外彈性膜結(jié)構(gòu)。家兔的中靜脈血管壁上為何存在這種這樣的結(jié)構(gòu)？在家兔其他中靜脈管壁中是否也有類似的結(jié)構(gòu)？這些結(jié)構(gòu)又與何種功能有關(guān)？這些問題還需進(jìn)一步研究。