李志滿，李珊珊，陳麗雪，2，祁玉麗，2，孫印石，2※

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所，長春 130112；2.吉林農(nóng)業(yè)大學中藥材學院，長春 130118）

猴頭菇（Hericium erinaceus）隸屬猴頭菌科猴頭菌屬。據(jù)本草綱目記載，其性平、味甘，具有利五臟、助消化的功能，是一種營養(yǎng)豐富的藥、食同源菌類，具有極高的醫(yī)療和保健價值。近年來研究證明，其活性成分具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖、增強機體免疫力等多種保健和養(yǎng)生功能[1，2]。本實驗以猴頭菇為主要原料，輔以黃芪、山楂、黨參進行活性成分提取和制粒，最終獲得猴頭養(yǎng)胃顆粒。采用大鼠急性胃粘膜損傷實驗模型，觀察猴頭養(yǎng)胃顆粒對胃粘膜保護作用的效果，為猴頭養(yǎng)胃顆粒產(chǎn)品的研發(fā)奠定基礎。

1 材料與儀器

1.1 試劑

猴頭養(yǎng)胃顆粒（中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所產(chǎn)品加工實驗室自制）；無水乙醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甲醛、二甲苯（北京化工廠）；蘇木素溶液、伊紅溶液（Sigma-Aldrich公司）；石蠟（徠卡儀器有限公司）；中性樹膠（上海華靈康復器械廠）。

1.2 實驗動物

清潔級 SD健康雄性大鼠 48只，體重為180g～200g，購于遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，生產(chǎn)許可證SCXK（遼）2015-0001，合格編號211002300023526。實驗動物在溫度 20°C～25°C、相對濕度為40%～70%的環(huán)境中飼養(yǎng)，自由進食、飲水。

1.3 儀器

IX53光學顯微鏡（奧林巴斯有限公司）；Epoch2酶標儀（美國博騰儀器有限公司）；EG115生物組織包埋機、EG1150C冷動機、RM2255切片機、HI1220病理組織漂烘儀（徠卡儀器有限公司）；電子數(shù)顯卡尺605（哈爾濱量具刃具集團有限責任公司）；Heraeus Megafuge 8R高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技有限公司）；MS204S電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；DHG-9123A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；CPA225D電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；WP-UP-WF-40微量分析型超純水機（四川沃特爾水處理設備有限公司）。

2 實驗方法

2.1 急性胃黏膜損傷模型

參照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2012版）[3]中對胃粘膜損傷有輔助保護功能的檢驗方法。將清潔級SD健康雄性大鼠隨機分為正常組，模型組，猴頭養(yǎng)胃顆粒 500mg/kg、800mg/kg、1 600mg/kg 3 個組（分別相當于受試樣品人體推薦量的3倍、5倍、10倍），每組8只。每天按10mL/（kg·bw）灌胃1次，連續(xù)30d，正常組和模型組每天給予等量的生理鹽水。末次灌胃后，嚴格禁食不禁水24h，除正常組外，所有大鼠給予無水乙醇1.0mL/只，1h后處死大鼠。

2.2 檢測指標的測定

暴露大鼠完整胃，結(jié)扎幽門，灌注10%中性福爾馬林溶液10mL，固定20min，沿胃大彎剪開，用生理鹽水沖去內(nèi)容物，展開胃粘膜，記錄出血點，用游標卡尺測量出血帶的長度和寬度。因?qū)挾却頁p傷的程度較長度大，故雙倍積分，并計算實驗組胃粘膜損傷積分指數(shù)和損傷抑制率。

損傷積分指數(shù)=組損傷評分總和/組動物數(shù)量；

損傷抑制率=（模型組損傷積分-給藥組損傷積分）/模型組損傷積分 100%

表1 急性酒精損傷肉眼觀察評分標準Table1 Acute alcohol injury visual criteria

2.3 病理組織學觀察

選取胃粘膜損傷最嚴重的部位，經(jīng)10%中性福爾馬林固定、脫水、透明，常規(guī)石蠟包埋厚度連續(xù)切片，經(jīng)H & E染色后，鏡下觀察大鼠胃組織病理學變化。

2.4 統(tǒng)計學處理

3 實驗結(jié)果

3.1 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠體重的影響

在急性胃粘膜損傷模型中，給予不同濃度的猴頭養(yǎng)胃顆粒30d后，各劑量組大鼠的體重增長良好，呈持續(xù)增長狀態(tài)，但各時期的體重與正常組相比無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠體重的影響Table 2 Effect of Houtou Yangwei Granules on rat body weight ()

表2 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠體重的影響Table 2 Effect of Houtou Yangwei Granules on rat body weight ()

組別 劑量（mg/kg） 初始體重（g）15d 后體重（g）30d后體重（g）SetDoseBody weightBody weightBody weight正常組 Normal group 0 184.35±3.65 273.75±11.95 343.65±17.85模型組 Model group 0 187.07±4.69 275.70±10.10 348.55±12.95低劑量組 Low-dose group 500 185.82±3.44 271.11±6.75 339.80±14.42中劑量組 Middle-dose group 800 186.28±2.81 281.04±9.01 357.70±14.94高劑量組 High-dose group 1 600 184.66±10.15 274.75±15.55 345.35±18.45

3.2 猴頭養(yǎng)胃顆粒對急性胃粘膜損傷中胃重量的影響

經(jīng)無水乙醇刺激胃粘膜后，模型組大鼠胃組織明顯水腫，胃重量較正常組呈明顯增加趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），說明造模成功（表3）。不同濃度的猴頭養(yǎng)胃顆粒劑量組，在給予急性乙醇灌胃后，腫脹程度明顯減輕，胃組織重量較模型組明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，P＜0.001）。見表3。

表3 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠胃部重量的影響Table3 Effect of Houtou Yangwei Granules on the weight of rat's stomach ()

表3 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠胃部重量的影響Table3 Effect of Houtou Yangwei Granules on the weight of rat's stomach ()

注：與正常組比較，###.P＜0.001；與模型組比較，**.P＜0.01，***.P＜0.001。下表同。Note：Compare with the normal group，###.P ＜ 0.001；Compare with the model group，**.P ＜ 0.01，***.P ＜ 0.001.The same below.

組別 劑量（mg/kg） 胃重量（g）SetDoseStomach weight正常組 Normal group 0 1.80模型組 Model group 0 2.61###低劑量組 Low-dose group 500 2.14**中劑量組 Middle-dose group 800 2.11**高劑量組 High-dose group 1 600 2.06***

3.3 猴頭養(yǎng)胃顆粒對乙醇誘導的胃粘膜損傷的病理形態(tài)學的影響

正常組大鼠胃粘膜腺體排列整齊、均勻、致密；模型組大鼠胃粘膜損傷非常明顯，粘膜表面呈現(xiàn)多條條索狀出血面；不同濃度的給藥組大鼠粘膜損傷較輕，猴頭養(yǎng)胃顆粒能夠明顯減輕乙醇對胃粘膜的損傷，出血程度較輕，高劑量時只出現(xiàn)充血而無出血帶。結(jié)果見圖1。

圖1 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠胃粘膜病理學的影響Fig1 Effect of Houtou Yangwei Granules on pathology of gastric mucosa in rats

3.4 猴頭養(yǎng)胃顆粒對急性胃粘膜損傷的保護作用

模型組大鼠胃粘膜各觀察指標中出血帶數(shù)、出血帶面積和出血帶發(fā)生率均高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（###P＜0.001），表明造模成功。低劑量、中劑量、高劑量實驗組的出血帶數(shù)、出血帶面積和出血發(fā)生率較模型組明顯降低，有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），出血抑制率分別為19.42%、37.41%、61.87%，表明猴頭養(yǎng)胃顆粒對急性胃粘膜損傷有明顯的保護作用。結(jié)果見表 4。

表4 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠胃粘膜損傷指數(shù)和抑制率的影響Table 4 Effect of Houtou Yangwei Granules onrat gastric mucosal lesion indexand inhibition rate()

表4 猴頭養(yǎng)胃顆粒對大鼠胃粘膜損傷指數(shù)和抑制率的影響Table 4 Effect of Houtou Yangwei Granules onrat gastric mucosal lesion indexand inhibition rate()

組別 劑量（mg/kg） 損傷指數(shù) 損傷抑制率（%）SetDoseLesion indexLesion inhibition rate正常組 Normal group 0 0 0模型組 Model group 0 139### 0低劑量組 Low-dose group 500 112*** 19.42中劑量組 Middle-dose group 800 87*** 37.41高劑量組 High-dose group 1 600 53*** 61.87

3.5 大鼠胃粘膜組織H & E染色的病理學觀察

正常組大鼠胃組織細胞排列緊密、有序，細胞結(jié)構(gòu)清晰，腺體完整，未見明顯異常；模型組大鼠胃粘膜上皮細胞脫落、壞死，腺體排列紊亂，腺體擴張，粘膜下層水腫，炎性細胞浸潤；各劑量猴頭養(yǎng)胃顆粒組僅見少量上皮細胞脫落，損傷情況均輕于模型組，其中高劑量組效果最佳。見圖2。

4 討論

胃粘膜損傷可能由多種原因引起，如藥物、酗酒、細菌感染、情緒變化等。近年來，隨著人們生活水平的提高，嗜酒人群日益增多，誘發(fā)的組織器官損害引起了廣泛關注。選用急性胃粘膜損傷模型研究藥物對胃粘膜的保護作用是評價胃粘膜自身防御機制對外來刺激的應激能力和對抗強度的主要內(nèi)容。乙醇對胃粘膜具有很強的腐蝕性，能使表面粘膜層和粘液細胞受損，導致胃粘膜正常代謝的生理環(huán)境遭受破壞。乙醇進入胃后，經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化為乙醛，其與胃蛋白結(jié)合破壞胃粘膜結(jié)構(gòu)，使中性粒細胞浸潤于胃粘膜，并釋放髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）、氧自由基、活性氧化代謝產(chǎn)物、蛋白酶，并粘附于血管內(nèi)皮導致粘膜損傷[4]。高濃度的乙醇可以破壞胃黏膜屏障的結(jié)構(gòu)，導致粘膜充血、糜爛、上皮細胞壞死、脫落。由于乙醇具有脂溶性，過量飲用易造成不良后果，如胃炎、胃出血、胃潰瘍等胃粘膜損傷類疾病[5～7]。乙醇致大鼠胃粘膜損傷模型已作為探討胃粘膜損傷病理生理機制的一種普遍的動物實驗模型[8～11]。

現(xiàn)已有研究表明，猴頭菇多糖對大鼠急性、慢性潰瘍有明顯的抑制作用，對乙醇和消炎痛所致胃粘膜損傷亦有保護作用[12]。猴頭菌片通過升高氨基己糖含量起到保護胃粘膜損傷的作用[13]。猴頭菌多糖對無水乙醇誘導的胃潰瘍具有很好的抑制作用[14]。本實驗以不同劑量猴頭養(yǎng)胃顆粒連續(xù)灌胃雄性 SD大鼠30d后，觀察用無水乙醇誘導的急性胃粘膜損傷的預防作用。實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠胃的總重量明顯升高、出血點增加、胃粘膜損傷指數(shù)升高；病理切片觀察，可見明顯的胃粘膜上皮細胞脫落、壞死，腺體排列紊亂，腺體擴張，粘膜下層水腫，炎性細胞浸潤。與模型組相比，猴頭養(yǎng)胃顆粒低劑量、中劑量、高劑量組大鼠胃組織腫脹均有不同程度地減輕，出血抑制率升高，且病理結(jié)果顯示，大鼠胃粘膜病變程度也明顯得到改善。綜上述結(jié)果說明，猴頭養(yǎng)胃顆粒對胃粘膜損傷確實具有輔助保護作用，猴頭養(yǎng)胃顆粒的研制可作為開發(fā)胃粘膜保護作用的功能食品的一個方向。