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        二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量

        2018-12-08 07:08:34李永才
        農(nóng)業(yè)科技與裝備 2018年4期
        關(guān)鍵詞:比色法色氨酸飼料

        李永才

        摘要:采用二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量。測得色氨酸的RSD為1.89%~3.23%,平均回收率為92.50%~93.40%。該方法所需儀器簡單,操作方便,靈敏度較高,測定結(jié)果準確,可用于飼料中色氨酸含量的測定。

        關(guān)鍵詞:二羥基乙酸鹽;比色法;色氨酸;飼料

        中圖分類號:S816.17 文獻標識碼:A 文章編號:1674-1161(2018)04-0043-02

        飼料中的色氨酸是動物維持生命和生長所必需的氨基酸,其含量被用作評價飼料營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標。目前主要采用氨基酸自動分析儀、高效液相色譜、離子交換層析、熒光等方法測定飼料中色氨酸的含量,但上述方法均存在儀器價格昂貴的問題,使其應(yīng)用受到一定限制。而比色法所需儀器簡單、價格便宜,便于普及推廣。

        1 材料與方法

        1.1 原理

        在濃硫酸存在下,三價鐵離子可將乙酸氧化成二羥基乙酸,二羥基乙酸又與經(jīng)木瓜蛋白酶水解后從蛋白質(zhì)中解離出來的色氨酸的吲哚環(huán)反應(yīng),生成紅紫色化合物,其顏色深淺與色氨酸的含量成正比。

        1.2 儀器

        日立U-3010紫外分光光度計:日本日立公司。

        1.3 試劑

        1.3.1 0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液(pH 7.0) 將0.1 mol/L HAC與NaAC溶液按1∶178混合。

        1.3.2 木瓜酶水解液 稱取400 mg木瓜蛋白酶,放入小研缽中,加少量0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液,充分研磨使其呈勻漿狀,轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中,用HAC—NaAC緩沖溶液沖洗研缽并倒入容量瓶中,最后用HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度。

        1.3.3 混合顯色液 將0.03%氯化鐵乙酸液與15 mol/L硫酸液于使用前1~2 h等體積混合。

        1.3.4 色氨酸標準貯備液 準確稱取20 mg DL-色氨酸(經(jīng)105 ℃恒重),加幾滴0.1 mol/L氫氧化鈉及少量水溶解后,定量轉(zhuǎn)移到200 mL容量瓶中,加水至刻度,混勻,貯于冰箱中。

        1.3.5 色氨酸標準工作液 分別吸取2.50,3.75,5.00,

        6.25,7.50,10.00 mL色氨酸標準貯備液置于25 mL容量瓶中,用pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度,配制成的標準工作液濃度分別為10,15,20,25,30,40 μg/mL。

        1.4 測定方法

        1.4.1 標準曲線繪制 分別精密吸取1 mL各濃度色氨酸標準工作液和1 mL pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液(作空白)置于試管中,向各試管中加入5 mL混合顯色液,搖勻,放入65 ℃恒溫水浴中保溫15 min,冷卻至室溫,于545 nm處測定吸收值,得回歸方程為:A=-0.001 39+0.009 45 C,r=0.999 2。

        1.4.2 樣品測定 稱取磨碎、混勻的樣品100 mg置于試管中,加入5 mL木瓜酶水解液,小心振蕩,使樣品完全浸濕又無顆粒粘于管壁,放入65 ℃恒溫箱中過夜。取出振搖,冷至室溫,離心,取1 mL上清夜,加5 mL混合顯色液,之后步驟同標準曲線繪制方法,計算得出樣品中色氨酸含量。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 樣品中色氨酸含量測定結(jié)果

        8種樣品中色氨酸含量的測定結(jié)果見表1。

        2.2 精密度試驗結(jié)果

        分別對3種樣品進行6次重復(fù)測定,考察方法的精密度,結(jié)果見表2。

        由表2可知:該方法測定色氨酸含量的RSD為1.89%~3.23%。

        2.3 回收率試驗結(jié)果

        采用加樣回收法進行回收率試驗,結(jié)果見表3。

        由表3可知:該方法平均回收率為92.50%~93.40%。

        3 結(jié)論與討論

        二羥基乙酸鹽比色法具有所需儀器簡單、操作方便、靈敏度較高、測定結(jié)果準確等特點,可用于測定飼料中色氨酸的含量。冰乙酸純度對該方法測定結(jié)果影響較大,宜用優(yōu)級純或冰乙酸加高錳酸鉀進行蒸餾;色氨酸標準貯備液可用1周,而色氨酸標準工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配;脂肪含量大于5%的樣品應(yīng)脫脂,否則測定結(jié)果偏低且不規(guī)則。

        參考文獻

        [1] 崔淑文,王淑芳,鄭云蘭,等.飼料中色氨酸測定方法研究[J].中國飼料,1993,18(3):33-35.

        [2] 李成成,尤曉蒙,付珺,等.高效液相色譜測定飼料中色氨酸含量方法的研究[J].食品工業(yè)科技,2016(9):308-310,316.

        [3] 閆麗紅.色氨酸在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].飼料博覽,2016(11):15-18.

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