劉曉華

[摘要] 目的 探討在梅毒螺旋體（TP）特異性抗體檢驗中羅氏電化學發(fā)光免疫法的應用價值。 方法 方便選取醫(yī)院2016年2月—2017年9月收治的240例高危TP特異性抗體陽性患者的臨床資料進行回顧性分析，均采用甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）、快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）和梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA）進行檢驗，并利用羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測TP特異性抗體。評價羅氏電化學發(fā)光免疫法的臨床應用價值。 結(jié)果 240例患者中經(jīng)證實共有51例TP特異性抗體陽性，陽性率為21.25%；在51例證實TP特異性抗體陽性患者中羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測50例陽性；在189例經(jīng)證實TP特異性抗體陰性受檢者中羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測187例陰性，符合率為98.75%，靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值分別為98.04%、98.94%、96.15%和99.47%。 結(jié)論 對TP特異性抗體檢驗中羅氏電化學發(fā)光免疫法準確度、靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值均理想，臨床應用的價值較高。

[關(guān)鍵詞] 羅氏電化學發(fā)光免疫法；梅毒螺旋體；特異性抗體

[中圖分類號] R446.6；R759.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2018）08（a）-0182-03

Application of Roche Electrochemiluminescence Immunoassay in the Examination of Treponema pallidum-Specific Antibodies

LIU Xiao-hua

Emergency Department， Third People's Hospital of Jinan， Jinan， Shandong Province， 250132 China

[Abstract] Objective To evaluate the value of Roche electrochemiluminescence immunoassay in the detection of specific antibodies against Treponema pallidum （TP）. Methods The clinical data of 240 cases of high-risk TP-specific antibody positive patients admitted from February 2016 to September 2017 in the hospital were convenient selected and retrospectively analyzed using the toluidine red unheated serum test （TRUST） and rapid plasma renin card test （RPR） and the Treponema pallidum hemagglutination test （TPHA） were performed and Roche-specific electrochemiluminescence immunoassay was used to detect TP-specific antibodies. To evaluate the clinical application value of Roche electrochemiluminescence immunoassay. Results A total of 51 cases of TP-specific antibodies were confirmed in 240 patients， with a positive rate of 21.25%； 50 cases were positive for TP-specific antibodies in 51 cases； Roche electrochemiluminescence immunoassay tested 50 cases positive； 189 cases were confirmed TP Among 187 patients with specific antibody negative test， 187 cases were negative by Roche electrochemiluminescence immunoassay， the coincidence rate was 98.75%， and the sensitivity， specificity， positive， and negative predictive values were 98.04%， 98.94%， 96.15%， and 99.47%， respectively. Conclusion The accuracy， sensitivity， specificity， positive and negative predictive value of Roche electrochemiluminescence immunoassay in the detection of TP-specific antibodies are all satisfactory， and the value of clinical application is high.

[Key words] Roche electrochemiluminescence immunoassay； Treponema pallidum； Specific antibodies

梅毒螺旋體（TP）是性傳播疾病梅毒的病原體，又被稱為蒼白螺旋體。梅毒屬于廣泛流行的性病之一，在我國的發(fā)病率有所回升，且對人類健康的危害十分嚴重。在梅毒發(fā)生的初期，TP侵入皮膚黏膜大約3周后，局部可出現(xiàn)無痛性硬結(jié)及潰瘍，潰瘍滲出物的傳染性極強，其中含有大量的TP；在梅毒中期，患者以全身皮膚黏膜梅毒疹、淋巴結(jié)腫大，亦或累及骨、關(guān)節(jié)、眼部甚至是其它器官等為主要臨床癥狀；在梅毒晚期，皮膚黏膜將會出現(xiàn)潰瘍性損害，內(nèi)臟器官也將會出現(xiàn)肉芽腫樣病變，甚至繼發(fā)神經(jīng)中樞系統(tǒng)損害。因此必須加強對梅毒的預防工作，才能保證降低梅毒發(fā)病率，并且在TP感染后應當盡早確診并給予高效的控制，才能盡可能減輕對人類的危害。人類感染TP后，血清中將會產(chǎn)生一種抗體，是當前臨床上常用的TP感染標志物[1]。但是目前臨床上常用的TP特異性檢驗方法操作復雜，且需要嚴格把控實驗室條件，亟待改進[2]。鑒于此，該研究特回顧性分析2016年2月—2017年9月收治的240例高危受檢者的臨床資料，以探討羅氏電化學發(fā)光免疫法在TP特異性抗體檢測中的應用成效和價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取醫(yī)院收治的240例高危TP特異性抗體陽性患者的臨床資料進行回顧性分析，納入標準：均采用甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）、快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）和梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA）進行檢驗；均利用羅氏電化學發(fā)光免疫法檢驗；均有完整、清晰的檢驗結(jié)果記錄；排除標準：檢驗結(jié)果可疑但是未明確者；依從性檢查者；患者信息填寫錯誤或者字跡不清者。240例患者中共有男性107例、女性133例，年齡18～75歲，平均（38.7±10.6）歲。該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

TRUST檢驗方法：分別吸取50 μL的受檢者和陽性對照血清及待檢測血清均勻鋪入卡片3個圓圈中，用專用針頭吸取抗原懸液，分別垂直滴加1滴至上述圓圈中，利用離心機處理8 min（100 r/min），水平取下卡片，3 min后肉眼觀察（光線充足處），將圓圈內(nèi)可見較小絮狀凝聚物、中等或較大絮狀凝聚物者記為陽性。

PRP檢驗方法：操作方法同TRUST，在強光下用肉眼觀察結(jié)果，將圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的黑色凝集顆粒者記為TP特異性抗體陽性。

TPHA檢驗方法：采用微量血凝法檢測，若在血凝板底部觀察到致密的凝集塊沉淀物，則記為陽性。

羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測方法：采用羅氏電化學發(fā)光免疫檢測分析儀進行檢測，抽取外周靜脈血后離心分離獲得血清，并利用重組TpN15、TpN17、TpN17抗原包被微孔板和辣根過氧化物酶標記的抗原夾心進行檢測，若OD值≥Cut off值則記為陽性。

1.3 觀察指標

①將血清TRUST、血漿RPR、TPHA檢測結(jié)果作為“金標準”，即根據(jù)3種檢測方法的結(jié)果進行判斷，若是檢測結(jié)果完全一致，則直接按照檢測結(jié)果記錄，若是檢查結(jié)果不一致，由3名以上的副主任和主任醫(yī)師共同討論決定得出統(tǒng)一意見，若意見不一致，則交由第三方?jīng)Q定。統(tǒng)計該組患者中TP特異性抗體陽性率；②根據(jù)“金標準”，統(tǒng)計羅氏電化學發(fā)光免疫法檢驗TP特異性抗體的結(jié)果，并評估其臨床應用價值，包括符合率、靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值，其中符合率=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100.00%；靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100.00%；特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100.00%；陽性預測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100.00%；陰性預測值=真陰性/（假陰性+真陰性）×100.00%。

2 結(jié)果

2.1 血清TRUST、血漿RPR、TPHA檢測結(jié)果

240例患者經(jīng)血清TRUST、血漿RPR、TPHA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有51例TP特異性抗體陽性，陽性率為21.25%。

2.2 羅氏電化學發(fā)光免疫法檢驗結(jié)果

羅氏電化學發(fā)光免疫法檢驗結(jié)果中顯示TP特異性抗體陽性52例，陰性188例，其中在51例證實TP特異性抗體陽性患者中羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測50例陽性；在189例經(jīng)證實TP特異性抗體陰性受檢者中羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測187例陰性，“四表格”統(tǒng)計結(jié)果見表1，臨床檢驗價值統(tǒng)計結(jié)果見表2，可知該方法檢驗TP特異性抗體的符合率為98.75%，靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值分別為98.04%、98.94%、96.15%和99.47%。

3 討論

在自然情況下人類是TP唯一的傳染源。一旦感染TP，將會增加梅毒的發(fā)生風險，而梅毒患者主要表現(xiàn)出皮膚、黏膜潰爛，扁平濕疣等癥狀，與之接觸后可直接傳染TP[3]。TP主要的傳播途徑是性接觸，構(gòu)成比約為95%，若發(fā)展為梅毒，則臨床控制的難度將會顯著升高，因此需要探討理想的診斷方案。在TRUST檢測過程中操作復雜且靈敏度和特異度均不甚理想；在RPR檢測中主要是通過測定血清中的反應素水平觀察黑色凝集情況進行判定的；TPHA是利用抗原包被經(jīng)過鞣化和醛化的紅細胞并通過與特異性抗體結(jié)合形成黑色凝集塊沉淀判斷TP的感染情況，操作復雜、繁瑣，并且均需要肉眼判斷凝集塊的形成情況，但是對于TP特異性抗體弱陽性的患者容易出現(xiàn)誤診[4-5]。

羅氏電化學發(fā)光免疫法診斷TP特異性抗體的原理是將TpN15、TpN17、TpN17重組的抗原用生物素進行標記，同時利用釕復合物標記，與標本的抗體發(fā)生反應后形成夾心免疫復合物，然后通過鏈霉親和素包被的微粒發(fā)揮放大和洗滌的作用，將結(jié)合在固相載體上的復合物留下后可以利用電極下化學發(fā)光反應了解相對RLUs信號強弱，進而準確反映出抗體的水平。當人類感染TP后血清將會產(chǎn)生兩種抗體，其一是非特異性抗體，即患者血清中的抗脂質(zhì)抗體，又稱為反應素；另一種為抗密螺旋體的特異性抗體，特異性抗體大多在TP潛伏期（即感染后2周內(nèi)）產(chǎn)生，能夠利用很多方法檢測，最為常用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗、TP明膠顆粒凝集試驗等，羅氏電化學發(fā)光免疫法是近年來挖掘的一種新方法，在利用該方法對TP特異性抗體水平進行檢測時結(jié)果更為精準，且不需要繁多復雜的步驟，其中最為明顯的優(yōu)勢是該方法不需要通過肉眼判斷黑色絮狀物、凝集塊或者凝集塊沉淀的發(fā)生情況。既往研究認為[6]，利用羅氏電化學發(fā)光免疫法檢驗TP特異性抗體僅需要10 μL血清和18 min時間便能夠得出定性檢測結(jié)果，準確率高，靈敏度和特異度均比較理想。此外，在利用羅氏電化學發(fā)光免疫法診斷TP特異性抗體的同時還能夠檢測出受檢者免疫球蛋白的水平，了解其體液免疫能力，并且也可為臨床治療方案的選擇提供依據(jù)[7]。該研究結(jié)果中，羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測TP特異性抗體的符合率高達98.75%，且靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值均比較高，分別為98.04%、98.94%、96.15%和99.47%，在劉洋等人[8]的研究結(jié)果中，羅氏電化學發(fā)光免疫法檢測的靈敏度、特異度、陽性和陰性預測值分別為100.00%、83.33%、96.43%和100.00%，總符合率分別為92.42%，與該研究結(jié)果相近，共同證實該方法具有較高的臨床應用價值。

綜上所述，建議在TP特異性抗體檢驗中推廣應用羅氏電化學法發(fā)光免疫法，價值較高，且操作方面，能夠為臨床治療方案的選擇提供依據(jù)。

[參考文獻]

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（收稿日期：2018-05-04）