周敏 丁云暉 李德祥

上海上藥中西制藥有限公司 （上海 201806）

鹽酸倍他司汀化學(xué)名為N-甲基-2-吡啶乙胺二鹽酸鹽，屬于組胺類藥物，是一種常用的血管擴張藥物。鹽酸倍他司汀主要用于治療椎基底動脈供血不足、美尼爾氏綜合癥、腦動脈硬化、不穩(wěn)定心絞痛，取得了一定的治療效果；對高血壓所致直立性眩暈、耳鳴等亦有效[1-4]。

印度藥典[5]收載有鹽酸倍他司汀片溶出度的測定方法，也有文獻[6]研究了鹽酸倍他司汀片溶出度的檢測方法，但是未對溶出度方法進行篩選。本文參照印度藥典及日本橙皮書《醫(yī)療用藥品品質(zhì)情報集》的相關(guān)內(nèi)容，建立了簡便、準確、可行、精密度高的方法來測定鹽酸倍他司汀的溶出度。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1260型高效液相色譜儀、紫外檢測器和色譜工作站，美國安捷倫科技公司；SOTAX AT7 smart自動溶出儀，瑞士SOTAX公司；Mettle xpe105電子天平，梅特勒-托利多國際有限公司。

試劑與藥品：甲醇（色譜純），Merck公司；純化水、無水乙酸鈉（分析純）、1-庚烷磺酸鈉（分析純）、三乙胺（色譜純）、冰乙酸（分析純）、鹽酸（分析純），國藥集團化學(xué)試劑有限公司；鹽酸倍他司汀工作用對照品（批號為：100265-201203，w=99.6%）、鹽酸倍他司汀片 （批號為：T171251，T171252，T171253，4 mg/片），上海上藥中西制藥有限公司。

1.2 樣品處理

1.2.1 供試品溶液

取樣品適量，采用2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）“溶出度與釋放度測定”第二法（漿法），以鹽酸溶液(pH=1.2)為溶出介質(zhì)，體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溫度為（37±5）℃。依法操作，于30 min時取溶出液適量，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1.2.2 對照品溶液

取鹽酸倍他司汀對照品適量，精密稱定，加鹽酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含4 μg鹽酸倍他司汀的溶液，作為對照品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；

流動相：0.01 mol/L的醋酸鈉緩沖液（含0.004 mol/L庚烷磺酸鈉，0.2%三乙胺，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=3.3)-甲醇（體積比為 70∶30）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長：261 nm；進樣量：20μL；柱溫：25 ℃。

2 色譜條件選擇

2.1 檢測波長的選擇

采用紫外分光光度法，在200～400 nm范圍內(nèi)對對照品溶液進行掃描，鹽酸倍他司汀的最大吸收峰在261 nm處，故選擇261 nm為檢測波長。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣5次，考察重復(fù)性，結(jié)果見表1。

表1 對照品溶出度重復(fù)性試驗結(jié)果

溶出度重復(fù)性實驗結(jié)果表明，該方法系統(tǒng)適用性良好。

2.3 輔料干擾

空白輔料不干擾主藥的測定。

2.4 檢測限與定量限

取鹽酸倍他司汀對照品0.02216 g，置于50 mL量瓶中，加適量鹽酸溶液（pH=1.2）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。量取上述貯備液，用鹽酸溶液（pH=1.2）逐級稀釋，以主成分峰與基線噪音的信噪比約為10時的濃度為定量限濃度，進樣20μL，定量限為12.409 6 ng/mL；將定量限濃度稀釋約3倍后，此時儀器的信噪比約為3∶1，定為檢測限質(zhì)量濃度，則檢測限為3.4769 ng/mL。

2.5 線性范圍

取鹽酸倍他司汀對照品0.022 32 g，置于100 mL量瓶中，用鹽酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀釋制成一系列不同質(zhì)量濃度的溶液，參照上述色譜條件，精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結(jié)果見表2。

表2 鹽酸倍他司汀線性關(guān)系表

2.6 重復(fù)性實驗

取同一批樣品的供試品溶液6份進行HPLC測定，結(jié)果見表3。

經(jīng)過計算，溶出度平均為95.88%，相對標準偏差（RSD）為1.47%，表明實驗方法重復(fù)性良好。

表3 鹽酸倍他司汀溶出度重復(fù)性實驗%

2.7 中間精密度

由不同分析人員在不同時間取同一批樣品的供試品溶液6份進行HPLC測定，結(jié)果見表4。經(jīng)計算，溶出度平均為96.06%，RSD為1.17%，表明該方法具有良好的中間精密度。

表4 鹽酸倍他司汀溶出度中間精密度實驗 %

2.8 穩(wěn)定性實驗

取同一批號供試品溶液，在 0，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 進樣測定，考察供試品中鹽酸倍他司汀峰面積的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示鹽酸倍他司汀峰面積的RSD為0.37%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.9 回收率實驗

精密稱取鹽酸倍他司汀對照品適量，按處方量加入輔料，加鹽酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀釋。精密量取20μL注入液相色譜儀中，按外標法以峰面積計算鹽酸倍他司汀的測得量和回收率，結(jié)果見表5。由表5可知，平均回收率為9.73%，RSD為0.7%。表明鹽酸倍他司汀的回收率良好。

2.1 0 耐用性實驗

取同一批供試品溶液各20μL，分別于0.8，1.0，1.2 mL/min流速下進樣，測定的溶出度平均值分別為95.80%，95.88%，95.90%；調(diào)節(jié)流動相比例分別為 68∶32與 75∶25，在該條件下進樣，所測定的溶出度平均值分別為97.09%，95.70%；調(diào)節(jié)溫度分別為20，30℃，測定的溶出度平均值分別為95.73%，95.82%；將色譜柱更換為Phenomenex C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm），測定的溶出度平均值為95.90%。一系列實驗結(jié)果表明該方法的系統(tǒng)耐用性良好。

表5 回收率及RSD結(jié)果匯總

3 溶出條件篩選

3.1 溶出介質(zhì)的選擇

取市售品（SERCTABLETS，批號為 640198），對其在水、鹽酸溶液（pH=1.2）、醋酸鹽緩沖液（pH=4.0）、磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）等溶出介質(zhì)中的溶出曲線進行測定。測定方法參考文獻(采用槳法、50 r/min、900 mL溶出介質(zhì))，在 5，10，15，20，30，45，60 min 時取樣，按1.3節(jié)中色譜條件進樣測定。結(jié)果見表6。

表6 溶出度相似度評價及溶出介質(zhì)的選擇試驗結(jié)果

表6表明，市售鹽酸倍他司汀在上述溶出介質(zhì)中的溶出行為均相似。鹽酸倍他司汀片為胃溶型制劑，鹽酸溶液更接近人體胃中的環(huán)境，為了更好地模擬體內(nèi)環(huán)境，故選擇鹽酸溶液為溶出介質(zhì)。

3.2 溶出介質(zhì)體積的選擇

本品擬采用大杯法，而大杯法常用介質(zhì)體積為500～1 000 mL，實驗選擇常用的900 mL。為考察在選定的體積下，鹽酸倍他司汀在各溶出介質(zhì)中的溶解度是否理想，設(shè)計了原料的飽和溶解度實驗。

飽和供試品溶液的制備：取鹽酸倍他司汀原料（批號：170107）過量，分置于4個10 mL的容量瓶中，分別加pH=1.2的鹽酸溶液、pH=4.0的醋酸鹽緩沖液、pH=6.8的磷酸鹽緩沖液、水至刻度，置于37℃的水浴中振蕩，使之形成過飽和溶液（以鹽酸倍他司汀原料在上述各溶劑中未完全溶解作為判斷依據(jù)）；過濾，取續(xù)濾液即得飽和供試品溶液。經(jīng)HPLC法測得飽和溶液的準確質(zhì)量濃度，計算溶解度并繪制pH-溶解度曲線。

對照品溶液的制備：另取鹽酸倍他司汀對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含鹽酸倍他司汀40μg的溶液。

按上述擬定的HPLC的色譜條件，取對照品溶液與飽和供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以鹽酸倍他司汀的峰面積計算各溶出介質(zhì)中的溶解量，結(jié)果見表7。從表7可以看出，溶解量最低的醋酸中鹽酸倍他司汀的溶解度為980.733 312 mg/mL，遠大于溶出度測定時的最高濃度（4 mg/900 mL=0.0044 mg/mL），因此，900 mL的體積完全可以滿足漏槽條件。

表7 鹽酸倍他司汀飽和溶解度試驗結(jié)果

3.3 溶出轉(zhuǎn)速的選擇

采用槳法-轉(zhuǎn)速為75 r/min在選定的鹽酸溶液(pH=1.2)中測定溶出度，繪制溶出曲線，與槳法-轉(zhuǎn)速為50 r/min時在相同介質(zhì)中的溶出曲線進行比較，結(jié)果見圖1。

由圖1可見，適宜的轉(zhuǎn)速為50 r/min。

3.4 取樣時間的確定

根據(jù)表6市售品在4種介質(zhì)中不同時間點的平均累積溶出數(shù)據(jù)，在30 min時，鹽酸倍他司汀溶出基本達到平衡，故確定取樣時間為30 min。

圖1 溶出度-轉(zhuǎn)速選擇溶出曲線

3.5 樣品溶出度測定及溶出限度的確定

取3批樣品各適量，按1.2節(jié)中方法制備供試品溶液，再按1.3中色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算溶出度，結(jié)果見表8。

表8 鹽酸倍他司汀片溶出度試驗結(jié)果

3批樣品的主成分在30 min時的溶出度在97%～103%之間，依據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》，限度擬訂為80%。

4 結(jié)論

（1）實驗色譜條件參考了2015版《中華人民共和國藥典》（二部）[7]中收載的鹽酸倍他司汀片含量的色譜條件，方法學(xué)驗證表明，該色譜條件下理論塔板數(shù)高，出峰快，靈敏度高。

（2）溶出條件的選擇參考了印度藥典以及日本橙皮書，經(jīng)條件篩選，以pH=1.2的鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，溶出體積為900 mL，取樣時間點為30 min，轉(zhuǎn)速為50 r/min。

溶出度試驗是評價口服固體制劑質(zhì)量的一種重要手段，故有必要增加溶出度檢查。