尚如霞 何寅

（鎮(zhèn)江市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心 江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

鹽酸可樂(lè)定片在臨床上主要用于治療高血壓（但不作為第一線用藥）和高血壓急癥，在臨床上還可以治療偏頭痛、絕經(jīng)期潮熱、痛經(jīng)，以及戒絕阿片癮毒癥狀。心血管疾病作為危害人類(lèi)健康的主要?dú)⑹种?，?yán)重地?fù)p害人類(lèi)的健康。該藥作為心血管類(lèi)用藥，已收錄于江蘇省基本藥物目錄中，臨床應(yīng)用范圍較廣。因此，其質(zhì)量情況應(yīng)受到重點(diǎn)關(guān)注。

鹽酸可樂(lè)定片已收載在《中國(guó)藥典》（2015年版）二部[1]中，美國(guó)藥典亦有收載。但國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)均未收載其有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。有關(guān)物質(zhì)是藥品中除主成分以外的雜質(zhì)，它可能是原料藥合成過(guò)程中帶入的原料、中間體、試劑、分解物、副產(chǎn)物、聚合體、異構(gòu)體，以及不同晶體、旋光異構(gòu)的物質(zhì)，也可能是制劑生產(chǎn)過(guò)程或在貯藏、運(yùn)輸、使用過(guò)程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物等。為了客觀地評(píng)價(jià)鹽酸可樂(lè)定片有關(guān)物質(zhì)，控制其雜質(zhì)含量，因此建立了鹽酸可樂(lè)定片的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，并考察了環(huán)境對(duì)藥品的影響[2]。

1.實(shí)驗(yàn)材料

儀器：SPD-20A島津液相色譜儀、電熱恒溫培養(yǎng)箱、AG245天平

色譜柱：C8柱，依利特 150mm×4.6mm

液相色譜條件：以0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸（500：500：1）為流動(dòng)相（調(diào)節(jié)PH值3.0）；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。

鹽酸可樂(lè)定片：江蘇A藥業(yè)有限公司24批、常州B藥業(yè)有限公司6批，共計(jì)兩個(gè)廠家30批樣品。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 流動(dòng)相選擇

首先，進(jìn)行流動(dòng)相的選擇。由于《中國(guó)藥典》和《美國(guó)藥典》收載的含量測(cè)定方法，其流動(dòng)相均相同，因此考慮就選擇與含量測(cè)定項(xiàng)下相同的色譜條件，以0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸（500：500：1）為流動(dòng)相（調(diào)節(jié)pH值3.0），檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。同時(shí)，在相同的色譜條件下，對(duì)空白溶劑和空白片分別進(jìn)樣，在同一波長(zhǎng)處均無(wú)吸收干擾（附圖1、2）。

2.2 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)

取本品細(xì)粉適量（約含鹽酸可樂(lè)定150g），分別經(jīng)熱破壞、酸破壞、堿破壞、UV365nm(6h)破壞處理，中和后，分別用流動(dòng)相溶解稀釋成每1ml中約含3g的供試液，取50l進(jìn)行HPLC分離分析。結(jié)果表明：在上述選定的色譜系統(tǒng)之下，鹽酸可樂(lè)定與分、降解產(chǎn)物的分離良好，分、降解產(chǎn)物不干擾鹽酸可樂(lè)定及其有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。酸破壞后產(chǎn)生了較多的雜質(zhì)，UV365nm(6h)破壞處理后，供試品中有關(guān)物質(zhì)多為光降解產(chǎn)物。

（1）光照破壞：取上述供試液在紫外光燈（UV365nm）下照射6小時(shí)后，進(jìn)樣。

（2）酸破壞實(shí)驗(yàn)：取上述供試液1ml，加1ml稀鹽酸，至10ml容量瓶，放置8小時(shí)后，加1mol/L氫氧化鈉試液中和，加流動(dòng)相至刻度，進(jìn)樣。

（3）堿破壞實(shí)驗(yàn)：取上述供試液1ml，加1ml1mol/L氫氧化鈉試液，至10ml容量瓶，放置8小時(shí)后，加稀鹽酸中和，加流動(dòng)相至刻度，進(jìn)樣。

2.3 溫濕度存儲(chǔ)條件模擬實(shí)驗(yàn)

選用同一廠家、同一批號(hào)的樣品，一份在35℃電熱恒溫培養(yǎng)箱放置48小時(shí)，另一份在80℃水浴放置8h，同法測(cè)定，在4.1分鐘處出現(xiàn)新雜質(zhì)峰。表明溫濕度存儲(chǔ)條件對(duì)藥品雜質(zhì)有一定影響。（見(jiàn)附圖3、4）

2.4 方法耐用性

選取不同的色譜柱Kromasil柱及伊利特C8柱，其他條件不變，取專(zhuān)屬性試驗(yàn)項(xiàng)下破壞溶液進(jìn)樣測(cè)定。鹽酸可樂(lè)定與分降解產(chǎn)物的分離良好。方法耐用性好。

2.5 線性范圍

稱(chēng)取鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品10.50mg，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中含鹽酸可樂(lè)定濃度分別為0.1、1、10、50和100g的供試品溶液，分別精密量取50l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以鹽酸可樂(lè)定的峰面積(A)對(duì)其濃度(C)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y=158128x+76850, R2=0.9998 結(jié)果表明：在0.1～100g/ml范圍內(nèi)，鹽酸可樂(lè)定色譜峰面積與其濃度成良好線性關(guān)系。（見(jiàn)圖5）

附圖1 江蘇A藥業(yè)公司樣品有關(guān)物質(zhì)色譜圖

附圖2 常州B藥業(yè)公司樣品有關(guān)物質(zhì)色譜圖

圖5 有關(guān)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.6 定量限

將上述0.1g/ml的對(duì)照品溶液再稀釋后進(jìn)樣，根據(jù)峰高以信噪比S/N=10確定鹽酸可樂(lè)定片的定量限為30ng。(見(jiàn)附圖6)

2.7 檢測(cè)限

同定量限測(cè)定方法，根據(jù)峰高以信噪比S/N=3確定鹽酸可樂(lè)定片的檢測(cè)限為10 ng。（見(jiàn)附圖7）

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

附圖3 35℃～48h熱破壞色譜圖

附圖4 80℃～8h熱破壞色譜圖

取本品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相稀釋制成每1ml中約含30g的鹽酸可樂(lè)定溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。按照上述色譜條件和配制方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，供試液濃度為30g,對(duì)照溶液的濃度為0.3g。取對(duì)照溶液50l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為記錄滿量程的10%，再精密量取對(duì)照溶液和供試品溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的5倍。測(cè)定兩個(gè)廠家共30批不同批號(hào)樣品，有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果如下：（見(jiàn)表1）從表1中可以得知，30批樣品中總雜質(zhì)為0.6%～3.1%，其中單個(gè)最大雜質(zhì)為保留時(shí)間2.54處的雜質(zhì)峰（限度為0.5%～2.9%）。30批鹽酸可樂(lè)定片均檢出有關(guān)物質(zhì)，其檢出率為100%，由此可見(jiàn)建立有關(guān)物質(zhì)的檢查方法重要且很有必要。

表1 鹽酸可樂(lè)定片有關(guān)統(tǒng)計(jì)表

3.2 結(jié)果與討論

（1）本次測(cè)定的鹽酸可樂(lè)定片兩個(gè)廠家共30批，均檢出了有關(guān)物質(zhì)，其中28批有關(guān)物質(zhì)的含量大于1%，有的批次甚至達(dá)到2%～3%,有關(guān)物質(zhì)的含量比較高的，因此建立有關(guān)物質(zhì)的檢查方法還是很有必要性的。通過(guò)控制有關(guān)物質(zhì)的含量，可以控制鹽酸可樂(lè)定片的雜質(zhì)總量。

附圖6 定量限（S/N=10）

附圖7 檢測(cè)限（S/N=3）

（2）通過(guò)上述數(shù)據(jù)，分析不同廠家的生產(chǎn)工藝可能對(duì)雜質(zhì)有一定影響，江蘇A藥業(yè)公司生產(chǎn)過(guò)程中加入的輔料比較的少，因此雜質(zhì)含量比較低；而常州B制藥廠生產(chǎn)中加入的輔料比較多，所以平均雜質(zhì)含量要高。從雜質(zhì)的出峰時(shí)間上，有關(guān)物質(zhì)主要是保留時(shí)間2.54分鐘左右的雜質(zhì)峰，有10批次在其它時(shí)間內(nèi)也有雜質(zhì)峰，可通過(guò)進(jìn)一步分析，確認(rèn)其雜質(zhì)成分。