鄧 君，洪 華，劉 蔚，孫昌瑞

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610072)

乳腺癌是嚴(yán)重威脅女性生命的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，臨床上對(duì)乳腺癌的診斷，有X射線、超聲、免疫組化等，但或靈敏度較低，或特異性較差，容易出現(xiàn)漏診、誤診，而血清腫瘤標(biāo)志物的檢測簡便快捷、創(chuàng)傷小等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于臨床，但是單一腫瘤標(biāo)志物對(duì)臨床診斷有較大局限，本研究探討MUC1和CXCL16聯(lián)合檢測對(duì)乳腺癌診斷的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2016年1月至2017年12月我院明確病理診斷的157例乳腺癌患者，年齡24～76歲；102例良性乳腺瘤患者，其中纖維瘤59例和脂肪瘤43例，年齡21～73歲；126例其他腫瘤患者，其中肺癌31例，卵巢癌34例，肝癌28例和結(jié)腸癌33例，年齡21～73歲，對(duì)照組為體檢中心健康女性50例，年齡20～77歲。受試者和患者手術(shù)前均空腹采血3 ml，MUC1檢測需1 mg/ml EDTA抗凝，CXCL16不抗凝，均3000 r/min 離心 5 min。

1.2總RNA提取及RT-PCR淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，TRIZOL液提取總RNA，AMV反轉(zhuǎn)錄酶體系作RT-PCR，42 ℃反應(yīng)55 min。

1.3SYBRGREENFQ-PCR

1.3.1引物和探針 采用PE公司Primer Express5.0軟件在高保守區(qū)設(shè)計(jì)MUC1的引物和探針，由上海華舜生物公司合成。β-actin內(nèi)對(duì)照試劑盒：由美國ABI生物公司生產(chǎn)。MUC1正義引物正向，5’-3’CGTCGTGGACATTGATGGTACC；MUC1反義引物，5’-3’GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA；β-actin正義引物：5’-3’CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT；β-actin反義引物：5’-3’AGCACTGTGTTGGCGTACAG。

1.3.2SYBR GREEN FQ-PCR SYBR Premix Ex TaqTM(2x) 10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L) 2 μl，PCR Reverse Primer(10 μmol/L) 2 μl，模板(cDNA 溶液)2 μl，去RNA酶水4 μl，反應(yīng)條件：95 ℃ 10 ml cycle，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s 40 cycles，95 ℃ 15 s，60 ℃1 m，95 ℃30 s，60 ℃15 s 1 cycle。

1.3.3陽性率的計(jì)算[1]應(yīng)用2-ΔΔCt方法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。將健康人組基因表達(dá)相對(duì)量設(shè)定為1，2-ΔΔCt值為乳腺癌組相對(duì)健康人組基因表達(dá)的倍數(shù)，以 2-ΔΔCt>2 判斷為陽性。

1.4CXCL16的檢測采用酶鏈免疫吸附法進(jìn)行測定，試劑盒由美國R&D生物公司提供。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用 SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析及SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1對(duì)照組與疾病組MUC1和CXCL16測定結(jié)果

對(duì)照組MUC1和CXCL16與良性乳腺病組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，乳腺癌組MUC1和CXCL16均高于對(duì)照組和良性乳腺病組，MUC1高于其他腫瘤組(P< 0.05)，見表1。

表1 對(duì)照組與疾病組MUC1和CXCL16測定結(jié)果

#與對(duì)照組、良性乳腺疾病組和其他腫瘤組比較，P< 0.05；×與對(duì)照組、良性乳腺疾病組比較，P< 0.05

2.2MUC1和CXCL16在乳腺癌臨床分期的檢測結(jié)果乳腺癌組Ⅲ+Ⅳ期MUC1和CXCL16定量高于I+II期(P< 0.05)，見表2。

表2 MUC1和CXCL16在乳腺癌臨床分期的檢測結(jié)果

2.3MUC1和CXCL16在乳腺癌手術(shù)前后的檢測結(jié)果MUC1和CXCL16在手術(shù)后顯著下降(P< 0.05)，見表3。

表3 MUC1和CXCL16在乳腺癌手術(shù)前后的檢測結(jié)果

2.4MUC1和CXCL16用于乳腺癌診斷的評(píng)價(jià)MUC1和CXCL16對(duì)乳腺癌診斷靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值見表4，MUC1檢測特異性高，CXCL16檢測靈敏度高，MUC1和CXCL16聯(lián)合檢測可提高對(duì)乳腺癌靈敏度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。

表4 MUC1和CXCL16對(duì)乳腺癌的診斷性能評(píng)價(jià)(%)

※與CXCL16比較，P< 0.05；#與MUC1比較，P< 0.05；*與CXCL16和MUC1比較，P< 0.05

3 討論

MUC1 是一類高分子量糖蛋白，基因定位于染色體1q21，具有基因多態(tài)性，廣泛表達(dá)于消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)等[2]，臨床研究表明 MUC1 在 95%的乳腺癌中高表達(dá)，其異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的生長、分化、浸潤轉(zhuǎn)移、粘附以及機(jī)體的免疫監(jiān)控有關(guān)[3]，同時(shí)與腫瘤的惡性程度及預(yù)后不良密切相關(guān)。人們?cè)絹碓蕉嗟膶⑵溆糜谌橄侔┫嚓P(guān)基因的研究[4，5]，本研究也發(fā)現(xiàn)，MUC1在乳腺癌組的表達(dá)顯著高于正常組，良性乳腺疾病組和其他腫瘤組，診斷特異性較高，與臨床分期有關(guān)，手術(shù)后明顯下降，說明MUC1作為一種潛在的乳腺癌血清學(xué)的一種重要標(biāo)志物，是診斷乳腺癌和監(jiān)測術(shù)后復(fù)發(fā)、觀察療效的較好指標(biāo)之一。

CXCL16基因定位于染色體17p13上，是新近發(fā)現(xiàn)的趨化因子，與動(dòng)脈粥樣硬化、肝炎、風(fēng)濕免疫、獲得性免疫缺陷綜合征等免疫及炎癥相關(guān)[6，7]，近年來，有報(bào)道CXCL16 及受體 CXCR6 在惡性腫瘤中的高表達(dá)，可刺激腫瘤細(xì)胞體外增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)[8，9]，但與乳腺癌關(guān)系的報(bào)道較少，還未見與其它乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物比較分析的相關(guān)報(bào)道，本研究對(duì) CXCL16 與乳腺疾病的關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，CXCL16均高于正常對(duì)照組和良性乳腺疾病組，乳腺癌組和其他腫瘤組的CXCL16無顯著性差異，CXCL16在手術(shù)后有顯著下降，在乳腺癌組中，隨著臨床分期的升高，CXCL16遞增，Ⅲ+Ⅳ期顯著高于I+II期，提示 CXCL16 表達(dá)可能參與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程，但CXCL16雖然靈敏度高，而特異性卻較低。

本研究發(fā)現(xiàn)，在對(duì)乳腺癌診斷中，MUC1的特異性較高，CXCL16靈敏度較高，MUC1和CXCL16聯(lián)合檢測可提高對(duì)乳腺癌靈敏度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值，MUC1和CXCL16對(duì)乳腺癌術(shù)后隨訪有一定的意義，考慮到基層醫(yī)院可能缺乏做基因檢測的昂貴儀器，可以先檢測CXCL16，再采用基因診斷和病理學(xué)方法進(jìn)一步確診，有助于提高對(duì)乳腺癌早期診斷。