張 芳（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院，山西太谷 030800）

青蘋果竹芋，又叫蘋果竹芋、圓葉竹芋。是竹芋科肖竹芋屬植物，其葉色清新宜人，其上排列有整齊的條紋，是很受人們喜愛的室內(nèi)觀葉植物，并有清肺止咳、清熱利尿的藥用功效。

青蘋果竹芋原產(chǎn)美洲的熱帶地區(qū)，屬多年生常綠宿根草本植物，喜溫暖濕潤和光線明亮的環(huán)境，不耐寒、不耐旱，怕烈日曝曬，對(duì)水分反應(yīng)較為敏感，對(duì)空氣要求較高，不易成活。青蘋果竹芋的繁育主要采用分株繁殖，繁殖速度慢且影響母體的長勢(shì)，不利于擴(kuò)大生產(chǎn)

[1]。自2000年以來，我國開始對(duì)青蘋果竹芋進(jìn)行組織培養(yǎng)研究。到目前為止，對(duì)青蘋果竹芋繼代培養(yǎng)的研究較少，本試驗(yàn)針對(duì)影響青蘋果竹芋繼代培養(yǎng)的因素進(jìn)行分析，按照不同種類的生長調(diào)節(jié)劑濃度對(duì)青蘋果竹芋莖的分化、增殖等影響，篩選出最為適合莖生長的生長調(diào)節(jié)劑濃度，從而獲得品質(zhì)優(yōu)良的青蘋果竹芋，并對(duì)實(shí)現(xiàn)青蘋果竹芋的工廠化快速繁殖具有重要的研究意義。

1 材料與方法

1.1 材料

青蘋果竹芋外植體、蔗糖、瓊脂、HgCl2、高錳酸鉀、新潔爾滅、無菌水、6-BA、IBA、NAA。

1.2 儀器設(shè)備

高壓滅菌設(shè)備1套，超凈工作臺(tái)1臺(tái)，500mL搪瓷杯 1個(gè)，罐頭瓶多個(gè)，燒杯 50、100、250mL各 3個(gè)，容量瓶25、50、100mL各5個(gè)，移液管（不同規(guī)格）3個(gè)，手術(shù)剪1把，長柄剪子1把，解剖刀l個(gè)，酒精燈1個(gè)，pH試紙，封口塑料膜若干,線繩若干[2]。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 外植體消毒。從生長健壯的青蘋果竹芋上，選取帶節(jié)的莖段,除去根狀物，用自來水沖洗20min，用濾紙吸干水分，放入500倍高錳酸鉀溶液中浸泡消毒40min后，放入500倍新潔爾滅溶液中浸泡消毒30min。完成后，將材料放在超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡消毒30s，用無菌水沖洗2～3遍，再用0.1%HgCl2浸泡消毒12min，其間不斷搖晃滅菌瓶讓材料充分消毒，最后用無菌水沖洗4～5次后，用無菌濾紙吸干表面水分，切成小段接種[3]。

1.3.2 培養(yǎng)過程。以MS為基本培養(yǎng)基，添加蔗糖30g/L、瓊脂 7g/L，pH 值 5.6～5.8[4]，并按照表1所示的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來誘導(dǎo)不定芽。接種完畢之后，將培養(yǎng)物放在無菌恒溫室里培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20～25℃，光照14h/d(光照強(qiáng)度 2000Lx)，并分別按照 10d、20d、50d 的周期，對(duì)青蘋果竹芋的芽的數(shù)目以及生長情況進(jìn)行統(tǒng)一計(jì)數(shù)。本試驗(yàn)中的激素參數(shù)設(shè)計(jì)如下：

表1 不同激素對(duì)青蘋果竹芋莖的繼代培養(yǎng)的影響的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度6-BA與IBA配比對(duì)青蘋果竹芋幼芽增值的影響

不定芽誘導(dǎo)結(jié)果：將青蘋果竹芋外植體接種到不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基中30d后，可觀察到外植體顏色逐漸變?yōu)樽睾稚诮臃N50d后發(fā)現(xiàn)有綠色新芽長出，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，不定芽逐漸粗壯。

表2 不同激素對(duì)青蘋果竹芋莖的繼代培養(yǎng)的影響

由表2可知，以青蘋果的莖為外植體，在MS中加入 6-BA 2.0～4.0mg/L，IBA 0.2～0.5mg/L 的培養(yǎng)基中均能長出不定芽。其中，以MS+6-BA 4.0mg/L+IBA 0.5mg/L的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)誘導(dǎo)不定芽的效果最好，不定芽的分化率較高，芽的生長快。

2.2 不同濃度6-BA與NAA配比對(duì)青蘋果竹芋幼芽增殖的影響

不定芽誘導(dǎo)結(jié)果：將青蘋果竹芋外植體接種到不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基中30d后，可觀察到外植體顏色逐漸變?yōu)樽睾稚?，在接種50d后發(fā)現(xiàn)有綠色新芽長出，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，不定芽逐漸粗壯。

表3 不同激素對(duì)青蘋果竹芋莖的繼代培養(yǎng)的影響

由表3可知，以青蘋果的莖為外植體，在MS中加入 6-BA 2.0～4.0mg/L，NAA 0.2～0.5mg/L 的培養(yǎng)基中均能長出不定芽。其中，以MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)誘導(dǎo)不定芽的效果最好，不定芽的分化率較高，芽的生長快。

3 結(jié)論

從表2和表3中可以看出，適宜誘導(dǎo)青蘋果竹芋莖的繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2 mg/L；MS+6-BA 4.0mg/L+IBA 0.5mg/L。

在青蘋果竹芋莖的繼代增殖培養(yǎng)基中，當(dāng)NAA的添加量一定時(shí)，隨著6-BA濃度的降低，青蘋果竹芋莖的增殖效果越好，當(dāng)IBA的添加量一定時(shí)，隨著6-BA濃度的增高，青蘋果竹芋莖的增殖效果越好。與此同時(shí)，NAA（或IBA）的濃度不能超過0.5mg/L。此外，在繼代增殖培養(yǎng)中，青蘋果竹芋試管苗生長后期，其芽的生長速率相對(duì)較慢，60～70d后觀察發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于前30～50d的苗高而言，僅增長了1～2cm。因此，在青蘋果竹芋組織培養(yǎng)過程中，如何獲得較高的增殖率和長勢(shì)明顯的試管苗仍有待于進(jìn)一步研究和探索。