嚴(yán)俊賢，吳開暢，鄧正華，于 剛，馬振華，李有寧，陳明強(qiáng)，王 雨

( 1.中國水產(chǎn)科學(xué)院 南海水產(chǎn)研究所，熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018； 2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300 )

海洋單胞藻類是海洋生態(tài)系統(tǒng)中的初級生產(chǎn)者，通過光合作用將無機(jī)碳轉(zhuǎn)化為可供生物利用的有機(jī)碳，是海洋初級消費(fèi)者尤其是雙殼類動物的重要餌料。海洋雙殼類濾食單胞藻，將單胞藻中的能量與物質(zhì)轉(zhuǎn)入食物鏈中傳遞，對維持海洋生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定具有重要作用。社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，對海洋貝類的需求不斷增長，濫捕濫撈導(dǎo)致部分經(jīng)濟(jì)價值較高的貝類天然種群數(shù)量銳減；工業(yè)與生活污染導(dǎo)致部分地區(qū)的近岸海域生態(tài)環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，致使海洋貝類種群進(jìn)一步衰退。人工繁育與養(yǎng)殖開發(fā)海洋貝類能夠滿足市場的需求，也可利用苗種的增殖放流、底播等方式有效保護(hù)和恢復(fù)野生種群，如皺肋文蛤(Meretrixlyrata)[1]、合浦珠母貝(Pinctadafucata)[2]、櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)[3]、珍珠貝[4-5]等海洋雙殼類得到了較早的養(yǎng)殖開發(fā)，自然環(huán)境中的種群數(shù)量仍然保持較高的水平。然而，仍有部分未開發(fā)的經(jīng)濟(jì)雙殼類仍然依靠捕撈天然個體以滿足市場需求，因此，有必要加快擴(kuò)大海洋經(jīng)濟(jì)雙殼類養(yǎng)殖開發(fā)的寬度與廣度。

長肋日月貝(Amusiumpleuronectes)屬扇貝科、日月貝屬，是我國南方海域的重要經(jīng)濟(jì)貝類，具有肉質(zhì)鮮嫩、營養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn)。目前，我國的長肋日月貝仍未得到系統(tǒng)的繁育與養(yǎng)殖開發(fā)，市場上的商品貝均為捕撈所得，大量捕撈已致部分海區(qū)的長肋日月貝自然數(shù)量銳減。國內(nèi)外對長肋日月貝的研究，主要集中在繁育技術(shù)開發(fā)和遺傳學(xué)等方面[6-10]。適宜的開口餌料是苗種養(yǎng)殖開發(fā)重要的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，目前有關(guān)長肋日月貝的開口餌料種類選擇的相關(guān)研究仍為空白。筆者以幾種常用的單胞藻和水產(chǎn)育苗專用的酵母作為餌料，利用不同生物餌料的營養(yǎng)特點(diǎn)，進(jìn)行單一及與紅酵母搭配投喂的對比試驗(yàn)，篩選出適宜的長肋日月貝幼蟲開口餌料，為優(yōu)化長肋日月貝人工育苗技術(shù)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用長肋日月貝幼蟲由人工促熟親貝排放、受精和孵化所得。試驗(yàn)用球等鞭金藻(Isochrysisgalbana)、牟氏角毛藻(Chaetocerosmulleri)、綠色巴夫藻(Pavlocaviridis)，取自南海水產(chǎn)研究所熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心的餌料培養(yǎng)室，接種后培養(yǎng)5 d開始投喂；釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)購自安琪酵母股份有限公司[商品名為“釀酒酵母Ⅰ形(水產(chǎn)專用)”]；海洋紅酵母(Rhodomonassp.)濃縮液購自無錫中順海得生物科技有限公司，置于冰箱中4 ℃保存。

1.2 方法

用6 L塑料桶進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)水體體積為5 L。設(shè)置試驗(yàn)用5種生物餌料單獨(dú)投喂試驗(yàn)，以及海洋紅酵母分別與其余4種餌料以細(xì)胞數(shù)量為1︰3混合投喂[11]，共9個投喂組，每組設(shè)置3個平行。幼蟲的初始密度為0.1個/mL，日投餌量為1.0×104個/mL，分2～3次投喂；日換水1次，換水量為50%。試驗(yàn)用海水經(jīng)過沉淀、砂濾和棉袋過濾處理，鹽度為33；試驗(yàn)場用空調(diào)控溫，水溫控制在28 ℃；保持試驗(yàn)環(huán)境中的光照度小于500 lx；24 h連續(xù)微充氣。

試驗(yàn)第1 d測量初始?xì)らL，試驗(yàn)結(jié)束時測量各組幼蟲最終殼長，每個平行取30個幼蟲，利用顯微鏡和電子目鏡連接電腦，經(jīng)校準(zhǔn)后進(jìn)行測量，測量軟件為Toupview 3.7，測量精確度1 μm。試驗(yàn)過程中，分別于第4、8、12、16、20、24 d對活體幼蟲進(jìn)行計數(shù)，統(tǒng)計各組成活率。試驗(yàn)結(jié)束時計算幼蟲殼長的特定生長率(SGR)：

SGR/%·d-1=(lnL2-lnL1)/t×100%

式中，L2和L1為試驗(yàn)結(jié)束及開始時的殼長(μm)，t為試驗(yàn)持續(xù)的時間(d)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對不同投喂組間幼蟲的特定生長率和成活率進(jìn)行顯著性t檢驗(yàn)。用Sigmaplot 12.0軟件作圖。

2 結(jié) 果

2.1 長肋日月貝幼蟲攝食不同餌料時的殼長及特定生長率

不同種類的餌料對長肋日月貝幼蟲生長的影響不同。經(jīng)過24 d的投喂試驗(yàn)，各投喂組殼長171～227 μm(表1)。綠色巴夫藻+海洋紅酵母組幼蟲的殼長最大，釀酒酵母組最小。攝食單胞藻的幼蟲殼長顯著大于攝食酵母類幼蟲(P<0.05)；24 d長肋日月貝幼蟲殼長依次為綠色巴夫藻+海洋紅酵母>球等鞭金藻+海洋紅酵母>牟氏角毛藻+海洋紅酵母>綠色巴夫藻>球等鞭金藻>牟氏角毛藻>海洋紅酵母>釀酒酵母+海洋紅酵母>釀酒酵母。

表1 長肋日月貝幼蟲攝食不同餌料時的殼長 μm

注： 同一列中標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05),下同.

不同餌料條件下各組長肋日月貝幼蟲殼長的特定生長率為1.98%/d ～3.16%/d(圖1)。由圖1可見，單一投喂組中，投喂單胞藻類長肋日月貝幼蟲的特定生長率顯著高于酵母類(P<0.05)，投喂釀酒酵母組的幼蟲特定生長率最低，為(1.98±0.11)%/d，其次為為海洋紅酵母組，兩者差異顯著(P<0.05)；單一投喂組中，綠色巴夫藻組幼蟲的特定生長率最高，為(2.97±0.13)%/d，其次為球等鞭金藻組，與綠色巴夫藻組和牟氏角毛藻組差異不顯著(P>0.05)。

搭配海洋紅酵母混合投喂組長肋日月貝幼蟲的特定生長率均比相應(yīng)的單一投喂組高，其差異規(guī)律與單一投喂組基本一致(圖1)。綠色巴夫藻+海洋紅酵母組的特定生長率最高，達(dá)到(3.16±0.24)%/d，其次為球等鞭金藻+海洋紅酵母組和牟氏角毛藻+海洋紅酵母組，但這3組的特定生長率差異不顯著(P>0.05)，釀酒酵母+海洋紅酵母組的特定生長率為混合投喂組中最低，顯著低于其他3個混合投喂組(P<0.05)。

2.2 不同餌料條件下長肋日月貝幼蟲各時期的成活率

攝食不同餌料時長肋日月貝幼蟲的成活率見表2。自試驗(yàn)第4 d開始，部分處理組的成活率出現(xiàn)了較顯著的差異，投喂酵母類的幼蟲的成活率較投喂單胞藻的低，均低于90%；單獨(dú)投喂釀酒酵母幼蟲的成活率最低，僅有(42.46±4.20)%，至第8 d，成活率降至(8.37±0.92)%；投喂單胞藻的各試驗(yàn)組間幼蟲成活率差異不顯著(P>0.05)。隨著時間的推移，各投喂組幼蟲成活率差異逐漸增大，且成活率的下降速度也各不相同。到第12 d，單胞藻投喂組幼蟲成活率均高于70%，為71.57%～75.96%，球等鞭金藻+海洋紅酵母投喂組幼蟲的成活率最高，而釀酒酵母投喂組的幼蟲已全部死亡；16～20 d，各投喂組幼蟲的成活率均出現(xiàn)較大的下降，除海洋紅酵母投喂組外，其他投喂組幼蟲的成活率下降幅度均超過20%；至第20 d，海洋紅酵母投喂組幼蟲成活率均低于30%，釀酒酵母+海洋紅酵母投喂組幼蟲成活率最低，僅有(7.55±4.12)%。試驗(yàn)結(jié)束時，單胞藻投喂組幼蟲成活率為14.24%～17.21%，而海洋紅酵母投喂組低于10%，與海洋紅酵母搭配的各投喂組幼蟲成活率均高于相應(yīng)的單胞藻投喂組。所有投喂組中，幼蟲成活率最高的為球等鞭金藻+海洋紅酵母投喂組，其次為綠色巴夫藻+海洋紅酵母投喂組、球等鞭金藻投喂組、綠色巴夫藻投喂組，以上各組間幼蟲成活率差異不顯著(P>0.05)，牟氏角毛藻投喂組的成活率則稍低，海洋紅酵母投喂組成活率高于釀酒酵母+海洋紅酵母投喂組。

圖1 長肋日月貝幼蟲攝食不同餌料時殼長的特定生長率柱狀圖上方不同字母表示差異顯著(P<0.05).

表 2 長肋日月貝幼蟲攝食不同餌料時的成活率 %

注：上標(biāo)不同字母表示各行間差異顯著(P<0.05).

3 討 論

3.1 不同餌料的營養(yǎng)特性

金藻、角毛藻及部分綠藻等單胞藻是廣泛用于貝類人工苗種培育中的主要餌料。單胞藻將環(huán)境中的無機(jī)物質(zhì)轉(zhuǎn)入到食物鏈，形成碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)等產(chǎn)物，是生態(tài)系統(tǒng)中的初級生產(chǎn)者。不飽和脂肪酸是對幼蟲生長存活有重要影響的營養(yǎng)物質(zhì)[12-14]。已有研究表明，球等鞭金藻的總脂含量較高，為23.50%～29.70%，多不飽和脂肪酸二十二碳六烯酸的含量也較高，可達(dá)11.12%，而二十碳五烯酸含量則較低，少于2%；同屬金藻門的綠色巴夫藻的二十二碳六烯酸含量稍低，為4.10%～7.04%，二十碳五烯酸含量較高，達(dá)到21.66%～27.50%；硅藻門的牟氏角毛藻的總脂含量約為球等鞭金藻的一半，僅有15.07%，二十二碳六烯酸含量少，而二十碳五烯酸含量則較高，達(dá)13.04%[15-16]。酵母類的營養(yǎng)特征與以上幾種單胞藻不同，其多不飽和脂肪酸含量較低，但蛋白質(zhì)和碳水化合物含量較高，分別達(dá)56%和36%，同時亦含有較高的B族維生素和一定的蝦青素[17]。其中，釀酒酵母細(xì)胞壁中β-1,3-葡聚糖和甘露寡糖含量極高，約占細(xì)胞壁干質(zhì)量的95%，可促進(jìn)水產(chǎn)動物的生長，增強(qiáng)非特異性免疫力[18-20]；而海洋紅酵母中含有大量的類胡蘿卜素，對清除自由基和增強(qiáng)免疫力同樣具有促進(jìn)作用[21-22]。本研究用不同種類餌料投喂長肋日月貝幼蟲，其營養(yǎng)的互補(bǔ)作用在一定程度上促進(jìn)了長肋日月貝幼蟲的生長，提高幼蟲的成活率。

3.2 餌料種類與長肋日月貝幼蟲生長、成活的關(guān)系

在海洋生態(tài)系統(tǒng)中，單胞藻是海洋貝類幼蟲的主要天然餌料，但不同種類的單胞藻對貝類幼蟲的影響并不相同。在面盤幼蟲期，投喂巴夫藻對珠母貝(P.margaritifera)幼蟲最有利，進(jìn)入殼頂期后，巴夫藻+牟氏角毛藻則為最適餌料[23]；國外學(xué)者利用巴夫藻投喂長牡蠣(Crassostreagigas)幼苗獲得最高的生長率，金藻則次之[24]。本研究中，綠色巴夫藻和球等鞭金藻投喂組是長肋日月貝幼蟲生長和成活最高的單一投喂組，綠色巴夫藻組特定生長率稍高于球等鞭金藻組，而球等鞭金藻組的成活率在單胞藻單一投喂組中最高。這與已有研究結(jié)果相似，即同為金藻門的綠色巴夫藻和球等鞭金藻是長肋日月貝幼蟲的優(yōu)質(zhì)適口餌料。二十二碳六烯酸的攝取量與紫貽貝(Mytilusgalloprovincialis)幼苗的存活有明顯的相關(guān)性，而二十碳五烯酸的攝取量則與幼苗的附著有關(guān)[25]。在生產(chǎn)中，富含二十碳五烯酸及二十二碳六烯酸的金藻培養(yǎng)密度高，增殖速度快，易大規(guī)模培養(yǎng)，是規(guī)?；绶N培育中最常用的適口餌料。

本試驗(yàn)中，單胞藻餌料組長肋日月貝幼蟲的特定生長率和成活率均顯著高于酵母組，可能是單胞藻的營養(yǎng)組分更利于長肋日月貝幼蟲生長。投喂釀酒酵母的長肋日月貝幼蟲幾乎全部死亡，這一結(jié)果與方斑東風(fēng)螺(Babyloniaareolata)[26]的投喂試驗(yàn)結(jié)果相似。攝食扁藻(Platymonas)、小球藻(Chlorella)和金藻的方斑東風(fēng)螺幼體成活率均高于50%，而攝食酵母的螺苗則全部死亡；同樣，攝食單一自溶釀酒酵母的企鵝珍珠貝(Pteriapenguin)幼蟲在10 d后全部死亡[27]。而單獨(dú)投喂干酵母卻明顯提高了華貴櫛孔扇貝(C.nobilis)幼蟲的成活率，在所有試驗(yàn)組中成活率最高，金藻+扁藻組幼蟲的生長速度最快[28]?？梢姡煌愵愑紫x對酵母營養(yǎng)的利用效率并不一致。本研究中，單獨(dú)投喂釀酒酵母的長肋日月貝幼蟲全部死亡，可能是酵母未經(jīng)自溶處理，細(xì)胞壁難以消化，導(dǎo)致幼體缺少營養(yǎng)供給所致。馬氏珠母貝(P.martensi)攝食經(jīng)過18 h自溶處理的酵母時，成活率與金藻組差異不顯著，而生長速度卻顯著高于金藻組，單獨(dú)投喂未經(jīng)自溶處理的酵母，幼蟲不能成活[29]?？梢?，經(jīng)過適宜自溶處理的釀酒酵母的營養(yǎng)物質(zhì)可能更易于有效地被貝類幼蟲吸收利用。

3.3 海洋紅酵母在海洋貝類育苗中的應(yīng)用

海洋紅酵母是存活于海洋環(huán)境中的一類真菌生物，是溞類培養(yǎng)[30-31]、海參育苗[32]等海洋經(jīng)濟(jì)動物生產(chǎn)中的餌料。在仿刺參規(guī)?；缰?，海洋紅酵母甚至可完全代替單胞藻。海洋紅酵母在貝類育苗中的應(yīng)用已有較多研究。但本試驗(yàn)單獨(dú)投喂海洋紅酵母幼蟲的成活率和生長率均較低，試驗(yàn)結(jié)束時僅有少量幼蟲存活。海灣扇貝(Argopectenirradians)稚貝攝食3種單一的海洋酵母，30 d成活率仍為46.5%～57.5%，約為單獨(dú)投喂金藻的50%[11]，然而扇貝幼蟲攝食單一海洋酵母在12 d內(nèi)全部死亡[30]?？梢妴为?dú)投喂海洋酵母并不適宜幼蟲的生長，但稚貝卻能更好地適應(yīng)海洋酵母的營養(yǎng)供給。海洋紅酵母與單胞藻混合投喂，對海洋貝類幼蟲的生長和成活影響并不一致，在馬氏珠母貝等3種貝類的開口餌料投喂試驗(yàn)中，單胞藻與海洋紅酵母混合投喂的特定生長率較單獨(dú)投喂單胞藻高，而成活率卻較低[31]，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。本試驗(yàn)中，投喂海洋紅酵母與搭配較低比例單胞藻時，長肋日月貝幼蟲特定生長率均較投喂相應(yīng)的單胞藻餌料組高，而其成活率除綠色巴夫藻外，其他混合組則較相應(yīng)的單一投喂組低?？梢?，海洋紅酵母并不一定有利于海洋貝類幼蟲的成活，而海洋紅酵母和綠色巴夫藻搭配投喂可能對長肋日月貝幼蟲的生長和成活有利。