李素貞 陳茹梅

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，北京 100081）

鋅鐵作為植物營養(yǎng)所必需的微量元素，雖然用量很少，但對(duì)于植物的生長和發(fā)育是必不可少的。鐵元素在光合作用、呼吸作用和葉綠素生物合成等反應(yīng)中起著重要的作用［1］。我國華北平原、黃河故道和西北黃土高原等地，其土壤pH值高達(dá)7.5-8.5，并富含游離碳酸鈣，因而缺鐵現(xiàn)象較為嚴(yán)重［2］。植物缺鐵表現(xiàn)出葉片變黃，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)的降低。人類缺鐵會(huì)出現(xiàn)貧血，嚴(yán)重危害孕婦及兒童的健康［3-4］。世界上約三分之一的人群面臨著不同程度的缺鐵所造成的健康問題。鋅是生物體內(nèi)多種酶的輔助因子［5］，參與機(jī)體的各種代謝［6］。石灰性土壤、鹽堿土和砂性土壤有機(jī)質(zhì)含量低、保肥蓄水能力差，所以這幾類土壤嚴(yán)重缺鋅［7］。植物缺鋅會(huì)導(dǎo)致節(jié)間縮短、葉子向內(nèi)卷曲及葉片變小等［7］，嚴(yán)重缺鋅會(huì)導(dǎo)致植物生長受阻進(jìn)而影響植物的產(chǎn)量和品質(zhì)。人類缺鋅會(huì)導(dǎo)致生長發(fā)育緩慢、智力發(fā)育低下、營養(yǎng)不良等［8］。世界約17.3%的人口面臨著鋅吸收不足的威脅［9］。鋅鐵對(duì)于植物的生長及提高谷物的產(chǎn)量是至關(guān)重要的，人們依賴從植物中獲得日常膳食所需的鋅鐵。所以，增加植物獲得鋅鐵的能力，對(duì)植物的生長發(fā)育和人類的健康具有重要的意義。為實(shí)現(xiàn)這一目的，揭示植物應(yīng)答及獲得鋅鐵的機(jī)制是至關(guān)重要的。鋅鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Zinc-regulated transporters，Iron-regulated transporter-like protein，ZIP）家族蛋白在鋅鐵吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)中有重要作用。ZIP家族蛋白一般由309-476個(gè)氨基酸組成，絕大部分成員具有8個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域及相似的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。第III、IV跨膜區(qū)之間有一長的可變區(qū)，可變區(qū)位于胞內(nèi)，其C、N末端位于胞外，該區(qū)富含組氨酸殘基，可能與二價(jià)金屬離子的結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)［10］。ZIP通過將二價(jià)金屬離子吸收轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)保持體內(nèi)離子的平衡。表1為近年來已經(jīng)在擬南芥、水稻及其它植物中開展的一些相關(guān)基因功能的研究工作。

1 ZIP家族基因在植物中的研究

1.1 擬南芥中ZIPs家族基因的研究

擬南芥（Arabidopsis thaliana）中有16個(gè)ZIP基因，AtIRT1是首先被鑒定的基因，主要在擬南芥的根中表達(dá)，AtIRT1能夠互補(bǔ)酵母鐵突變體的功能。AtIRT1是鐵轉(zhuǎn)運(yùn)體，irt1突變體導(dǎo)致葉片黃化致死表型，并且表現(xiàn)出明顯的發(fā)育缺陷，包括減少了葉綠體類囊體在基粒中的疊加，影響葉片柵欄薄壁細(xì)胞的分化，莖中維管束數(shù)目的減少以及根的皮層及內(nèi)皮層細(xì)胞排列不規(guī)則等。并且irt1突變體導(dǎo)致鐵在莖葉的積累減少。irt1突變體應(yīng)答缺鋅及缺鐵是通過激活ZIP1在莖葉的表達(dá)，降低ZIP2及增強(qiáng)IRT2在根部的表達(dá)來保持體內(nèi)鋅鐵平衡的［11］。以上結(jié)果說明AtIRT1對(duì)于植物的正常發(fā)育以及體內(nèi)鋅鐵平衡的調(diào)節(jié)是必需的。35S（The cauli fl ower mosaic virus 35S promoter）啟動(dòng)AtIRT1的過表達(dá)植株中，mRNA在整個(gè)植物體內(nèi)均有表達(dá)，而其蛋白只在缺鐵的根中檢測(cè)到，說明AtIRT1是受轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)的［12］。高鎳誘導(dǎo)AtIRT1的表達(dá)，缺鐵條件下，AtIRT1能夠?qū)е骆嚨暮吭跀M南芥中積累，說明鎳的積累是由于AtIRT1在鐵的吸收過程中導(dǎo)致的結(jié)果［13］。AtIRT2是與AtIRT1高度相似的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)體，能夠恢復(fù)鐵缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性。其主要在根中表達(dá)，受缺鐵誘導(dǎo)，并且IRT2啟動(dòng)子與報(bào)告基因的融合實(shí)驗(yàn)證明AtIRT2主要在根頂端的外層細(xì)胞表達(dá)，說明AtIRT2在缺鐵條件下能夠從土壤中吸收鋅與鐵［14］。之后的研究證明AtIRT2定位于囊泡，其可能通過對(duì)鐵的區(qū)室化起到解毒的作用［15］。AtIRT3能夠互補(bǔ)鋅缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，其蛋白定位于質(zhì)膜。過表達(dá)AtIRT3能夠使莖葉鋅的含量增加，根中鐵的含量增加。證明AtIRT3具有鋅鐵轉(zhuǎn)運(yùn)功能［16］。

AtZIP1-AtZIP5、AtZIP9-AtZIP12及AtIRT3受缺鋅誘導(dǎo)，所以這些基因可能對(duì)于鋅的吸收有作用［17］。有研究證明AtZIP1-AtZIP3在酵母中具有鋅的吸收活性，AtZIP1與AtZIP3在缺鋅的根中表達(dá)，推測(cè)其可能具有從土壤中吸收鋅的功能。AtZIP2的表達(dá)在根中未檢測(cè)到，而AtZIP4在缺鋅的根及莖葉均有表達(dá)，所以AtZIP4可能在細(xì)胞內(nèi)或者植物組織間轉(zhuǎn)運(yùn)鋅［18］。利用Ubiquitin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)AtZIP1在大麥中過表達(dá)，在短期缺鋅條件下過表達(dá)植株種子中鋅含量是增加的，如果在正常條件及長時(shí)間缺鋅條件下，轉(zhuǎn)基因植株葉片及莖中鋅的含量及生物量與野生型相比無明顯變化。但在缺鋅條件下，AtZIP1轉(zhuǎn)基因植株從根向莖葉的轉(zhuǎn)運(yùn)效率比野生型升高，所以土壤條件會(huì)影響轉(zhuǎn)基因植物對(duì)鋅的獲得［19］。AtZIP1及AtZIP2能互補(bǔ)鋅與銅的酵母突變體活性，推測(cè)其吸收鋅及銅。AtZIP1及AtAIP2均在根的中柱表達(dá)，AtZIP1也在葉的維管束表達(dá)，且其蛋白定位至液泡膜，而AtZIP2定位于質(zhì)膜。T-DNA插入突變體進(jìn)行功能研究，說明AtZIP1及AtZIP2從根向莖葉轉(zhuǎn)運(yùn)銅（可能轉(zhuǎn)運(yùn)鋅）。AtZIP1可能具有將銅從液泡轉(zhuǎn)運(yùn)至中柱細(xì)胞，進(jìn)而運(yùn)至木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的功能；AtZIP2可能具有將銅（或鋅）吸收至根的中柱細(xì)胞，進(jìn)而轉(zhuǎn)運(yùn)至木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的功能［20］。

1.2 水稻中ZIPs家族基因的研究

ZIP家族基因在水稻（Oryza sativaL.）中也有研究，目前已知水稻ZIP基因家族包含16個(gè)成員。OsIRT1與OsIRT2是水稻中的兩個(gè)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)體，其主要在根中受缺鐵誘導(dǎo)表達(dá)。在酵母中其能互補(bǔ)鐵突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性［21］。在水稻中過表達(dá)OsIRT1可增強(qiáng)植物對(duì)缺鐵的耐受力，并且植物的株型發(fā)生變化，在生殖生長階段轉(zhuǎn)基因植株與野生型相比株高降低、分蘗數(shù)減少。此外，轉(zhuǎn)基因植物對(duì)高鋅與高鎘比較

敏感，說明OsIRT1也轉(zhuǎn)運(yùn)鋅和鎘。過表達(dá)OsIRT1可使水稻的根、莖、葉和成熟種子中鋅鐵的含量提高，說明OsIRT1可用于強(qiáng)化谷物中的鋅鐵含量［22］。在缺鋅條件下，OsZIP1與OsZIP3在根和莖葉中的表達(dá)量均升高，而OsZIP2的表達(dá)量主要在根中升高；原位雜交實(shí)驗(yàn)證明，OsZIP1和OsZIP3主要在莖葉的維管束、根的維管束和韌皮部細(xì)胞表達(dá)［23］。后續(xù)研究表明oszip3突變體與野生型之間鋅的含量有顯著差異，突變體地上部（不包括基部）鋅的含量升高，地上基部區(qū)域鋅的含量下降。通過同位素標(biāo)記67Zn示蹤，發(fā)現(xiàn)突變體中鋅的含量在下部葉片中較高，在地上部伸長區(qū)和節(jié)點(diǎn)處含量較少，表明OsZIP3負(fù)責(zé)將鋅從木質(zhì)部卸載并優(yōu)先分配到正在生長發(fā)育的組織中［24-25］。OsZIP4主要在缺鋅的根與莖葉中表達(dá)，在缺鋅條件下，OsZIP4的轉(zhuǎn)錄水平在根和莖葉中均比OsZIP1和OsZIP3高。此外，OsZIP4能夠互補(bǔ)鋅突變的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，說明OsZIP4是鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體。OsZIP4-GFP定位于洋蔥表皮的質(zhì)膜，原位雜交實(shí)驗(yàn)證明，其在缺鋅條件下的根與莖葉的韌皮部和分生組織中表達(dá)，推測(cè)OsZIP4可能負(fù)責(zé)鋅在水稻中的轉(zhuǎn)運(yùn)［26］。利用35S啟動(dòng)子啟動(dòng)OsZIP4在水稻中過表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因水稻根中鋅的含量比野生型升高約100倍，而莖葉及種子中鋅的含量分別降低了5倍和4倍。Northern及實(shí)時(shí)定量PCR證明35S啟動(dòng)的OsZIP4在根及莖葉中均有表達(dá)，而內(nèi)源的OsZIP4在根中的表達(dá)量降低，在莖葉中的表達(dá)量升高。這些結(jié)果表明過表達(dá)OsZIP4改變了鋅在水稻中的分布，并且需要嚴(yán)格調(diào)節(jié)OsZIP4的表達(dá)來保持體內(nèi)鋅的平衡［27］。在缺鋅、缺鐵和缺錳誘導(dǎo)時(shí)，OsZIP6在地上部表達(dá)水平升高3倍，但只有缺鐵條件下根中OsZIP6表達(dá)量才能夠升高3倍［28］。OsZIP7a在缺鐵的根中表達(dá)，而OsZIP8在缺鋅的根及莖葉均有表達(dá)；OsZIP7a與OsZIP8分別互補(bǔ)酵母缺鐵及缺鋅突變體活性。說明OsZIP7a與OsZIP8分別是鐵與鋅的轉(zhuǎn)運(yùn)體［29］。OsZIP5與OsZIP8是缺鋅誘導(dǎo)的基因，能夠互補(bǔ)酵母鋅突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，其蛋白均定位于質(zhì)膜。過表達(dá)OsZIP5及OsZIP8使水稻根中的鋅含量增加，而莖葉中鋅的含量減少。結(jié)果說明OsZIP5與OsZIP8是鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體，并且對(duì)鋅在水稻中的分布有重要作用［30-31］。OsZIP9與OsZIP5是高度相似的蛋白，OsZIP9也受缺鋅誘導(dǎo)，并且能互補(bǔ)OsZIP5的功能［30］。說明OsZIP9與OsZIP5是水稻中具有相似的功能鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體。

表1 已知ZIPs家族成員及功能

1.3 大麥中ZIPs家族基因的研究

大麥（Hordeum vulgare）中共鑒定了13個(gè)ZIP基因，HvIRT1與水稻OsIRT1同源，其在酵母中轉(zhuǎn)運(yùn)鋅、鐵、錳及鎘。HvIRT1受缺鐵、缺錳誘導(dǎo)，其蛋白定位于質(zhì)膜。HvIRT1的表達(dá)與錳的吸收效率是一致的，說明HvIRT1對(duì)于錳在大麥根中的吸收有重要作用［32］。隨后通過酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明了大麥中的3個(gè)鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體HvZIP3、HvZIP5和HvZIP8。HvZIP8在大麥的根中表達(dá)，而HvZIP3與HvZIP5在缺鋅的根中表達(dá)。這些結(jié)果說明HvZIP3、HvZIP5和HvZIP8是在大麥根中參與鋅平衡的轉(zhuǎn)運(yùn)體［33］。HvZIP7在根及莖葉中均受缺鋅誘導(dǎo)，其蛋白定位于質(zhì)膜。過表達(dá)HvZIP7在高鋅條件下莖葉鋅的積累升高，其它離子鐵、錳、銅、鎘均無明顯變化。說明HvZIP7是有功能的鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體［34］。后續(xù)研究對(duì)大麥中的13個(gè)ZIPs基因進(jìn)行表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)HvZIP3、HvZIP7、HvZIP8、HvZIP10、HvZIP13與HvZIP5在根中表達(dá)，在缺鋅條件下基因表達(dá)量是有鋅條件下的3倍，并且在莖葉中升高14倍。而HvZIP2的表達(dá)在缺鋅的根中升高1.5倍，在莖葉中升高5倍。再重新提供有鋅的條件，以上7個(gè)基因在莖葉中的表達(dá)量與缺鋅條件下無明顯差異，比在最初有鋅的條件下表達(dá)量略有降低。重新提供鋅，HvZIP2與HvZIP10在根中的表達(dá)量比缺鋅條件有所降低，而其它5個(gè)基因在根中的表達(dá)量升高。HvIRT1、HvZIP1、HvZIP11、HvZIP14、HvZIP16與HvZIP6不受缺鋅誘導(dǎo)，再重新提供鋅時(shí)基因表達(dá)也無明顯變化。HvZIP3、HvZIP5、HvZIP7、HvZIP8、HvZIP10和HvZIP13蛋白均定位于質(zhì)膜。以上結(jié)果說明HvZIP3、HvZIP5、HvZIP7、HvZIP8和HvZIP-13這5個(gè)HvZIPs基因?qū)τ趯\吸收至根并轉(zhuǎn)運(yùn)至莖葉中有重要作用（重新提供鋅的條件下）［35］。

1.4 蒺藜苜蓿中ZIPs家族基因的研究

在苜蓿（Medicago truncatula）中共鑒定了7個(gè)ZIP基因，首先報(bào)道的ZIP基因是MtZIP2，其在酵母中能轉(zhuǎn)運(yùn)鋅，MtZIP2蛋白定位于質(zhì)膜，在苜蓿的根與莖中表達(dá)。不像其它ZIP一樣，MtZIP2是高鋅誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)體。說明MtZIP2可能對(duì)于鋅的解毒有作用［36］。后來鑒定了 MtZIP1、MtZIP3、MtZIP4、MtZIP5、MtZIP6和 MtZIP7共 6個(gè) MtZIPs蛋 白，MtZIP1、MtZIP5和MtZIP6能恢復(fù)酵母鋅缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，MtZIP4和MtZIP7能恢復(fù)酵母錳缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，MtZIP3、MtZIP5和MtZIP6能恢復(fù)酵母鐵缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性。表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，MtZIP1在缺鋅苜蓿的根及葉中均有表達(dá)；MtZIP3與MtZIP4在缺鐵的葉片中表達(dá)量下降，而在缺鋅的根及葉中表達(dá)上調(diào)；MtZIP5在缺鋅及缺錳的葉片中表達(dá)量升高；MtZIP6與MtZIP7的表達(dá)不受金屬離子濃度的影響。以上結(jié)果說明MtZIPs具有不同的離子選擇性，并且對(duì)植物體內(nèi)金屬離子的調(diào)節(jié)及保持金屬離子的平衡具有不同的作用［37］。進(jìn)一步研究表明MtZIP1對(duì)鋅的親和力比MtZIP5與MtZIP6 低［38］。

1.5 玉米中ZIPs家族基因的研究

本實(shí)驗(yàn)室在玉米（Zea maysL.）中共鑒定了9個(gè)ZmZIPs基因，分別將玉米中的9個(gè)ZIP基因命名為ZmZIP1-8及ZmIRT1。前期的工作對(duì)玉米幼苗、授粉后不同天數(shù)的胚和胚乳進(jìn)行了Real-time RT-PCR表達(dá)分析。結(jié)果顯示，ZmIRT1在缺鐵玉米的根和莖葉中表達(dá)均上調(diào)，ZmZIP4、ZmZIP5、ZmZIP7、ZmZIP8在高鐵處理?xiàng)l件下表達(dá)上調(diào)。這些結(jié)果說明ZmIRT1可能對(duì)鋅和鐵的吸收起著一定的作用，ZmZIP4、ZmZIP5、ZmZIP7及ZmZIP8可能與鐵的儲(chǔ)存和解毒有關(guān)。ZmZIP4主要在胚中表達(dá)，ZmZIP5在胚和胚乳中均有表達(dá)，推測(cè)ZmZIP4和ZmZIP5可能對(duì)胚根和胚芽的生長有重要作用。然而，ZmIRT1和ZmZIP6在胚發(fā)育的后期表達(dá)量上調(diào)，推測(cè)ZmIRT1和ZmZIP6可能與胚的成熟有關(guān)。這些結(jié)果說明ZmIRT1、ZmZIP4、ZmZIP5和ZmZIP6可能在胚和胚乳的發(fā)育過程中具有非常重要的作用，推測(cè)它們與籽粒中鋅或鐵的積累有關(guān)。ZmZIPs-GFP融合蛋白定位于質(zhì)膜與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，推測(cè)ZmZIPs可能在植物細(xì)胞中起吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)存鋅鐵的作用，也可能參與鋅鐵離子的解毒。酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)顯示ZmIRT1在低鋅和低鐵條件下分別能顯著地互補(bǔ)fet3fet4DEY1453和zrt1zrt2ZHY3突變體的功能，其它基因表現(xiàn)出不同程度的互補(bǔ)功能。證實(shí)了ZmZIPs可能在鋅鐵吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起主要作用［39］。后續(xù)研究中，將ZmIRT1、ZmZIP3及ZmZIP7在擬南芥中過表達(dá)。ZmIRT1能夠增加擬南芥根及種子中的鋅鐵含量，ZmZIP3將較多的鋅聚集于根中，ZmZIP7使鋅鐵在根中積累及鐵在種子中積累。ZmIRT1及ZmZIP7的過表達(dá)激活了擬南芥中鐵吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)，而ZmZIP3過表達(dá)抑制了鐵吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)。以上結(jié)果說明，ZmZIPs在保持體內(nèi)鋅鐵平衡中具有不同的作用［40-41］。

1.6 其它植物中ZIPs基因的研究

番茄（Lycopersicon esculentum）中鑒定了LeIRT1與LeIRT2兩個(gè)基因，其主要在番茄的根中表達(dá)，LeIRT2的表達(dá)水平不受鐵離子水平的影響，而LeIRT1受缺鐵誘導(dǎo)。酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明LeIRT1與LeIRT2均能互補(bǔ)鐵缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，并且也能互補(bǔ)鋅、銅與錳缺陷突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，說明LeIRT1與LeIRT2能夠轉(zhuǎn)運(yùn)多種金屬離子［42］。在大豆中分離了一個(gè)ZIP基因GmZIP1，Nothern分析發(fā)現(xiàn)GmZIP1在缺鋅23 d的大豆根、莖及葉片中沒有表達(dá)，但是在根瘤中有表達(dá)，并且隨著缺鋅天數(shù)的增加其在根瘤中的表達(dá)量逐漸升高。推測(cè)大豆GmZIP1可能在大豆與根瘤菌的共生關(guān)系中發(fā)揮作用［43］。葡萄（Vitis viniferaL.）中的VvZIP3主要在生殖器官尤其在發(fā)育的花中表達(dá)，能恢復(fù)缺鋅酵母突變體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性，其蛋白定位于質(zhì)膜。并且鋅在葡萄各個(gè)組織中的積累與其表達(dá)量呈正相關(guān)，說明VvZIP3是有功能的鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體［44］。蘋果（Malus xiaojinensis）中的MxIRT1是鐵轉(zhuǎn)運(yùn)體，在水稻中過表達(dá)MxIRT1能夠增加水稻對(duì)缺鋅、缺鐵的耐受性，并且能夠增加水稻種子中的鋅鐵含量，但是鎘的含量降低。說明MxIRT1是生物強(qiáng)化籽粒中鋅鐵含量比較好的基因［45］。野生二粒小麥（Triticum turgidum）中克隆的TdZIP1為缺鋅誘導(dǎo)的鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體，其定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，過表達(dá)TdZIP1導(dǎo)致鋅在細(xì)胞內(nèi)的積累對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性［46］。說明鋅鐵的平衡必須嚴(yán)格的調(diào)節(jié)才能保證植物的正常生長發(fā)育。

2 結(jié)語

通過對(duì)多種植物中ZIP的研究表明，不同ZIP基因在植物中的表達(dá)部位、蛋白的亞細(xì)胞定位、對(duì)于二價(jià)金屬離子的選擇性以及各基因在植物吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及儲(chǔ)存鋅鐵中的功能是有區(qū)別的。因此，對(duì)ZIP在植物中不同功能的了解，有助于根據(jù)不同需求選擇基因進(jìn)行有效利用。例如，利用ZIP和其它有利于鋅鐵在種子中富集的基因，增加籽粒中的鋅鐵含量，直接或間接緩解人類攝入鋅鐵不足的狀況；利用將鋅鐵聚集于莖稈及葉片中的基因在植物中過表達(dá)增加地上部組織中的鋅鐵含量，飼喂牲畜滿足其對(duì)微量元素的需求；對(duì)該家族中吸收儲(chǔ)存重金屬鎘的基因加以改造，使其特異地將鎘聚集于植物中，從而減輕土壤中重金屬的污染，是通過生物對(duì)土壤進(jìn)行修復(fù)和改良的重要發(fā)展方向。