胃腸道腫瘤是常見的惡性腫瘤，有關腫瘤指標或標志方面的研究報道文獻較多，但對于細胞質(zhì)胸苷激酶1（Thymidine kinase 1，TK1）的研究尚不多見。TK1與細胞的增殖有關，在DNA的合成中將胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)換為單磷酸胸腺嘧啶，是嘧啶補救合成途徑中的關鍵調(diào)節(jié)酶[1]近期有研究有表明腫瘤細胞中高水平的TK1可以從細胞周期中的S期一直持續(xù)到M期，TK1的表達水平與DNA的合成具有一致性，在增殖細胞中水平升高[2]，提示TK1的表達水平可以作為腫瘤細胞生長、增殖的一種標志物。研究表明TK1水平升高與多種惡性腫瘤的較差預后相關，如慢性淋巴細胞白血病、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和結直腸癌等[3-5]。因此，本研究化學發(fā)光法檢測65例可手術的胃腸道腫瘤患者的血清TK1表達情況，分析其與可手術胃腸道腫瘤患者臨床病理特征之間的關系及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 病例資料

本院2016年1月—2017年9月本院住院患者65例，其中胃癌29例、結直腸癌36例。均為能手術切除的病例，而將有遠處轉(zhuǎn)移的或不能手術切除的晚期病例均排除在外。對65例患者手術切除的大體病理標本保存的蠟塊，均經(jīng)病理學復查確診明確無誤，并且術前均未為化療或放療。其中，男40例，女25例，年齡23～82歲，平均年齡（64.02±1.82）歲。按照國際AJCC標準對患者術后進行TNM分析，其中I期24例，II期24例，III期10例，IV期7例。隨訪至2018年9月，隨訪時間為11～22個月，TK1陽性和陰性表達患者各失訪1例。

本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準通過，術前均簽注知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器與設備 TK1試劑盒、GIS-1型化學發(fā)光數(shù)字成像分析儀均購自華瑞同康生物技術（深圳）有限公司。所有研究工作均在本院腫瘤科實驗室完成。

1.2.2 TK1測定 患者空腹抽血5 ml，30 min內(nèi)高速離心，取血清備用。制備抗體稀釋液、洗液、封閉液。將內(nèi)含硝酸纖維素膜的膜板平放在一張干凈的濾紙上，不同濃度的標準品按1號、2號、3號的順序點樣到A1、A2、A3位置上，每孔3 μl；待測血清按每孔3μl順序點后面的膜上，室溫下自然晾干。打開膜板，將膜放入反應盒內(nèi)，用配置后的稀釋液振搖洗膜2次，每次5 min。棄去洗滌液，加封閉液，室溫下振搖封閉1 h。加一抗（TK1-IgY），4℃下過夜。棄去反應液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加而抗（生物素化抗IgY二抗），室溫下振搖反應40 min，棄去反應液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加鏈酶親和素-酶復合物，室溫下振搖反應1 h。棄去封閉液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加ECL發(fā)光試劑，過膜浸濕，精確反應1 min。將膜放入CIS-1型化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)內(nèi)進行分析。上述重復3次。取3次測量值均數(shù)，測量值波動范圍為（平均數(shù)±0.5）mg。

1.3 參考值

依據(jù)既往的大樣本臨床試驗研究數(shù)據(jù)確定的血清TK1的參考值，即血清TK1水平0.0～2.0 pmol/L為正常，＞2.0 pmol/L為異常[6]。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件，計量資料以（均數(shù)±標準差）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以（n，%）表示，采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman進行等級相關分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 術前血清TK1表達與臨床病理特點的關系

總陽性表達6例，陽性率9.23%。其中36例腸癌患者TK1陽性3例、陰性33例，而29例胃癌患者TK1陽性3例、陰性26例，兩者之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.08，P＞0.05）.考慮到胃癌和腸癌兩者之間TK1的表達無明顯差異，同時鑒于本組資料相對偏少，因此將兩者合并后再進一步進行統(tǒng)計學分析。SPSS Pearson相關性結果表明：血清TK1的表達男性明顯較多，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.13，P＜0.05），并且TK1表達與Her-2的表達呈正相關關系（r=0.746，P＜0.05），而與年齡、T分期、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、有無貧血之間均無相關關系。胃癌、結直腸癌患者血清TK1表達與臨床特征的關系，見表1。

表1 胃癌、結直腸癌患者血清TK1表達與臨床特征的關系

2.2 血清TK1水平與Ki-67、Hb的關系及其相關性

血清TK1表達水平與Ki-67、Hb水平的關系，見表2和表3。SPSS Pearson相關性結果表明：TK1表達陽性患者的Ki-67水平高于陰性患者，呈正相關性（r=0.396，P＜0.01），而與Hb水平無相關性（r=-0.261 6，P＞0.05）。

表2 TK1陽性、陰性患者Ki-67、Hb水平比較

表3 血清TK1水平與Ki-67、Hb的關系及其相關性

2.3 65例患者手術前后三次血清TK1表達水平的比較

對65例患者進行了血清TK1水平共6個月的追蹤隨訪，以動態(tài)觀察其手術前后以及與化療等治療之間的關系，測定了3次血清TK1水平，即術前1次、術后1個月（化療前）和術后6個月（化療結束后）共3次。3次檢測中，共有TK1陽性9例，其中術前TK1陽性6例（具體結果見表3，病例號1～6）；術后1個月陽性6例，其中新增陽性3例（見表4，病例號7～9）；術后6個月陽性6例，均為術前和術后1個月陽性患者，并無新增病例。

表4 術前、術后1個月、術后6個月血清TK1陽性病例情況

2.4 隨訪結果

隨訪至2018年9月，結果為：TK1陽性死亡3/6（50.0%）、存活3/6（50.00%），TK1陰性死亡5/59（8.47%）、存活54/59（91.53%），兩者比較，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=6.498，P＜0.01）。

3 討論

TK1是細胞周期中S期DNA合成的關鍵調(diào)節(jié)酶[7]，參與DNA合成和修復，與細胞增殖活動密切相關[8]，在腫瘤細胞增殖過程中明顯升高，近期有研究[9]表明食道癌、胃癌、結直腸癌等患者的血清TK1的陽性率高于正常對照組，并且TK1在多種惡性腫瘤中表達上調(diào)，預示著預后不良[3-5，10]。并且對于治療有較大的價值，在肺癌、宮頸癌和肝癌等治療中都有臨床意義[11-12]，表明TK1能夠表示腫瘤細胞的增殖程度、因而可以判斷腫瘤的惡性程度，進而可以判斷腫瘤的治療效果和預后。

本次研究結果表明TK1陽性率為9.23%（6/65），低于Bagegni等[13]TK1在結腸癌中的陽性率59.21%，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是多方面的，可能本研究入組對象均為手術患者，沒有轉(zhuǎn)移等IV期晚期患者，可能影響了TK1的陽性率。同時發(fā)現(xiàn)TK1表達與患者的T分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、分化程度等均無相關關系，與Liu MH等[14]TK1在胃癌、結腸癌和肺癌等中隨著分期有增高趨勢不相一致，與Miettinen等[10]在晚期非小細胞肺癌中與淋巴結轉(zhuǎn)移無關的結果一致、但與其TMN分期有關的結果不一致。本研究分析選擇的病種及其病情程度（即分期等）有關不完全相同有關，比如Liu MH等[14]文章中包含了肺癌等病例，而Miettinen等[10]基本為晚期病例，他們應用的是TMN分期，包括了很多有轉(zhuǎn)移在內(nèi)的IV期患者，而本研究中入組患者均為符合手術治療適應證者，患者均無晚期病例或T分期者。這可能是引起結果不完全一致的主要原因。當然也不排除由于本研究樣本量太小，對于確切的原因，有待于進一步深入研究。

研究發(fā)現(xiàn)TK1的表達與患者的性別、Her-2的表達和Ki-67的水平具有相關性。目前臨床普遍認為：Her-2是胃癌的獨立的不良預后因素，雖然在腸癌中的研究略少，與胃癌患者中表達結果相符。Ki-67是胃腸道腫瘤患者疾病嚴重程度、預后評估的重要指標，通常來說Ki-67陽性表達越高，表明腫瘤惡性程度越高，患者治療預后越差。因此，胃腸道惡性腫瘤患者術前加強患者Ki-67表達水平能評估患者疾病嚴重程度，有助于指導患者手術治療，使得患者的治療更具科學性[11]。但是，本研究中亦存在諸多不足，一方面本研究時間及隨訪時間較短，可能對本研究結果產(chǎn)生偏差；另一方面實驗中納入的病例數(shù)較少，上需要大樣本容量進一步驗證。

綜上所述，胃腸道癌癥患者術前血清TK1的表達與Her-2表達和Ki-67表達有關。檢測術前血清TK1對于指導合理治療和判斷患者的預后有一定意義。