高佳琪 于澤鵬 劉 聰 朱 闊 劉佳樂 蔣維海 王春梅 孫靖輝 陳建光 李 賀

(北華大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，吉林 吉林 132013)

研究表明，老年人的失眠發(fā)病率為49.9%，有10%～27%的老年人依賴催眠藥維持正常睡眠〔1，2〕。盡管應(yīng)用催眠藥可暫時性緩解睡眠障礙，但長期應(yīng)用可導(dǎo)致依賴、作用喪失和藥源性失眠，停藥時還會產(chǎn)生反跳性失眠和夢魘。因此，研發(fā)促睡眠功效明確、無明顯不良反應(yīng)的保健食品已成為人們研究的熱點。尤其是研發(fā)藥食同源的保健食品更受到人們青睞。大棗，系鼠李科棗屬植物棗的果實，是家喻戶曉的健康食品。藥王孫思邈曾在《千金方》中寫道“大棗蔥白湯”專治心煩失眠。日本研究報道，從大棗提取物分離到一種黃酮-雙-葡萄糖甙的混合物，藥理實驗證明其具有鎮(zhèn)靜催眠作用〔3，4〕。果醋以其良好的風(fēng)味、獨特的口感及有效的保健功能已逐漸受到消費者廣泛關(guān)注。本研究以大棗果醋為研究對象，觀察其鎮(zhèn)靜、催眠及抗焦慮作用。

1 材料與方法

1.1實驗動物 健康ICR雄性小鼠，體重(20±2)g，由長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK(吉)：2016-0003。小鼠采取分籠飼養(yǎng)，分籠后放于安靜、溫濕度適宜、通風(fēng)良好的環(huán)境中，自由飲水，合理攝食，適應(yīng)所處環(huán)境1 w后開始實驗。

1.2實驗材料與藥品 大棗果醋由北華大學(xué)五味子開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化工程研究中心提供；戊巴比妥鈉(批號：090919)為北京化學(xué)試劑公司產(chǎn)品；小鼠γ-氨基丁酸(GABA)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒、谷氨酸(Glu)ELISA試劑盒為美國GBD公司產(chǎn)品。

1.3儀器與設(shè)備 YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀和小動物行為學(xué)系統(tǒng)(成都太盟科技有限公司)；全自動酶標(biāo)儀(瑞士Tecan集團)。

1.4實驗方法

1.4.1動物分組及處理 將雄性ICR小鼠隨機分為5組，每組10只，空白對照組(灌胃給予蒸餾水)；地西泮組(①自主活動實驗給予小鼠地西泮2 ml/kg；②協(xié)同戊巴比妥鈉閾/閾下劑量促睡眠實驗及EMP焦慮小鼠行為學(xué)實驗給予小鼠地西泮4 ml/kg)，Jv低劑量組(灌胃給予Jv 2.125 ml/kg)；Jv中劑量組(灌胃Jv 4.250 ml/kg)；Jv高劑量組(灌胃給予Jv 8.500 ml/kg)，各給藥組分別每天給藥灌胃1次，連續(xù)給藥7 d。

1.4.2Jv對小鼠自主活動的影響 將各組小鼠于末次灌胃給藥30 min后，分別置于自主活動記錄儀中，適應(yīng)5 min后開啟自主活動儀，測定5 min內(nèi)各小鼠自主活動次數(shù)和站立次數(shù)。

1.4.3Jv協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉對小鼠的影響 末次灌胃給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射37.5 mg/kg的戊巴比妥鈉，觀察并記錄30 min內(nèi)翻正反射消失1 min以上的實驗小鼠只數(shù)。

1.4.4Jv協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠的影響 于末次灌胃給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射49.5 mg/kg的戊巴比妥鈉，觀察30 min內(nèi)翻正反射消失1 min以上的實驗小鼠數(shù)，觀察并記錄各組小鼠潛伏期及睡眠時間。

1.4.5Jv對高架十字迷宮(EPM)焦慮小鼠行為學(xué)的影響 末次給藥30 min后，將小鼠從中央格面向閉合臂放入迷宮。記錄并計算5 min內(nèi)小鼠進入開放臂次數(shù)比例(OE%)，開放臂停留時間比例(OT%)。

1.4.6Jv對小鼠腦組織GABA和Glu含量的影響 各組小鼠連續(xù)灌胃給藥7 d，于末次給藥后30 min，處死小鼠，取出腦組織，應(yīng)用生物素雙抗體夾心ELISA測定腦組織GABA和Glu含量并計算二者比值。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進行單因素方差分析及t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1Jv對小鼠自主活動的影響 與空白對照組相比較，地西泮和Jv高劑量組小鼠自主活動和站立次數(shù)明顯減少(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2Jv協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠只數(shù)的影響 與空白對照組(1只)相比較，地西泮(9只)和Jv低、中、高劑量組(4只，5只，5只)均能明顯增加睡眠小鼠只數(shù)。

2.3Jv協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠時間和睡眠潛伏期的影響 與空白對照組相比較，地西泮和Jv高劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，睡眠時間明顯延長(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中、劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.4Jv對EPM焦慮小鼠行為學(xué)的影響 與空白對照組比較，Jv中劑量組小鼠OE%明顯升高(P<0.05)；地西泮和Jv高劑量組小鼠OE%、OT%明顯升高(P<0.05或P<0.01)，見表3。

2.5Jv對小鼠腦組織中GABA和Glu含量的影響 與空白對照組比較，Jv高劑量組小鼠腦組織中Glu含量明顯下降，GABA含量和GABA/Glu明顯升高(P<0.05，P<0.01)，Jv中劑量組GABA/Glu明顯升高(P<0.05)，見表4。

表1 大棗果醋對小鼠自主活動的影響次)

與空白對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2 Jv協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠時間和睡眠潛伏期的影響

表3 Jv對EPM焦慮小鼠OE%和OT%影響

表4 Jv對小鼠腦組織GABA和Glu含量的影響

3 討 論

大棗在現(xiàn)代安神方劑中被廣泛應(yīng)用，如酸棗仁湯、甘麥大棗湯、黃連阿膠湯、鎮(zhèn)驚定志湯〔5～7〕，但未見大棗果醋鎮(zhèn)靜催眠方向的相關(guān)報道，本實驗所用大棗果醋由北華大學(xué)五味子開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化工程研究中心經(jīng)醋酸菌發(fā)酵制得，色澤清澈、透明、有光澤，無刺激性氣味，口感協(xié)調(diào)，甜酸適度。小鼠自主活動實驗是評價中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮狀態(tài)的一項重要指標(biāo)。大腦皮層興奮性與小鼠自主活動次數(shù)呈正相關(guān)〔8～10〕。本實驗結(jié)果顯示大棗果醋可減少小鼠自主活動次數(shù)，提示大棗果醋具有一定的鎮(zhèn)靜作用。

通過觀察受試藥對巴比妥類藥物誘導(dǎo)睡眠的影響，是觀察藥物催眠作用的經(jīng)典方法〔11，12〕。本實驗結(jié)果表明，大棗果醋能有效增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠只數(shù)，縮短閾劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期、延長睡眠時間，提示Jv具有明顯的催眠作用。

高架十字迷宮是利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，是國際通用的抗焦慮實驗方法〔13〕，實驗以O(shè)E%及OT%為指標(biāo)來反映動物的焦慮程度，OT和OE增大則表明藥物具有抗焦慮效應(yīng)〔14〕。本研究結(jié)果表明，大棗果醋可增加小鼠的OT%和OE%，提示其具有一定的抗焦慮作用。GABA作為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)能結(jié)合抗焦慮的腦受體并使之激活，阻止焦慮相關(guān)信息抵達(dá)大腦中樞，從而達(dá)到抗焦慮及鎮(zhèn)靜催眠的效果〔15～17〕。Glu作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的作用是與膜后受體結(jié)合，產(chǎn)生興奮性突觸后電位〔18〕。興奮性突觸后電位加大到一定程度時，就導(dǎo)致突觸后神經(jīng)元產(chǎn)生擴布性興奮，傳到整個突觸后神經(jīng)元，使機體處于興奮狀態(tài)〔19，20〕。本實驗結(jié)果表明，大棗果醋可增加小鼠腦組織GABA含量，增加GABA/Glu比值，提示大棗果醋的鎮(zhèn)靜催眠作用與其調(diào)節(jié)GABA和Glu含量有關(guān)。綜上，大棗果醋對小鼠具有鎮(zhèn)靜催眠及抗焦慮作用，該作用可能與其提高腦內(nèi)GABA含量，降低Glu含量有關(guān)。