周芳

近年來, 隨著兒童哮喘發(fā)病率不斷上升, 各醫(yī)療機構(gòu)針對兒童哮喘給予了大量投入和廣泛研究［1-4］。選取本院收治的60例哮喘患兒及60例健康體檢兒作為研究對象, 探討IL-4基因和IL-4R基因多態(tài)性與兒童哮喘的關(guān)系, 為臨床提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月～2017年6月本院收治的60例哮喘患兒(哮喘組)及60例健康體檢兒(健康組)作為研究對象, 所有研究對象及家屬同意并自愿加入本次研究中,經(jīng)過本院倫理委員會批準, 均已簽署知情同意書, 排除有哮喘史及過敏史者。哮喘組中男33例；女27例, 年齡3～15歲,平均年齡(8.58±1.82)歲。健康組中男34例, 女 26例；年齡4～14歲, 平均年齡(8.67±1.85)歲。兩組研究對象一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 所有研究對象基因組DNA采用上海生物工程公司提供的基因組DNA提取試劑盒提取。IL-4(C589T)及IL-4Rα鏈Q576R采用PCR-RFLP分析。以5’-CACTAAACTTGGGAGAAC ATG-GT-3’為引物 P1, 以 5’-TGGGGAAAGA TAGAG TAA-TA-3’為P2, 設(shè)計好引物后,引入錯配堿基, 形成-592 位后會逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐粋€AvaⅡ酶切位點。以48℃30 s和72℃50 s共進行38個循環(huán)為PCR擴增條件, PCR程序95℃30 s, 最后72℃延伸3 min。AvaⅡ酶切條件為195 bp PCR產(chǎn)物-589為C時, 進而產(chǎn)生174、21 bp, 而PCR產(chǎn)物-589為T時則不會被酶切, 其產(chǎn)物為203 bp。采用PCR-RFLP分型IL-4R Q576 R基因多態(tài)性,以 5’-GCCCCCAC CAGTGGCTA CC-3’為 引 物 P3, 以 5’-GAGGTCTTGGAAAGGCTTATAC-3’為 P4, 設(shè)計好引物后 , 以94℃30 s, 58℃30 s和72℃50 s共進行38個循環(huán)為PCR擴增條件, PCR反應(yīng)在95℃預(yù)變性5 min后, 最后72℃延伸5 min。

1.3 觀察指標 比較兩組IL-4 C-589T基因型、IL-4Rα鏈576 QR基因型和等位基因頻率分布情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-4 C-589T基因型和等位基因分布情況比較 兩組IL-4 C-589T等位基因頻率比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表 1。

2.2 兩組IL-4Rα鏈576QR基因型和等位基因分布情況比較 兩組IL-4Rα鏈576QR等位基因頻率比較, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。見表2。

表1 兩組IL-4-589基因型和等位基因分布情況比較［n(%)］

表2 兩組IL-4Rα鏈576QR基因型和等位基因分布情況比較［n(%)］

3 討論

人類IL-4主要由活化T細胞TH2亞群產(chǎn)生, 除此以外, 還可由CD8+、T細胞亞群、肥大細胞等也能產(chǎn)生IL-4。IL-4可促進TH0向TH2方向轉(zhuǎn)化, IL-4所有功能均通過效應(yīng)細胞表面IL-4R介導(dǎo), IL-4Rα鏈是IL-4的高親和力結(jié)合部位［5-9］。

本次研究發(fā)現(xiàn), 在IL-4基因C-589T位點的等位基因頻率比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)。IL-4Rα1 920位A→G, 該位點是STAT 6和SHP-1的接合部位, 從而使谷氨酰胺(Q)被精氨酸(R)所替代, 576位氨基酸的替代可改變該位點與SHP-1的結(jié)合, 而 SHP-1則是通過調(diào)節(jié)STAT 6分子的激活而介導(dǎo)IL-4敏感基因(CD23、MHCⅡ、IgE等)的表達, IL-4都可使用IL-4Rα鏈作為自己受體系統(tǒng)的一部分, 當上訴條件達成時, 從而改變下游信號［10］。所以IL-4Rα在IL-4和IL-13的信號傳導(dǎo)上也起到關(guān)鍵的作用。

綜上所述, 哮喘是由多基因所致的復(fù)雜疾病, IL-4RαR576是小兒哮喘的危險基因因子, 而 IL-4基因-589基因多態(tài)性與哮喘無相關(guān)性。