王小菊，蘇 軍

隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，各類意外事故的發(fā)生率也呈逐年遞增趨勢，脊髓損傷是脊柱損傷最嚴(yán)重的并發(fā)癥。有研究顯示，發(fā)達(dá)國家脊髓損傷發(fā)生率約為每百萬人13.3～45.9例/年；我國上海1991年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，脊髓損傷發(fā)病率約為34.3/百萬[1-2]。脊髓損傷常會引起損傷節(jié)段及下肢功能障礙，不僅對患者生活產(chǎn)生較大的影響，同時還會加重社會醫(yī)療負(fù)擔(dān)。脊髓損傷后，患者損傷部位神經(jīng)組織會發(fā)生極為復(fù)雜的病理變化，其損傷修復(fù)過程受多種因素的影響。西醫(yī)多選擇神經(jīng)營養(yǎng)因子、胚胎脊髓移植等方式來阻止脊髓的繼發(fā)性損傷，但效果仍不理想[3]。丹參川穹嗪在臨床上常用于治療閉塞性腦血管疾病，同時在治療心絞痛、心肌梗死等病癥中效果較好。本課題研究了丹參川穹嗪對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，以期為臨治療脊髓損傷提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選擇雄性SD大鼠24只，由青海生物藥品廠提供，合格證號：SYXK(青)2017-0001，體重210～250 g，隨機(jī)分為兩組，各12只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 丹參川穹嗪注射液購自吉林四長制藥有限公司，規(guī)格5 ml/支。

1.3 脊髓損傷模型制作 按0.1 mg/100 g體重腹腔注射3%戊巴比妥鈉注射液麻醉大鼠，麻醉效果滿意后，備皮，將其俯臥固定于手術(shù)臺上，以T8為中心，于其背部正中做一約3 cm縱行切口，切開皮膚肌肉，暴露T7～T9棘突和錐板，咬除T8棘突及錐板，暴露T8段脊髓；選擇10 g重的沖擊錘，于5 cm高度處落下垂直撞擊脊髓，造成T8段脊髓損傷。生理鹽水沖洗傷口，逐層縫合，于大鼠大腿外側(cè)肌注青霉素，防止感染。模型成功標(biāo)志：撞擊后，大鼠雙下肢迅速回縮及彈動；麻醉效力過后，大鼠雙下肢呈遲緩性癱瘓。

1.4 分組處理 建模成功后，實(shí)驗(yàn)組于1 h內(nèi)腹腔注射丹參川穹嗪注射液，使用劑量為20 mg/100 g，1次/d，連續(xù)使用10 d；對照組給予與實(shí)驗(yàn)組相同劑量的生理鹽水。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 脊髓損傷程度 分別于干預(yù)后第1、7、14及21 d時，使用脊髓運(yùn)動功能（BBB）量表對大鼠的脊髓損傷程度進(jìn)行評估，具體方法是：將受試大鼠置于開口盆內(nèi)，輕敲盆壁，使大鼠爬行，觀察大鼠臀、膝、踝關(guān)節(jié)的行走、軀體運(yùn)功及協(xié)調(diào)情況。滿分21分，得分越高，表明大鼠脊髓損傷程度越小[4]。

1.5.2 運(yùn)動誘發(fā)電位（MEP） 分別于干預(yù)后第1、7、14及21 d時，采用Epoch XP神經(jīng)監(jiān)護(hù)儀（美國Axon公司），檢測大鼠雙后肢MEP。

1.5.3 脊髓殘存面積 于干預(yù)21 d時，腹腔麻醉戊巴比妥鈉麻醉大鼠，使用4%多聚甲醛經(jīng)心灌注固定，取出完整損傷區(qū)脊髓，投入固定液中12 h，而后取出修剪，石蠟包埋，做5 μm的連續(xù)橫切片，HE染色，酒精脫水，二甲苯透明處理，樹脂封片，于顯微鏡下觀察并計(jì)算其脊髓殘存面積。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)不同時間點(diǎn)的比較采用單因素重復(fù)測量方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同時點(diǎn)BBB評分比較 干預(yù)后第1 d，兩組BBB評分比較無顯著差異（P＞0.05）；干預(yù)第7、14及21 d時，兩組BBB評分均逐漸升高，但實(shí)驗(yàn)組BBB評分均顯著高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組不同時點(diǎn)BBB評分比較(n=12)

2.2 兩組不同時點(diǎn)MEP比較 干預(yù)后第1 d，兩組MEP潛伏期及波幅均無顯著差異（P＞0.05）；干預(yù)第7、14及21 d時，兩組MEP潛伏期均逐漸縮短，MEP波幅均逐漸升高，但實(shí)驗(yàn)組MEP潛伏期均低于對照組（P＜0.05），MEP波幅均高于對照組（P＜0.05）。 見表 2。

表2 兩組不同時點(diǎn)MEP比較(n=12)

2.3 兩組脊髓殘存面積比較 在干預(yù)后第21 d，兩組脊髓橫切片均顯示，脊髓組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了明顯的紊亂、萎縮現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)組傷區(qū)脊髓殘存面積為（49.26±5.13）%，對照組為（27.41±4.97）%，兩組比較差異顯著（P＜ 0.05）。

3 討論

脊髓損傷會對相應(yīng)的神經(jīng)產(chǎn)生極大的損傷，部分患者甚至出現(xiàn)終生癱瘓，嚴(yán)重降低其生活質(zhì)量。臨床實(shí)踐指出，急性脊髓損傷大部分并非橫斷性損傷，即仍有部分受損軸突存在，如果此時患者未得到及時有效的干預(yù)，繼發(fā)性損傷往往會使脊髓功能出現(xiàn)永久性喪失，因而現(xiàn)階段醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)在于如何保護(hù)脊髓組織，減少或預(yù)防繼發(fā)性損傷的出現(xiàn)，促進(jìn)脊髓功能的重建。

目前西醫(yī)對脊髓損傷的治療主要為對癥治療、藥物治療及并發(fā)癥治療，其中藥物治療主要目的在于防止受損的脊髓進(jìn)一步損傷，保護(hù)正常脊髓組織，最大程度保護(hù)脊髓神經(jīng)功能，主要藥物有皮質(zhì)類固醇、神經(jīng)節(jié)苷脂、神經(jīng)營養(yǎng)藥、脫水藥等。韓美香等[5]通過對84例急性脊髓損傷患者進(jìn)行分組治療發(fā)現(xiàn)，甲潑尼龍聯(lián)合亞低溫療法能夠顯著提高患者治療有效率，同時能夠改善患者感知功能及運(yùn)動功能。翟宏偉等[6]通過對62例脊髓損傷患者進(jìn)行分組干預(yù)發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)節(jié)苷脂聯(lián)合神經(jīng)生長因子能夠顯著提高患者日常生活能力。

丹參川穹嗪具有擴(kuò)張血管、抗炎抗血栓的作用，臨床上主要被用于治療缺血性心臟病、缺血性腦病等。隨著近年對該藥物研究的深入，其新的藥理作用不斷被發(fā)現(xiàn)。王樂樂等[7]選擇60只脊髓損傷大鼠，分為對照組、丹參組、川芎嗪組及聯(lián)合治療組，對比了治療后4組的BBB評分及MEP評分，結(jié)果顯示，治療后聯(lián)合治療組BBB評分及MEP評分均優(yōu)于對照組。其認(rèn)為川芎嗪為川芎提取出的生物堿，具有消炎消腫、清除氧自由基的功效；丹參具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)的作用。二者聯(lián)用能夠顯著緩解個體脊髓受損后發(fā)生的炎性反應(yīng)，保護(hù)受損的神經(jīng)元，同時加快神經(jīng)元的恢復(fù)，因而聯(lián)合應(yīng)用效果較好。俞勇等[8]通過對89例急性脊髓損傷患者進(jìn)行分組干預(yù)發(fā)現(xiàn)，加用丹參川穹嗪能夠顯著降低患者早期并發(fā)癥的發(fā)生率，同時也能夠降低患者術(shù)后深靜脈血栓、肺動脈栓塞的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，分析認(rèn)為這與丹參川穹嗪能夠有效緩解患者炎性反應(yīng)、促進(jìn)血液微循環(huán)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，干預(yù)第7、14及21 d時，兩組BBB評分均逐漸升高，但實(shí)驗(yàn)組BBB評分均顯著高于對照組，表明丹參川穹嗪治療可顯著降低大鼠的脊髓損傷程度，促進(jìn)損傷的修復(fù)。

MEP是檢查運(yùn)動神經(jīng)系統(tǒng)功能的一項(xiàng)神經(jīng)電生理學(xué)檢查方法，廣泛用于運(yùn)動神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、術(shù)中監(jiān)護(hù)等。在脊髓損傷中，脊髓破壞越嚴(yán)重，前角運(yùn)動細(xì)胞損傷越多，則MEP潛伏期延長及波幅降低越顯著[7]。本研究結(jié)果顯示，干預(yù)第7、14及21 d時，兩組MEP潛伏期均逐漸降低，MEP波幅均逐漸升高，但實(shí)驗(yàn)組MEP潛伏期均低于對照組，MEP波幅均高于對照組；表明丹參川穹嗪可顯著改善大鼠運(yùn)動神經(jīng)系統(tǒng)功能。脊髓標(biāo)本觀察也證實(shí)，干預(yù)后第21 d，實(shí)驗(yàn)組傷區(qū)脊髓殘存面積顯著大于對照組，表明丹參川穹嗪可顯著減少大鼠傷區(qū)繼發(fā)性脊髓損傷。分析原因可能是[9]：（1）丹參川穹嗪具有較好的中樞神經(jīng)保護(hù)作用，能夠降低神經(jīng)細(xì)胞氧耗，盡量延長神經(jīng)細(xì)胞的生物活性；（2）丹參川穹嗪具有較好的抗氧自由基作用，能夠降低大鼠體內(nèi)SOD的含量，進(jìn)而降低過氧化物對神經(jīng)細(xì)胞的損害；（3）丹參川穹嗪能抑制脊髓損傷小鼠脊髓組織TNF-α，IL-1β和COX-2 mRNA的上調(diào)，顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和中性粒細(xì)胞浸潤，通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的作用，保護(hù)脊髓；（4）丹參川穹嗪能夠擴(kuò)展血管，改善受損區(qū)域血供，減少缺血缺氧帶來的繼發(fā)性損傷；（5）丹參川穹嗪促進(jìn)脊髓表達(dá)神經(jīng)營養(yǎng)素4（NT4）及酪氨酸激酶受體、促進(jìn)神經(jīng)絲蛋白（NF）及神經(jīng)營養(yǎng)因子（NGF、BDNF、NT3）的表達(dá)，促使受損的神經(jīng)元修復(fù)。

總之，丹參川穹嗪能夠顯著減少大鼠脊髓損傷后傷區(qū)的繼發(fā)性損傷，促進(jìn)脊髓下肢活動及神經(jīng)功能的恢復(fù)，可能成為治療脊髓損傷的藥物之一，有待臨床進(jìn)一步研究驗(yàn)證。