楊佩濃,虞義建,徐偉銘,張曉婷
(1.浙江省臺(tái)州醫(yī)院病理科,浙江 臺(tái)州 317000;2.臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院病理科,浙江 臺(tái)州 318050)
MicroRNA(miRNA)是內(nèi)源性非編碼RNA分子,由18~22個(gè)核苷酸組成,轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因的表達(dá)[1]。卵巢癌是婦科常見(jiàn)的腫瘤,是腫瘤致女性死亡的重要原因之一。我國(guó)卵巢癌的發(fā)病率約為4.91/10萬(wàn),且有逐年上升的趨勢(shì)[2]。近年來(lái),越來(lái)越多的研究表明,miRNA與卵巢癌的發(fā)病和發(fā)展密切相關(guān)[3-5],miRNA-124是近年來(lái)研究較多的miRNA之一,其在肝癌、胃癌、大腸癌、口腔癌和宮頸癌中表達(dá)水平下降,發(fā)揮著類(lèi)似抑癌基因的作用[6-8]。然而,miRNA-124在卵巢癌中的研究較少,本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)上皮性卵巢癌組織中miRNA-124的表達(dá)水平,分析了其與臨床病理特征的相關(guān)性,探討了其在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的作用,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
2013年2月至2014年11月在浙江省臺(tái)州醫(yī)院行手術(shù)治療的卵巢癌患者85例,所有患者術(shù)前均未接受過(guò)放化療,術(shù)后經(jīng)過(guò)病理檢查以明確診斷,排除因保存不當(dāng)而導(dǎo)致RNA降解的標(biāo)本。85例患者中,年齡35~71歲,平均(56.32±5.67)歲。按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟 (International Federation of Gynecology and Obstetrics,F(xiàn)IGO)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期[9],其中Ⅰ期11例,占12.94%;Ⅱ期23例,占27.06%;Ⅲ期44例,占51.76%;Ⅳ期7例,占8.23%。病例分級(jí)為G1期16例,占18.82%;G2期45例,占52.94%;G3期24例,占28.24%。另外,選取同期與卵巢癌患者年齡匹配的良性上皮卵巢腫瘤組織35例和正常卵巢組織45例作為對(duì)照,所有標(biāo)準(zhǔn)本均于液氮中保存。本研究已經(jīng)過(guò)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者均知情同意。
采用trizol法提取癌組織中的總RNA,使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(新海基因有限公司,貨號(hào):D1801)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA第一鏈,在以cDNA為模板,使用RT-PCR檢測(cè)試劑盒(上海信裕生物科技有限公司,貨號(hào):131042-25)檢測(cè)miRNA-124的表達(dá)水平。miRNA-124上游引物序列為5′-GCTAAGGC ̄ACGCGGTG-3′,下游引物序列為5′-GTGCA ̄GGGTCCGAGGT-3′;內(nèi)參照U6上游引物序列為5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′,下游引物序列為5′-ACGCTTCACGAATTTGC ̄GTGTC-3′(引物由天根生化科技有限公司設(shè)計(jì))。PCR反應(yīng)條件:第1步,95℃ 30s;第2步,95℃5s、60℃20s,共40個(gè)循環(huán)。PCR擴(kuò)增結(jié)束后,繪制熔解曲線,以2-ΔΔCt值表示miRNA-124的相對(duì)表達(dá)水平。
手術(shù)治療后對(duì)患者進(jìn)行隨訪,隨訪時(shí)間至2017年11月6日。采取門(mén)診隨訪和電話隨訪相結(jié)合,觀察患者的總體生存率和中位生存時(shí)間。
卵巢癌組織中miRNA-124相對(duì)表達(dá)量為2.35±1.11,良性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)量為5.13±2.01,正常組織中為6.29±2.12。采用單因素方差分析發(fā)現(xiàn),三組間的比較有明顯差異(F=8.371,P<0.001)。卵巢癌組織中miRNA-124相對(duì)表達(dá)量明顯低于良性卵巢腫瘤組織和正常組織(t值分別為7.123、11.650,均P<0.001);良性卵巢腫瘤組織中miRNA-124相對(duì)表達(dá)量低于正常組織(t=2.499,P=0.007,見(jiàn)圖1。
注:*與正常組織組比較,P<0.05;#與良性卵巢組織組比較,P<0.05。
圖1 miRNA的相對(duì)表達(dá)量
Fig.1 Relative expression of miRNA
臨床分期和組織分級(jí)越高,miRNA的相對(duì)表達(dá)量越低(P<0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,miRNA的相對(duì)表達(dá)量越低(P<0.05);組織學(xué)類(lèi)型與miRNA的相對(duì)表達(dá)量無(wú)關(guān)(P>0.05),見(jiàn)表1。
如圖2所示,高表達(dá)組的總生存率明顯高于低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.824,P=0.008)。低表達(dá)組中位生存期為(7.91±1.52)個(gè)月,95%CI:3.21~10.73;高表達(dá)組中位生存時(shí)間為(14.53±6.74)個(gè)月,95%CI:11.0~28.4,高表達(dá)組中位生存時(shí)間明顯較低表達(dá)量組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.053,P<0.001)。低表達(dá)組總生存時(shí)間為(28.67±5.01)個(gè)月,95%CI:2.45~9.24;高表達(dá)組總生存時(shí)間為(32.81±4.27)個(gè)月, 95%CI:2.01~6.69,高表達(dá)組總生存時(shí)間高于低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.112,P<0.001)。
圖2生存曲線
Fig. 2 Survival curve
miRNA在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能[10]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),miRNA在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用,并且對(duì)腫瘤的診斷和預(yù)后的判斷也有意義[11]。作為新型的分子標(biāo)志物,miRNA可用于惡性腫瘤的早期診斷和預(yù)后預(yù)測(cè),其具有廣闊的應(yīng)用前景[12-14]。既往研究發(fā)現(xiàn),miRNA-124是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中必不可少的miRNA之一[15-17],miRNA-124在多種腫瘤組織中的表達(dá)下降,并且對(duì)細(xì)胞的增值、分化、凋亡、遷移和侵襲起著重要作用[6-7,18]。舒錦等[19]發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中的miRNA-124表達(dá)量下降,在體外實(shí)驗(yàn)中,卵巢癌 SKOV3 細(xì)胞中 miR-124 過(guò)表達(dá)可明顯抑制細(xì)胞的增殖、 遷移和侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
miRNA可能為致癌基因,也可能是抑癌基因,可通過(guò)多個(gè)環(huán)節(jié)調(diào)控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,對(duì)腫瘤組織中miRNA表達(dá)量的檢測(cè)對(duì)疾病的早期診斷和治療有重要意義。本組研究中,臨床分期和組織分級(jí)越高,miRNA的相對(duì)表達(dá)量越低;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,miRNA的相對(duì)表達(dá)量越低;組織學(xué)類(lèi)型與miRNA的相對(duì)表達(dá)量無(wú)關(guān)。miRNA高表達(dá)組的總生存率明顯高于低表達(dá)組(P<0.05),且高表達(dá)量組中位生存時(shí)間明顯較低表達(dá)量組高(P<0.05)。上述研究結(jié)果表明,miRNA-124的相對(duì)表達(dá)量與腫瘤的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸有關(guān)。
綜上,本研究結(jié)果表明,上皮性卵巢癌組織中miRNA-124的相對(duì)表達(dá)量降低,提示其可能在卵巢癌的發(fā)病機(jī)制中起到抑癌基因的作用,另外,miRNA-124的表達(dá)量與卵巢癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸有關(guān)。本研究的局限性在于樣本量較小,且為單中心研究,miRNA-124的具體生物學(xué)機(jī)制需要進(jìn)一步研究。