林金海 陳曉佳 丁友玲

摘 要 在生產(chǎn)注射劑的原輔材料和工藝中常會(huì)混入細(xì)菌內(nèi)毒素，除去注射劑中的細(xì)菌內(nèi)毒素十分重要。本文對(duì)活性炭（供注射用）吸附細(xì)菌內(nèi)毒素的能力進(jìn)行了研究，結(jié)果表明活性炭（供注射用）可吸附液體中一定量的細(xì)菌內(nèi)毒素，使200和20 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素含量均下降2個(gè)數(shù)量級(jí)（吸附率達(dá)99%）。因此，使用活性炭（供注射用）吸附細(xì)菌內(nèi)毒素在注射劑生產(chǎn)中有一定的應(yīng)用意義和價(jià)值。

關(guān)鍵詞 細(xì)菌內(nèi)毒素 活性炭（供注射用） 吸附力

中圖分類號(hào)：R951； TQ460.64 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）21-0012-04

Study on the capacity of adsorption of bacterial endotoxin in liquid by activated charcoal （for injection）

LIN Jinhai， CHEN Xiaojia， DING Youling*

（Fuzhou Xinbei Biochemical Industrial Co.， Ltd.， Fuzhou 350101， China）

ABSTRACT Bacterial endotoxin is often mixed in the raw materials and in the process for the production of injectable drugs. It is crucial to eliminate the bacterial endotoxin in the injectable drugs. The capacity of adsorption of bacterial endotoxin by activated charcoal （for injection） in liquid was studies. The result showed that certain amount of bacterial endotoxin in liquid could be adsorbed by activated charcoal （for injection） and the contents of bacterial endotoxin in standard solution containing 200 and 20 EU/ml bacterial endotoxin could be decreased by two orders of magnitude （the adsorption rate reached 99%）. Therefore， the adsorption of bacterial endotoxin by activated charcoal （for injection） possesses application significance and value in the production of injectable drugs.

KEy WORDS bacterial endotoxin； activated charcoal （for injection）； adsorption capacity

活性炭（供注射用）無臭、無味、無砂性，具有純度高、過濾速度快等特性，具有優(yōu)良的脫色、凈化、純化等性能。本研究根據(jù)2015年版中國(guó)藥典四部藥用輔料中“活性炭（供注射用）”的要求，對(duì)活性炭吸附液體中細(xì)菌內(nèi)毒素的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)?；钚蕴浚ü┳⑸溆茫┧?xì)菌內(nèi)毒素的本底值<2 EU/g，其能吸附液體中一定量的細(xì)菌內(nèi)毒素，吸附率達(dá)99%，在注射劑生產(chǎn)中具有一定的應(yīng)用意義和價(jià)值。

1 材料和儀器

1.1 材料和試劑

活性炭（供注射用）（福建元力活性炭股份有限公司）；鱟試劑[福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)17030412，0.1 ml/支，靈敏度（λ）=0.03 EU/ml；批號(hào)17042312，0.1 ml/支，λ=0.06 EU/ml；批號(hào)17031612，0.1 ml/支，λ=0.25 EU/ml]；細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)150800-201601，10支/盒，9 000 EU/支）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（福州新北生化工業(yè)有限公司，批號(hào)17032021，100 ml/瓶）。

1.2 儀器

DK-600型電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；800型離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；SLGU033RB針頭式過濾器（默克密理博有限公司，批號(hào)R5PA67055，聚偏氟乙烯濾膜規(guī)格0.22 μm）；一次性醫(yī)用注射器（江蘇康友醫(yī)用器械有限公司）。其他如定量刻度移液管、試管等均按規(guī)定清洗、烘干并于250 ℃下干烤1 h，以除去熱原。

2 方法與結(jié)果

2.1 預(yù)備實(shí)驗(yàn)

2.1.1 鱟試劑λ考察

按照2015年版中國(guó)藥典四部通則1 143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”[1]，取鱟試劑并分別用0.1 ml的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水復(fù)溶，然后將各批復(fù)溶的鱟試劑分為4列，每列4支，再在各列中分別加入相應(yīng)的2λ、1λ、0.5λ和 0.25λ的細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品溶液，于（37±1）℃水浴中恒溫處理（60±2）min后取出觀察結(jié)果。另用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對(duì)照品。記錄結(jié)果，按式實(shí)測(cè)靈敏度（λc）=antilg（∑X/4）計(jì)算λc，結(jié)果見表1。

由表1可知，3個(gè)批號(hào)鱟試劑的λc均符合在0.5λ ～ 2λ范圍內(nèi)的要求，均可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以標(biāo)示的λ使用。

2.1.2 活性炭（供注射用）預(yù)處理

活性炭使用前通常需進(jìn)行必要的預(yù)處理，以確?；蛱岣咂湫в?。對(duì)活性炭（供注射用），使用前可于100 ～ 105 ℃下干燥5 h，然后移置干燥器中放冷30 min，以提高其除熱原能力。

2.1.3 活性炭溶液干擾實(shí)驗(yàn)

精確稱取75.0 mg已預(yù)處理過的活性炭（供注射用）至試管中，加入5 ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，鋁箔紙封口后置旋渦混合器上混合9 min，然后于1 500 r/min下離心5 min，用一次性醫(yī)用注射器吸取上清液，并選用0.22μm的無熱原濾膜過濾上清液，得濃度（C）=0.015 g/ ml的活性炭溶液[2]。按2015年版中國(guó)藥典四部通則1 143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中“干擾實(shí)驗(yàn)”項(xiàng)所述，使用鱟試劑（λ=0.03、0.06和0.25 EU/ml）對(duì)C=0.015 g/ ml的活性炭溶液進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。

由表2可知，干擾實(shí)驗(yàn)的Es/Et均在0.5 ～ 2.0范圍內(nèi)，表明C=0.015 g/ml的活性炭溶液對(duì)鱟試劑（λ=0.03、 0.06和0.25 EU/ml）無干擾作用。

2.2 活性炭（供注射用）所含細(xì)菌內(nèi)毒素本底值（活性炭溶液細(xì)菌內(nèi)毒素）檢查

C=0.015 g/ml的活性炭溶液的細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)<2 EU/g，即限值為2 EU/g[2]。選用λ=0.03 EU/ml的鱟試劑檢查時(shí)，最大有效稀釋倍數(shù)=C×限值/λ=1。按2015年版中國(guó)藥典四部通則1 143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。

由表3可知，陽(yáng)性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陽(yáng)性，陰性對(duì)照品和陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，判定實(shí)驗(yàn)有效。鑒于陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，表明細(xì)菌內(nèi)毒素含量<0.03 EU/ml，即活性炭（供注射用）中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量<2 EU/g，符合2015年版中國(guó)藥典四部藥用輔料“活性炭（供注射用）”中對(duì)其所含細(xì)菌內(nèi)毒素本底值的要求。

2.3 活性炭（供注射用）吸附細(xì)菌內(nèi)毒素能力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

2.3.1 供試品溶液Ⅰ、Ⅱ的制備

取9 000 EU/支的細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品1支，分別制備200和20 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確稱取2份75.0 mg已預(yù)處理過的活性炭（供注射用）并分置2支試管中，然后分別加入5 ml的200 EU/ml和5 ml的20 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成活性炭濃度為0.015 g/ml的混合液，旋渦混合9 min后于1 500 r/min下離心處理5 min，取上清液，用0.22 μm的無熱原濾膜過濾上清液，得供試品溶液Ⅰ、Ⅱ[2]。

2.3.2 供試品溶液Ⅰ的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

對(duì)供試品溶液Ⅰ，選用λ=0.25 EU/ml的鱟試劑檢查細(xì)菌內(nèi)毒素，最大有效稀釋倍數(shù)=C×限值/λ=8。按2015年版中國(guó)藥典四部通則1 143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4。

由表4可知，陽(yáng)性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陽(yáng)性，陰性對(duì)照品和陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，判定實(shí)驗(yàn)有效。鑒于陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，表明濃度為200 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素含量下降了2個(gè)數(shù)量級(jí)（吸附率達(dá)99%），符合2015年版中國(guó)藥典四部藥用輔料“活性炭（供注射用）”中對(duì)其細(xì)菌內(nèi)毒素吸附力的要求。

2.3.3 供試品溶液Ⅱ的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

對(duì)供試品溶液Ⅱ，選用λ=0.06 EU/ml的鱟試劑檢查細(xì)菌內(nèi)毒素，最大有效稀釋倍數(shù)=C×限值/λ=3.2。將供試品溶液Ⅱ稀釋3倍，按2015年版中國(guó)藥典四部通則1 143“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5。

由表5可知，陽(yáng)性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陽(yáng)性，陰性對(duì)照品和陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，判定實(shí)驗(yàn)有效。鑒于陰性對(duì)照供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均為陰性，表明濃度為20 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素含量下降了2個(gè)數(shù)量級(jí)（吸附率達(dá)99%），符合2015年版中國(guó)藥典四部藥用輔料“活性炭（供注射用）”中對(duì)其細(xì)菌內(nèi)毒素吸附力的要求。

3 結(jié)語(yǔ)

本研究對(duì)活性炭（供注射用）吸附細(xì)菌內(nèi)毒素的能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果表明活性炭（供注射用）對(duì)鱟試劑無干擾作用，且其能吸附細(xì)菌內(nèi)毒素，使?jié)舛葹?00和20 EU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素含量均下降2個(gè)數(shù)量級(jí)（吸附率達(dá)99%），符合2015年版中國(guó)藥典四部藥用輔料“活性炭（供注射用）”中對(duì)其細(xì)菌內(nèi)毒素吸附力的要求。使用活性炭（供注射用）吸附細(xì)菌內(nèi)毒素在注射劑生產(chǎn)中有一定的應(yīng)用意義和價(jià)值。當(dāng)然，在注射劑生產(chǎn)中應(yīng)盡量不使用活性炭（供注射用），以防活性炭（供注射用）本身及其中的殘留物影響注射劑的質(zhì)量。但若注射劑中的細(xì)菌內(nèi)毒素難以用其他方法除去時(shí)，使用活性炭（供注射用）吸附可能是一個(gè)選項(xiàng)。

參考文獻(xiàn)

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