(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科,吉林 長春 130021)
類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是常見的系統(tǒng)性自身免疫性疾病,以滑膜炎和血管炎為主要病理特點[1-2]。近年來,隨著對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的深入研究,發(fā)現(xiàn)高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein1, HMGB1)是新型的人類慢性關(guān)節(jié)炎相關(guān)炎癥介質(zhì)[3]。HMGB1具有介導(dǎo)致死性全身炎癥反應(yīng)的“晚期”炎癥介質(zhì)作用,可表達在細胞核及釋放于血清中[4-5]。因此,認為HMGB1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[6]。本文研究旨在探討HMGB1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的表達。
選取2017年5月-2018年5月在吉林大學(xué)第一醫(yī)院行關(guān)節(jié)置換術(shù)或滑膜清理術(shù)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者49例作為研究組。其中,男性18例,女性31例;年齡36~72歲,平均(53.42±6.47)歲。另選取該院同期行手術(shù)治療的骨關(guān)節(jié)炎患者30例作為對照組。其中,男性11例,女性19例;年齡39~71歲,平均(54.83±7.25)歲。所有研究對象經(jīng)本院倫理委員會審核,且獲得知情同意,簽訂知情同意書。
1.2.1 血清標(biāo)本采集 所有研究對象入院后第3天清晨空腹采集外周靜脈血,分離血清,離心半徑15 cm,2 500 r/min離心10 min,置于-20℃待測,采用酶聯(lián)免疫吸附法測定HMGB1含量,嚴(yán)格按照人HMGB1試劑盒(上海晶抗生物工程有限公司)說明書進行操作。
1.2.2 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(streptavidin-perosidase, SP)法 取保存的所有研究對象的病損關(guān)節(jié)滑膜組織石蠟病理切片標(biāo)本,嚴(yán)格按照說明書進行操作,DAB顯色,蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封固。HMGB1單克隆抗體(美國RD公司),HMGB1一抗工作濃度1∶40,二抗即為免疫組織化學(xué)HistostainTM染色試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。每張切片取5個400倍視野,由本院2名資深病理科醫(yī)生采用盲法評分。HMGB1表達主要在細胞核,染色評分標(biāo)準(zhǔn):①3分,染色呈棕褐色;②2分,染色呈黃色;③1分,染色呈淡黃色;④0分,無染色。陽性細胞率評分標(biāo)準(zhǔn):①4分,陽性細胞率>75%;②3分,陽性細胞率51%~75%;③2分,陽性細胞率為26%~50%;④1分,陽性細胞率≤25%;⑤0分,無陽性細胞。
數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用t檢驗;計數(shù)資料以率表示,比較用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
兩組血清HMGB1水平比較,經(jīng)t檢驗,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),研究組高于對照組。兩組HMGB1陽性表達率比較,經(jīng)χ2檢驗,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),研究組高于對照組。兩組SP法染色評分比較,經(jīng)t檢驗,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),研究組高于對照組。見附表和附圖。
附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽性表達率及SP法染色評分比較 (±s)
附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽性表達率及SP法染色評分比較 (±s)
組別 HMGB1/(ng/ml)HMGB1陽性表達率/% 染色評分研究組(n =49) 17.83±2.17 41(83.67) 6.73±0.91對照組(n =30) 7.27±0.93 14(46.67) 2.13±0.54 t/χ2值 25.225 12.049 25.079 P值 0.000 0.000 0.000
附圖 兩組滑膜組織HMGB1的表達
類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)涉及關(guān)節(jié)局部和全身癥狀,而其病理改變中關(guān)節(jié)損傷最常見的[7]。目前,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具體發(fā)病機制尚不清楚,發(fā)現(xiàn)自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的免疫功能紊亂和炎癥因子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[8-9]。
HMGB1是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型晚期炎癥因子,廣泛存在于真核細胞內(nèi),并在大部分真核細胞中表達豐富[10-11]。HMGB1主要由215個氨基酸殘基組成,具有雙重職能,當(dāng)機體細胞處于穩(wěn)態(tài)時其主要存在于細胞核,其功能主要為結(jié)合DNA參與穩(wěn)定核小體,可調(diào)節(jié)DNA復(fù)制、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄等[12]。遇到外界相應(yīng)的信號刺激時,HMGB1通過活化的免疫細胞主動分泌到胞外,并且有受損及壞死的細胞被動釋放到胞外而發(fā)揮生物學(xué)活性[13]。HMGB1通過與受體相互作用,包括TLR2、TLR4、RAGE及其他協(xié)同作用的炎癥介質(zhì)共同引起反應(yīng),包括維持和啟動下游級聯(lián)式炎癥反應(yīng),以及激活相關(guān)信號通路等。越來越多研究表明,HMGB1以其免疫刺激性和促炎性作為發(fā)病源促進自身免疫性疾病和慢性炎癥性疾病的發(fā)展,在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病進程中發(fā)揮重要作用[14-15]。PALMLAD等[16]研究顯示,在CIA大鼠血管內(nèi)皮細胞、滑膜成纖維細胞、巨噬細胞及細胞外間隙中HMGB1呈高表達。徐力等[17]研究報道,活動期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1水平高于正常對照組和緩解期組,且與紅細胞沉降率、類風(fēng)濕因子和C反應(yīng)蛋白呈正相關(guān)。體外實驗研究顯示,HMGB1可對多種細胞產(chǎn)生作用,并且其破骨細胞生成過程中可有破骨細胞及其前體細胞產(chǎn)生,且作用于本身刺激破骨細胞分化成熟[18]。動物實驗研究中,在顯微鏡下給予重組HMGB1蛋白于大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,結(jié)果顯示可導(dǎo)致關(guān)節(jié)輕、中度滑膜,同時使用重組HMGB1boxA蛋白或HMGB1抗體干預(yù)原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎動物模型后,其滑膜炎癥有所緩解,由此可見,HMGB1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中起重要作用[19]。本研究中研究組血清HMGB1水平高于對照組,說明類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1水平升高;研究組HMGB1陽性表達率高于對照組,說明類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者HMGB1呈高表達。
綜上所述,HMGB1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中高表達,其可能在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組織損傷發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用,可作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎輔助診斷指標(biāo)之一。