隋思博 鄭佩新

【摘要】水楊酸甲酯系由水楊酸與甲醇在硫酸催化下酯化反應(yīng)合成制得。主要雜質(zhì)有：水楊酸、甲醇、苯酚、4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯。水楊酸的來(lái)源：酯化反應(yīng)的主要原料，反應(yīng)不完全或堿洗不徹底導(dǎo)致；甲醇的來(lái)源：酯化反應(yīng)的主要原料，堿洗、水洗難全洗去；苯酚的來(lái)源：引入途經(jīng)有2個(gè)分別為原料水楊酸帶入或酯化反應(yīng)時(shí)溫度偏高時(shí)產(chǎn)生；4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯的來(lái)源：原料水楊酸雜質(zhì)4-羥基間苯二甲酸和4-羥基間苯甲酸酯化反應(yīng)而得。

【關(guān)鍵詞】水楊酸甲酯；藥品檢驗(yàn)；有關(guān)物質(zhì)

【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2018.29..02

衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品及制劑第一冊(cè)WS1-07-（B）-89為1989年制定，標(biāo)準(zhǔn)比較陳舊，未對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，YBH03002004是2004年批復(fù)的試行標(biāo)準(zhǔn)，其中有關(guān)物質(zhì)只是針對(duì)水楊酸，而未考慮到合成工藝中其他雜質(zhì)，鑒于苯酚和4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯是合成中實(shí)際存在的雜質(zhì)需要檢測(cè)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥

島津LC-2010CHT高效液相色譜儀，Agilent1200高效液相色譜儀，Sartorius BT25S電子天平，苯酚對(duì)照品批號(hào)：1000509-200401，甲醇，超純水等。

1.2 試驗(yàn)條件

以博納艾杰爾色譜柱（Agela ASB-C18 4.6×250 mm，

5 ?m），以甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。流速：1.0 mL/min，柱溫：35℃，進(jìn)樣量：20 ?L，理論板數(shù)按水楊酸甲酯峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，苯酚峰與水楊酸甲酯峰的分離度應(yīng)大于2.0。

1.2 溶液

精密稱取0.5 g供試品，用甲醇溶解于100 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

精密稱取苯酚對(duì)照品20 mg，用甲醇溶解于200 mL量瓶中，制成每1 mL中約含0.1 mg溶液，精密量取1 mL，置

100 mL量瓶中，再精密加入供試品溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。注入液相色譜儀。記錄色譜圖，即得。

1.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取苯酚對(duì)照品溶液，在200 nm～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，供試品經(jīng)DAD掃描確定270 nm下檢測(cè)到的雜質(zhì)峰最多，同時(shí)參考《中國(guó)藥典》2010版二部水楊酸的有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下雜質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)為

270 nm，故將有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)定為270 nm。

2 專屬性試驗(yàn)

取甲醇按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果溶劑峰對(duì)主成分峰的測(cè)定無(wú)干擾。

2.1 破壞性試驗(yàn)

2.1.1 氧化破壞

取水楊酸甲酯（批號(hào)：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入30%過(guò)氧化氫溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時(shí)后，放冷，加甲醇并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.2 酸破壞

取水楊酸甲酯（批號(hào)：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時(shí)后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.3 堿破壞

取水楊酸甲酯（批號(hào)：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時(shí)后，加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.4 加熱破壞

取水楊酸甲酯（批號(hào)：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，置水浴中加熱1小時(shí)后，放冷，室溫放置12小時(shí)后，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.2 小結(jié)

經(jīng)過(guò)破壞試驗(yàn)，新增雜質(zhì)較少，表明選定方法的專屬性較好，可用于水楊酸甲酯的有關(guān)物質(zhì)檢查。

3 線性關(guān)系考察

分別精密量取上述苯酚對(duì)照品溶液，按相同色譜條件，分別精密量取5，10，20，30，40 ?L注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得到苯酚含量測(cè)定的回歸方程，見(jiàn)表1。

回歸方程y = 884.99x +1716.4 ，r = 0.9956，苯酚量在5.365～42.92ng 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4 精密度試驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下配制的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量為21.46 ng，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD%，見(jiàn)表2。

5 最小定量限和最小檢出限

苯酚及水楊酸甲酯的最小檢出限和最小定量限見(jiàn)表3。

6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

去上述供試品溶液，每間隔一定的時(shí)間，精密量取20 ?L注入液相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)表4。主峰及雜質(zhì)總量均未發(fā)生顯著變化，表明24小時(shí)內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較好。

7 限度確定

苯酚對(duì)皮膚、粘膜有強(qiáng)烈的腐蝕作用，可抑制中樞神經(jīng)或損害肝、腎功能，應(yīng)嚴(yán)格控制其雜質(zhì)量，經(jīng)檢測(cè)，佛山市南海中南藥化廠6批樣品（近效期3批和最近生產(chǎn)樣品3批）的苯酚含量在0.02%以內(nèi)；華陰市錦前程藥業(yè)過(guò)效期3批樣品苯酚含量為0.02%，其他3批最近生產(chǎn)樣品的苯酚含量超過(guò)0.02%；國(guó)內(nèi)某化工廠樣品的苯酚含量也超過(guò)0.02%；綜合上述結(jié)果，參考中國(guó)藥典2010版二部水楊酸中有關(guān)物質(zhì)，將苯酚的限度定為0.02%。4-羥基間苯二甲酸二甲酯廠家提供了自己提純得到的對(duì)照品（含量99.0%以上），12批樣品經(jīng)測(cè)定含量均低于0.02%，鑒于中檢所無(wú)對(duì)照品不利于雜質(zhì)的具體定量，故擬定標(biāo)準(zhǔn)中將其列入其他雜質(zhì)中，限度規(guī)定為其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照品溶液中水楊酸甲酯峰峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照品溶液中水楊酸甲酯峰峰面積（1.0%），12批樣品的單個(gè)雜質(zhì)峰面積及總雜質(zhì)峰面積和均符合規(guī)定。

本文編輯：趙小龍