李詩(shī)韻

(廣東省第二人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510317)

近年來(lái)惡性腫瘤的發(fā)病率與死亡率不斷攀升，癌癥已成為威脅人類健康的第一殺手。從全球來(lái)看，因發(fā)展中國(guó)家人民生活水平普遍不高，癌癥的發(fā)生無(wú)疑給患者及其家屬帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)也給社會(huì)帶來(lái)了不安定因素，已成為一個(gè)突出的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。布洛芬屬于非甾體類抗炎藥，臨床上常用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)制性脊椎炎等疾病，屬于非選擇性非甾體類抗炎藥，可抑制環(huán)氧合酶-2(COX-2)，同時(shí)對(duì)環(huán)氧合酶-1(COX-1)也有較強(qiáng)的抑制作用[2]。近年來(lái)多項(xiàng)研究顯示非甾體類抗炎藥物抗腫瘤作用與抑制COX-2的活性有關(guān)。研究表明，COX-2在腫瘤組織中的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織，可誘導(dǎo)腫瘤的生成，增強(qiáng)腫瘤的抗凋亡作用，同時(shí)還可促進(jìn)新生血管的生成，為腫瘤的侵襲及遷移創(chuàng)造條件[3]。臨床研究顯示，長(zhǎng)期服用布洛芬可降低患者前列腺癌、結(jié)直腸癌等癌癥的風(fēng)險(xiǎn)[4]，但對(duì)于結(jié)腸癌、胃癌及食管癌的研究卻并不多見(jiàn)。本文旨在研究布洛芬在人胃癌細(xì)胞株HGC-27、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29和人食管癌細(xì)胞株EC109中的抗腫瘤作用進(jìn)行研究，為布洛芬在抗結(jié)腸癌、胃癌及食管癌的研究提供一定的參考，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：人食管癌細(xì)胞株EC109、人胃癌細(xì)胞株HGC-27、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)。無(wú)菌PBS、DMEM高湯培養(yǎng)液、胎牛血清均由美國(guó)Hyclon公司生產(chǎn)，胰酶與雙抗由上海吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司生產(chǎn)，F(xiàn)oma CO2培養(yǎng)箱由美國(guó)賽默飛世爾公司生產(chǎn)，純度為99%的布洛芬由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)：EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞均置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中，用DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，2 mmol/L的L-谷氨酰胺，100 U/ml青霉素，100 mg/L鏈霉素)進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)傳代。

1.2.2MTT實(shí)驗(yàn)：將傳代3～4代后的細(xì)胞以2 000個(gè)/孔的數(shù)量鋪種于96孔板中，待細(xì)胞貼壁良好后，密度達(dá)50%滿度左右開(kāi)始轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后5 h更換為不同濃度(0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)的布洛芬溶液；另設(shè)陰性對(duì)照組EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞均加入無(wú)菌生理鹽水，并在分別處理0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h后檢測(cè)細(xì)胞增殖率。將5×MTT用培養(yǎng)基稀釋成1×MTT，每孔加入20 μl，在37℃孵育4 h；吸出上清液，每孔加入200 μl DM-SO，用平板搖床搖勻；570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(OD值)。細(xì)胞抑制率=(陰性對(duì)照組OD值-給藥細(xì)胞OD值/對(duì)照細(xì)胞OD值)×100%。本試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：將EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞分別鋪滿2個(gè)6孔培養(yǎng)板培養(yǎng)液分為含有布洛芬(0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)和不含布洛芬，待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)滿后用200 μl槍頭在每個(gè)6孔板中央垂直作一條相同寬度的劃痕，用PBS清洗3遍，更換為無(wú)血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h。結(jié)果以24 h后細(xì)胞覆蓋區(qū)域占起始劃痕面積的百分比表示。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩兩對(duì)比采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，均以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1布洛芬對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用對(duì)比：不同濃度布洛芬處作用于EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞株處理0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h后，與0 mmol/L濃度布洛芬相比，三種腫瘤細(xì)胞抑制率均明顯上升，且不同培養(yǎng)時(shí)間均在2 mmol/L時(shí)抑制率最大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EC109的最佳培養(yǎng)時(shí)間為120 h，HGC-27最佳培養(yǎng)時(shí)間為72 h，HT29的最佳培養(yǎng)時(shí)間為96 h。結(jié)果見(jiàn)圖1～3。

2.2布洛芬對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的遷移能力影響對(duì)比：不同濃度布洛芬對(duì)EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞的遷移均有明顯的抑制作用，且隨著濃度的增加，腫瘤細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量逐漸減少，與陰性對(duì)照相比0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L均能明顯抑制EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞的遷移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

組別給藥劑量EC109 細(xì)胞數(shù) 抑制(%) HGC-27 細(xì)胞數(shù) 抑制率(%) HT29 細(xì)胞數(shù) 抑制率(%) 陰性對(duì)照組0 mmol/L48.19±9.410.0046.82±10.030.0047.92±8.790.00給藥組0.5 mmol/L39.04±10.71①24.0133.18±7.18①29.2732.39±9.02①30.111 mmol/L29.41±11.04①40.6327.61±6.92①43.1926.23±6.18①44.022 mmol/L23.79±8.69①52.9621.04±6.14①62.4719.58±5.83①64.91

注：與陰性對(duì)照組比較，①P<0.05

圖1 布洛芬對(duì)EC109細(xì)胞的抑制作用

圖2 布洛芬對(duì)HGC-27的抑制作用

圖3 布洛芬對(duì)HT29的抑制作用

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的非甾體抗炎藥藥物被發(fā)現(xiàn)有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，阿司匹林、布洛芬、塞來(lái)昔布等一線的非甾體抗炎藥均具有一定的抗癌作用，其作用機(jī)制各不相同。目前對(duì)于布洛芬前列腺癌、直腸癌的作用方面已有文獻(xiàn)報(bào)道，研究顯示大部分的非甾體類抗炎藥物抗腫瘤作用與Survivin因子的表達(dá)有關(guān)[5]。

本文采用MTT法檢測(cè)了不同濃度的布洛芬對(duì)EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞增殖活性的影響，結(jié)果顯示布洛芬對(duì)以上三種腫瘤細(xì)胞株的增殖均有明顯的抑制作用，不同濃度布洛芬處作用于EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞株處理0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h后，與0 mmol/L濃度布洛芬相比三種腫瘤細(xì)胞抑制率均明顯上升，且不同培養(yǎng)時(shí)間均在2 mmol/L時(shí)抑制率最大(P<0.05)，表明布洛芬對(duì)EC109、HGC-27、HT29有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，且在2 mmol是抗腫瘤活性最強(qiáng)。同時(shí)另外本文還用劃痕試驗(yàn)就布洛芬對(duì)EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞的遷移抑制作用進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，隨著濃度的增加，腫瘤細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量逐漸減少，與陰性對(duì)照組相比，0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L均能明顯抑制EC109、HGC-27、HT29細(xì)胞的遷移(P<0.05)，提示布洛芬對(duì)可有效抑制以上三種腫瘤細(xì)胞的遷移，且該作用與藥物的濃度呈正相關(guān)關(guān)系。研究顯示慢性炎性反應(yīng)對(duì)腫瘤的起源和進(jìn)展均有明顯的影響，慢性炎性反應(yīng)可產(chǎn)生環(huán)氧和酶(COX)與前列腺素(PG)而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生而產(chǎn)生大量的炎性因子，炎性因子可導(dǎo)致細(xì)胞黏附加快、DNA損傷和突變，同時(shí)對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有較強(qiáng)的促進(jìn)作用[6]。布洛芬屬于廣譜的非甾體類抗炎藥物，其抗腫瘤作用可能與上述因素有關(guān)。

布洛芬對(duì)人胃癌細(xì)胞株HGC-27、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29和人食管癌細(xì)胞株EC109的增殖和遷移作用影響的研究國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。本文結(jié)果顯示布洛芬對(duì)EC109、HGC-27、HT29有抑制增殖和遷移作用，且與劑量呈正相關(guān)關(guān)系，具有較大的應(yīng)用價(jià)值。下一步，將對(duì)其作用機(jī)制及靶點(diǎn)進(jìn)行深入研究，為布洛芬抗腫瘤的臨床應(yīng)用提供參考。