劉雪嬌，劉超蘭，王李，章宇丹，張小輝，李麗，付宇

(1.四川理工學(xué)院 生物工程學(xué)院，四川 自貢 643000；2.四川理工學(xué)院 管理學(xué)院，四川 自貢 643000；3.成都大學(xué)抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川抗菌素工業(yè)研究所，成都 610052)

川南曬醋屬于我國(guó)“四大名醋”之一的四川麩醋，它是以麩皮、大米為主要原料，沿用歷史傳統(tǒng)秘方的釀制技藝，經(jīng)蒸煮、發(fā)酵、日曬(其醋坯和成品醋均經(jīng)日光暴曬)、陳釀4大工藝流程，20多道工序制成，故簡(jiǎn)稱“曬醋”，其產(chǎn)品色澤黑褐，無(wú)沉淀，香氣芬芳，具有酸味醇厚、微甜爽口、回味悠長(zhǎng)、久存不腐的特點(diǎn)。由于所處的地域、自然環(huán)境的不同，使得川南各大曬醋之間在口味、色澤、文化傳承等方面也各具特色。

眾所周知，曬醋有許多功能特性，如抗菌、殺菌作用，緩解疲勞，有助于脂質(zhì)代謝，抗氧化，抗衰老，美容，抗癌，防癌，促進(jìn)食欲，預(yù)防骨質(zhì)疏松等功能特性。醋的理化指標(biāo)和功能性成分決定著醋的品質(zhì)，也決定著它的發(fā)展方向，對(duì)于曬醋行業(yè)的發(fā)展有著非常重要的意義。就目前的文獻(xiàn)報(bào)道來(lái)看，大多數(shù)學(xué)者都集中在曬醋的某一方面功能特性的研究，還未對(duì)曬醋的功能性進(jìn)行全面的研究。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)川南曬醋的功能性進(jìn)行系統(tǒng)的分析，為川南曬醋的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

川南曬醋：購(gòu)于超市，等級(jí)為一級(jí)，分別命名為1，2，3，4，5，6，7，8號(hào)；氫氧化鈉、鄰苯二甲酸氫鉀、酚酞指示液、葡萄糖、亞鐵氰化鉀、酒石酸鉀鈉、濃鹽酸、硫酸銅、次甲基藍(lán)、福林酚試劑、沒(méi)食子酸、碳酸鈉、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、亞硝酸鈉、硝酸鋁、DPPH試劑、無(wú)水乙醇、5-磺基水楊酸、磷酸二氫鈉、磷酸、95%的乙醇、草酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、氯化鈉：購(gòu)于成都科龍化工試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

L-8900型全自動(dòng)氨基酸分析儀、TY10CR22G Ⅱ型高速冷凍離心機(jī) 日本Hitachi公司；1100型高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、7890型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)Agilent；恒溫干燥箱 上海一凱儀器設(shè)備有限公司；SPME微量進(jìn)樣器 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 總酸的測(cè)定

參考標(biāo)準(zhǔn)GB/T 12456-2008。

1.3.2 還原糖的測(cè)定

斐林試劑滴定法[1]。

1.3.3 總酚的測(cè)定

Folin-Ciotalteu法[2]。

1.3.4 總酮的測(cè)定

Al(NO3)3-NaNO2-NaOH體系比色法測(cè)定總黃酮含量[3]。

1.3.5 DPPH清除自由基的測(cè)定

DPPH清除自由基測(cè)定法，參見(jiàn)文獻(xiàn)[4]。

1.3.6 游離氨基酸的測(cè)定

全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定[5]。

1.3.7 有機(jī)酸測(cè)定

高效液相色譜法測(cè)定[6]。

1.3.8 揮發(fā)性物質(zhì)的測(cè)定

頂空固相平衡微萃取-GC/MS聯(lián)用測(cè)定[7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 總酸、還原糖檢測(cè)分析

圖1 總酸、總糖含量 Fig.1 Total acid and total sugar content

由圖1可知，實(shí)驗(yàn)所探究的8種醋樣還原糖含量范圍為2.7～3.3 g/dL，完全達(dá)到國(guó)標(biāo)≥1.5 g/dL的要求?？偹岷糠秶鸀?.2～7.0 g/dL。還原糖含量和總酸含量存在一定的比例關(guān)系，可推斷出曬醋的味感與曬醋中酸糖含量比例有著一定的關(guān)系。

2.2 總酚和總黃酮結(jié)果分析

以沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo)(x),OD765 nm為縱坐標(biāo)(y)，繪制沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：y=0.00649+0.13914x，相關(guān)系數(shù)R2=0.99366，總酚濃度在0～2.5 μg/mL范圍內(nèi)吸光度呈良好線性關(guān)系。

以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD510 nm為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：y=0.01327+0.01425x，相關(guān)系數(shù)R2=0.99874，總酚濃度在0～48 μg/mL范圍內(nèi)吸光度呈良好線性關(guān)系。

表1 總酚和總黃酮含量Table 1 Total phenol and total flavone content

由表1可知，實(shí)驗(yàn)所探究的8種醋樣總酚含量范圍為3.1～4.0 mg/mL，總黃酮范圍為1.0～1.2 mg/mL，8種醋樣的總酚含量和總酮含量相差范圍在0～0.9 mg/mL內(nèi)。

2.3 自由基測(cè)定結(jié)果

圖2 去除自由基能力Fig.2 The ability of removing free radicals

由圖2可知，取液量在0.002 mL的各種曬醋的自由基清除率在30%左右，其中8號(hào)的清除率為34.5%，在8種曬醋中清除率最高。其中2號(hào)的清除率為26.9%，是8種曬醋中最低的。

2.4 游離氨基酸測(cè)定結(jié)果

表2 游離氨基酸分析結(jié)果Table 2 Analysis results of free amino acids

由表2可知，曬醋中游離氨基酸的種類多，多種氨基酸給曬醋提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，且賦予曬醋不同的風(fēng)味和口感。其中絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、賴氨酸賦予了曬醋甜味；組氨酸、色氨酸、精氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸和亮氨酸賦予了曬醋特殊的苦味；天冬氨酸和谷氨酸賦予曬醋獨(dú)特的酸味。

2.5 有機(jī)酸測(cè)定結(jié)果

2.5.1 混合酸標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

根據(jù)不同質(zhì)量濃度的檸檬酸、酒石酸、草酸、富馬酸、蘋果酸進(jìn)行高效液相色譜分析結(jié)果，以有機(jī)酸的含量為橫坐標(biāo)，有機(jī)酸的峰面積為縱坐標(biāo)制作其標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以得到5種有機(jī)酸的線性回歸方程見(jiàn)表3。

表3 有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液線性回歸方程Table 3 Linear regression equation of organic acid standard solution

由表3可知，實(shí)驗(yàn)所得的相關(guān)系數(shù)R2值在0.9954～0.9993之間，說(shuō)明該方法的檢測(cè)效果可行度高。

2.5.2 8種曬醋中有機(jī)酸含量

表4 有機(jī)酸的含量Table 4 Organic acids' content mg/mL

由表4可知試驗(yàn)中5種有機(jī)酸在各個(gè)曬醋中的含量。本試驗(yàn)中選取的8種曬醋均含有上述5種有機(jī)酸。在8種曬醋中，各個(gè)醋的有機(jī)酸含量都各不相同，不同有機(jī)酸的不同比例構(gòu)成了各種曬醋不同的風(fēng)味和口感。在曬醋中，有機(jī)酸的含量雖然不多，但有機(jī)酸的存在避免了曬醋中醋酸的刺激感，使得曬醋的酸味更悠長(zhǎng)，給人的味感更為可口。

2.6 揮發(fā)性成分的測(cè)定結(jié)果

表5 揮發(fā)性成分檢測(cè)結(jié)果Table 5 Test results of volatile components

續(xù) 表

續(xù) 表

注：“+”表示該物值在某醋中含有。

由表5可知，8種曬醋中共含有101種揮發(fā)性物質(zhì)，其中烷類11種，醛類10種，酯類23種，酸類11種，醇類16種，酚類7種，酮類5種，吡嗪類6種，呋喃類3種，烯類1種，唑類3種，醚類和酰類各2種，吡啶類1種。其中烷類、醛類、酯類、酸類、醇類、酚類和酮類8種曬醋中都含有，而吡嗪類、呋喃類、烯類、唑類、醚類、酰類、吡啶類、吡咯類、蒽類、胺類、苯類和油類只有部分曬醋中才含有。

3 結(jié)論

本研究對(duì)曬醋中功能特性進(jìn)行了分析，結(jié)果表明：曬醋中各成分含量較高，且都達(dá)到了國(guó)標(biāo)的要求。川南曬醋各成分含量豐富，且都達(dá)到了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其中還原糖、總酸、總酚和總黃酮含量都分別達(dá)到了2.7～3.3 g/dL，5.2～7.0 g/dL,3.1～4.0 mg/mL，1.0～1.2 mg/mL；DPPH自由基清除率在30%左右；游離氨基酸17種，有機(jī)酸5種；曬醋中揮發(fā)性成分中酯類、醇類、酸類、吡嗪類分別為23，16，11，6種，為曬醋的研究奠定了理論基礎(chǔ)。